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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吕琼霞 张书霞 赵茹茜
为研究运输应激对猪肠系膜淋巴结中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA转录的影响,并探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和核因子κB(NF-κB)对其转录的调控作用,用荧光定量RT-PCR方法对肠系膜淋巴结中3种细胞因子及其受体mRNA进行定量检测,用ELISA方法检测猪肠系膜淋巴结组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化,用激光扫描共聚焦显微镜观察运输前后NF-κB在肠系膜淋巴结细胞中的分布。结果显示:经1、2和4 h的运输应激,肠系膜淋巴结中3种细胞因子的转录均发生了显著变化,且均是4 h时达到最大值,并极显著高于对照组、1 h组和2 h组(P<0.01),而其相应受体的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
吕琼霞 张书霞 赵茹茜
【目的】探讨不同时间运输应激对猪脾脏中IL-2mRNA、IL-6mRNA、IL-10mRNA及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA表达的影响,并探讨P38MAPK-NF-κB信号途径对其表达的调控作用。【方法】将19头体重50kg左右的猪随机分为4组,分别进行0、1、2和4h公路运输,运输结束后立即扑杀取脾脏,液氮保存,用荧光定量PCR的方法对3种细胞因子及其IL-2RmRNA、IL-6RmRNA进行定量;另用ELISA方法检测试验猪脾脏组织匀浆液中P38MAPK含量的动态变化;激光扫描共聚焦显微镜观察NF-κB运输前后在脾脏细胞中的分布。【结果】经1、2和4h的运输应激后,脾脏中IL-1...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈耿 张书霞 华利忠
为了解猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus Ⅱ,PCV2)引起仔猪免疫抑制的机制,研究了胸腺中抗感染免疫相关基因的动态表达变化及其调控机制。选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分别在感染后0、14、21和35 d扑杀采集胸腺。用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,用比色法检测总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,用TQ-PCR方法检测胸腺中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA的表达变化。结果显示:感染猪胸腺中TNOS...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨龙圣 胡元亮 薛家宾 王芳 王德云 徐为中
【目的】研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理。【方法】选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-γ、IL-10mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63d测定免疫器官指数和攻毒保护率。【结果】两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-γ、IL-10mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
段滇宁 郭华 李晓琳 陈萌萌 张亚群 韩俊源 张书霞
选取8头猪圆环病毒2型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗原、抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,随机分为4组:对照组、NF-κB抑制剂组(抑制剂组)、PCV2组和NF-κB抑制剂-PCV2组(抑制剂-PCV2组),体外培养24 h后收获淋巴细胞及培养上清液。ELISA方法检测培养上清液中IL-4和IL-12的含量;间接免疫荧光定位检测PCV2感染淋巴细胞的情况和核因子κB(NF-κB)蛋白入核情况,Western blot定量检测细胞浆中髓样分化因子88(MyD88)、磷酸化抑制性核因子кB(p-IкB)及NF-κB/p65和细胞核中NF-κB/p65蛋...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙岩 胡健 温俊歌 郜原 薄联锋 徐志坤 吴耀丽 张德礼
【目的】克隆猪淋巴结双链RNA激活的蛋白激酶(PKR)基因,并在体外初步表达,为研究流感病毒感染时猪PKR与P58IPK在体内外的相互作用奠定基础。【方法】用Trizol法从猪淋巴结中提取总RNA,RT-PCR法扩增猪PKR基因的完整编码区,将该片段连接到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pDsRed1-N1中,采用SDS-PAGE检测原核表达载体pGEX-PKR在大肠杆菌BL21中的表达情况,用脂质体转染法将真核表达载体pD-sRed1-PKR转入猪脐静脉血管内皮细胞系(SUVECs),Western blot检测其在细胞中的表达。【结果】PCR扩增得到了1 754bp的DNA片段...
关键词：
猪PKR基因 克隆 原核表达 真核表达
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郁晓梅 聂其灼
采用组织学和酶组织化学方法对16头猪的空肠淋巴结、腹股沟浅淋巴结和颈浅背侧淋巴结的组织结构进行了综合研究.结果表明,猪淋巴结组织结构并不完全属于皮质和髓质倒置,而是皮质可以位于外周,髓质可以位于中央,通常是皮质沿小梁分布.皮质由淋巴小结和弥散性淋巴组织构成;髓质无明显的髓索和髓窦,淋巴细胞数量少,T、B 淋巴细胞的分布类似于其他哺乳动物;树突状细胞、交错镶嵌型细胞、巨噬细胞和网状细胞的形态、分布以及组化反应也与其他哺乳动物相似.此外,在髓质中还发现一种特殊的网状细胞.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张传茂 聂其灼
应用光镜和透射电镜技术对１７头猪的淋巴结髓质进行了研究．结果显示：猪淋巴结的化质主要由粗细两种网状纤维及常与其伴行的成纤维型风状细胞和特殊型网状细胞、淋巴细胞和浆细胞、巨噬细胞以及一种强嗜酸伊红性的颗粒细胞组成，但其中淋巴细胞和浆细胞的数量远少于其他哺乳动物淋巴结髓质．无明显的髓素，髓窦小且不明显．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
黄怡 黄琴 李雅丽 崔志文 李卫芬 余东游
【目的】通过检测促炎细胞因子APRIL和抗炎细胞因子IL-10的分泌水平来观察屎肠球菌和乳酸乳球菌对肠上皮细胞先天性免疫应答的调节作用。【方法】Caco-2细胞分别和PBS(CT组,阴性对照组)、Escherichiacoli K88(EC组,阳性对照组),Enterococcus faecium(EF组)或Lactococcus lactis(LL组)共孵育2 h,以及先分别和Enterococcus faecium或Lactococcus lactis共孵育1 h,再和Escherichia coli K88共孵育2 h(EF-EC组和LL-EC组)。试验结束时,用ELISA方法检测细胞培...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
胡屹屹 穆祥 胡元亮
为探讨白头翁汤及其主要成分对细菌内毒素(LPS)诱发的病理效应的药理作用,培养内皮细胞至单层融合后加入内毒素,3 h后加入高(10 mg·mL-1)、中(5 mg·mL-1)、低(1 mg·mL-1)3种剂量的8种药物,继续培养21 h后收集细胞上清液,用ELISA方法测定IL-1α、IL-6和ET-1的含量。结果表明:白头翁汤及其成分白头翁皂苷B4、小檗碱、巴马汀可以极显著或显著抑制LPS诱导的IL-1α高水平分泌,白头翁汤及其成分秦皮甲素、秦皮乙素、白头翁素可以极显著或显著抑制LPS诱导的IL-6高水平分泌,白头翁汤及其成分秦皮乙素、白头翁素可以极显著或显著抑制LPS诱导的ET-1高水平分...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施旅娟 韩惠利 张书霞
【目的】了解PCV-2感染仔猪后,病毒在腹股沟淋巴结中的位置、凋亡细胞的类型及其两者之间的关系。【方法】选用9头32日龄PCV-2抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为3组,即对照组、PCV-2攻毒组(PCV-2组)、PCV-2攻毒后再用钥匙孔血蓝蛋白(KLH)刺激组(PCV-2+KLH组),每组3头。感染后32d采集腹股沟浅淋巴结制作石蜡切片。采用免疫组织化学方法对病毒进行定位,用末端标记法(TUNEL)进行细胞凋亡的定位测定,并用流式细胞法对细胞周期和细胞凋亡进行定量检测。【结果】PCV-2组和PCV-2+KLH组仔猪淋巴结的主要病变为皮质和副皮质区淋巴细胞严重缺失,上皮样巨噬细胞浸润,巨噬细胞...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨晓萍 吴谋成
【目的】研究油菜花粉多糖(LBPP)对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α的诱生及其mRNA表达的影响。【方法】通过动物抑制性肿瘤法制备肿瘤模型,采用双抗体夹心ELISA法检测IL-2、TNF-α含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-2、TNF-α mRNA的表达。【结果】LBPP有明显抗肿瘤作用,200mg·kg-1高剂量组抑瘤率可达51.26%,明显优于环磷酰胺46.22%;LBPP可显著促进荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α分泌(P<0.01),高剂量组提高率分别达56.37%、105.24%、1364%和12...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
商艳红 刘欣辛 李金磊 王淑娟 魏静 赵岩 崔保安 魏战勇
【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后,PCV-2DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18的mRNA转录水平在...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王亭玮 刘转霞 陆佳 李沛轩 刘柯江 曾巍巍 索南吉 谢东旭 王雯慧
【目的】制备兔抗双峰驼Toll样受体5(TLR5)的多克隆抗体并鉴定其活性。【方法】选择双峰驼TLR5基因序列,经软件分析选择其编码区的膜外区1～499氨基酸位为主要抗原位,再选取对应的核苷酸序列进行基因合成,并与pET-28a(+)载体连接构建重组质粒pET28a-TLR5,对其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定。将pET28a-TLR5转染大肠杆菌原核表达系统,用IPTG进行诱导表达,对IPTG浓度(0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mol/L)和诱导时间(2,3,4,5,6,7,8,9 h)进行优化。将表达的蛋白经亲和层析法纯化后免疫新西兰白兔以制备多克隆抗体,采用ELISA法检测多抗效价,用Western blot检测和免疫组化验证评价多克隆抗体的特异性。【结果】成功构建了重组质粒pET28a-TLR5,经IPTG诱导后获得了重组蛋白(大小约为57 ku),且以包涵体的形式表达。IPTG最佳诱导表达条件为:IPTG浓度为1 mol/L,诱导时间为6 h。TLR5多抗血清效价为1∶128 000。Western blot鉴定表明,TLR5多抗血清能特异性识别目的蛋白;免疫组化结果表明,TLR5多抗能很好地识别成年双峰驼十二指肠肠系膜淋巴中的TLR5阳性细胞。【结论】成功制备出特异性良好的兔抗双峰驼TLR5多克隆抗体,能够用于TLR5的检测。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高峰 江芸 周光宏 韩正康 朱旭东 周卫华 杨若飞
在小麦基础日粮中添加酶制剂 ,研究其对断奶仔猪生长、代谢和血液IL 2水平的影响。试验将 4 8头杜洛克×大约克×二花脸三元杂交断奶仔猪分为玉米基础日粮组 (Ⅰ )、小麦基础日粮组 (Ⅱ )和小麦基础日粮添加 0 0 17% (质量分数 )酶制剂组 (Ⅲ )。预试期 4d ,正试期 2 8d。结果表明 ,Ⅰ组较Ⅱ组仔猪日增重提高 4 0 % (P>0 0 5 ) ;Ⅲ组较Ⅱ组仔猪日增重提高 7 6 % (P
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