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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡举伟 张会慧 孙广玉
以过表达和抑制表达2–Cys Prx基因烟草(龙江911)为材料,测定和分析其生长特性和光化学活性。结果表明:过表达2–Cys Prx基因烟草的株高、根长、生物量显著高于非转基因烟草和抑制表达2–Cys Prx基因烟草;抑制表达2–Cys Prx基因烟草的PSⅡ反应中心电子传递速率(ETR)显著低于过表达2–Cys Prx基因烟草,过表达2–Cys Prx基因烟草的荧光曲线与Fm所围成的面积(Area)、2 ms时有活性反应中心的开放程度(Ψo)、吸收光能用于QA–以后电子传递的量子产额(φEo)、单位反应中心吸收光能用于电子传递的能量(ETo/RC)高于非转基因烟草,非光化学猝灭的最大量子产...
[期刊] 华北农学报
[作者]
代欣 张秀丽 胡举伟 孙广玉
为揭示２－Ｃｙｓ Ｐｅｒｏｘｉｒｅｄｏｘｉｎｓ（２－Ｃｙｓ Ｐｒｘ）基因在烟草龙江９１１抗逆中的功能，以过表达２－Ｃｙｓ Ｐｒｘ基因烟草、抑制表达２－Ｃｙｓ Ｐｒｘ基因烟草和非转基因烟草幼苗为试材，研究了不同ＰＨ值的模拟酸雨对其生长指标、叶片生理生化特性和叶片光合生理的影响。结果表明：与对照相比，ＰＨ值４．０的模拟酸雨对３种基因型烟草的株高、叶面积、比叶重无明显影响，ＰＨ值２．５的模拟酸雨处理下，与对照相比，过表达２－Ｃｙｓ Ｐｒｘ基因烟草幼苗的株高无明显变化，抑制表达２－Ｃｙｓ Ｐｒｘ基因烟草和非转基因烟草幼苗的株高显著降低；随着模拟酸雨ＰＨ值降低，３种基因型烟草叶片的硝酸还原酶（ｎｒ）活性．．．
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
李芳蕊 许思佳 刘霁广 向泓霖 张家伟 崔帅 丁一淇 李慧玉
【目的】TCP家族基因是植物特有的一类转录因子，广泛参与了植物的各类生命进程，起到至关重要的调控作用。白桦BpTCP10基因是属于TCP家族的一个重要基因，探究BpTCP10基因在白桦生长发育及非生物胁迫过程中的作用，能为揭示该基因的功能、培育白桦耐盐良种提供理论依据。【方法】以白桦为试材，在克隆BpTCP10基因的基础上，对其进行生物信息学分析和启动子元件分析，研究该基因的时空表达特性，同时使用CRES-T技术构建植物抑制表达载体，通过农杆菌介导法获得抑制表达转基因白桦株系，对转基因株系进行形态学分析，采取小叶盘法，在进行NaCl胁迫后，测定胁迫处理各时间点转基因株系的超氧化物歧化酶及过氧化氢含量，并进行DAB及NBT染色，分析其耐盐性。【结果】白桦BpTCP10基因含有高度保守的b HLH结构域，属于TCP家族基因中的PCF亚类，与拟南芥AtTCP11基因有一定的亲缘关系，而且BpTCP10基因的启动子上有多个胁迫响应元件。qRT-PCR结果显示，BpTCP10基因在叶片、茎节、顶芽、雄花序及雌花序中均有不同程度的表达；并且该基因参与Na Cl等非生物胁迫及ABA和JA的应答。成功获得6个抑制表达白桦株系；对转基因株系进行NaCl处理后，DAB和NBT染色及超氧化物歧化酶和过氧化氢含量测定结果均表明，转基因株系表现为盐敏感。【结论】白桦BpTCP10基因可能参与白桦茎节的发育及非生物胁迫响应过程。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
胡举伟 张会慧 逄好胜 孙广玉
以转2–Cys Prx基因烟草(龙江911)为材料,测定和分析了干旱胁迫下转基因烟草的光化学活性。结果表明:干旱胁迫下,转2–Cys Prx基因烟草叶片OJIP曲线上K点和J点的相对荧光强度增加量明显低于非转基因烟草,而2 ms时有活性反应中心的开放程度(Ψo)明显高于非转基因烟草;增强2–Cys Prx基因的相对表达,增加了干旱胁迫下烟草叶片PSⅡ电子供体侧OEC的电荷分离能力和受体侧QA向QB的电子传递能力;转2–Cys Prx基因烟草叶片在干旱胁迫下,吸收光能用于QA–以后的电子传递的能量比例(φEo)明显大于非转基因烟草,而非光化学猝灭的最大量子产额(φDo)。2–Cys Prx基因的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋春丽 马俊莲 唐霞 张子德 赵丛枝 李静
采用RNA干扰技术抑制草莓乙烯受体基因表达,以延缓草莓成熟软化进程。以测序质粒为模板,PCR扩增草莓FaEtr2基因片段。双酶切正、反义PCR产物及表达载体,将酶切产物定向连接到pBI121载体上,构建成该基因的shRNA(Short hairpin RNA)表达载体,由此转录的mRNA因两端序列反向互补而成发夹式RNA,可应用于RNA干扰的研究。将构建好的载体转化根癌农杆菌LBA4404,用基因工程菌菌液浸染千代田草莓组培苗叶片,用卡那霉素筛选抗性植株。PCR检测和GUS组织化学染色检测到4个株系的转基因植株。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
牛俊奇 黄金容 苗小荣 王道波 杨丽涛 李杨瑞
【目的】克隆甘蔗转化酶抑制子(Invertase inhibitor)基因(SoInvInh2)的c DNA全长序列,分析基因表达模式和生物信息学特性,为该基因功能的进一步鉴定提供依据。【方法】基于同源序列克隆InvInh2基因5’序列,采用Tail-PCR技术扩增基因3’序列。采用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位和系统进化等进行分析。采用荧光定量PCR(qRT-PCR)分析SoInv Inh2基因在甘蔗不同生育期的组织表达特性。【结果】从甘蔗GT28幼茎中克隆到的一个新的转化酶抑制子基因,命名为SoInv Inh2,GenBank登录号KF575170。该基因的c DNA序列全长为927 bp,开放阅读框长651 bp,编码216个氨基酸。SoInvInh2基因不含内含子序列。SoInvInh2蛋白有4个不对称的α-螺旋和4个保守的Cys位点,属于InvI/PMEI家族成员。在甘蔗叶、茎、花序和花序轴中都能检测到SoInvInh2基因表达。在甘蔗不同生育期,So Inv Inh2基因在不同成熟度的叶和茎中的表达模式无明显规律。【结论】成功克隆到甘蔗SoInvInh2基因,并进行相关生物信息学分析,为该基因的进一步功能研究奠定了基础。
关键词：
甘蔗 转化酶抑制子 基因克隆 基因表达
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
刘露露 鲁婷婷 王爽 李美靓 赵双菁 刘莹莹 魏志刚
【目的】赤霉素(Gibberellins,GA)参与植物多个生长发育过程,然而赤霉素在植物叶片发育中的生物学功能尚无研究报道。GA20ox是GAs生物合成途径中关键限速酶(GA20-oxidases)的编码基因,本项研究目的是揭示PsnGA20ox1在植物叶片发育中的生物学功能。【方法】本项研究分析了PsnGA20ox1在烟草中过表达后对烟草叶片大小、超微结构、生物量、叶绿素及生物活性GAs含量,以及细胞分裂与气孔发育相关的基因表达的影响。【结果】PsnGA20ox1过表达烟草叶片变大、叶绿素与GA4含量
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘世拓 肖栋 许玉超 侯喜林 徐玮玮 韩克 董慧杰 胡春梅
[目的]双半胱氨酸型硫氧还蛋白过氧化物酶Brc2-Cys Prx是过氧化还原蛋白Peroxiredoxins(Prxs)的亚家族。Prxs是植物抗氧化酶防御系统的成员,对清除植物体内活性氧具有重要作用。本文旨在克隆和研究Brc2-Cys Prx基因在不结球白菜处于不同胁迫条件下的表达模式。[方法]以不结球白菜霜霉病抗病自交系‘苏州青’和霜霉病感病自交系‘矮脚黄’为试验材料,利用RACE技术克隆得到不结球白菜Brc2-Cys Prx基因。利用生物信息学方法对该基因进行信息学分析。采用qRT-PCR技术对不结
[期刊] 草业科学
[作者]
吴榕 田再民 郑国华 吴华圃 吴艳玲 牛艳芳
为探索白三叶(Trifolium repens)查尔酮合成酶基因对类黄酮含量的影响,根据NCBI上提供的TrCHS基因(Genbank:2247906)序列,采用RT-PCR方法克隆获得白三叶查尔酮合成酶(chalcone synthase, CHS)基因全长c DNA片段,命名为TrCHS;成功构建含有TrCHS的植物表达载体,在烟草(Nicotiana)中进行遗传转化,经抗性筛选与分子检测,获得了转基因烟草株系,并对其类黄酮含量进行了测定。结果表明,与野生型相比,转基因烟草植株TrCHS表达量和类黄酮含量均显著提高(P <0.05),表明过表达TrCHS可提高烟草类黄酮的含量,这为后续解析TrCHS功能以及白三叶新品种选育提供了可靠的理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张永淋 高彬 周杰 朱树华
为了深入研究2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号分子作用机制,结合了PCR技术和RT-PCR技术通过体外克隆的方法得到桃果实2-Cys Prx基因,通过对序列分析表明,2-Cys Prx基因全长1 424 bp,其中,编码区813 bp,共编码270个氨基酸。对其分子结构进行分析,2-Cys Prx蛋白分子量为29.7 ku,为疏水型蛋白,且是膜外蛋白。在线软件预测2-Cys Prx蛋白分子式为C1342H2110N348O403S4,分子量29.696 ku,由4 207个原子组成,理论等电点为6.23。使用Prot Scale分析该蛋白疏水性平均值为-0.126,说明2-Cys Prx为亲水性蛋白。TMHMM对跨膜结构进行预测,发现,2-Cys Prx氨基酸序列中不存在跨膜结构域,为膜外蛋白。此外,对该蛋白二级结构进行预测,发现2-Cys Prx有4个α螺旋结构、9个β折叠结构及无规则卷曲构成。系统进化树分析表明,肥城桃果实2-Cys Prx与其他植物氨基酸序列有较高同源性,其中与樱桃的亲缘关系最近,相似度达到了98.15%,表明植物体内2-Cys Prx具有较高的保守性。体外构建重组蛋白p ET-30a-2-Cys Prx成功在大肠杆菌BL21中表达,为下一步研究其功能与结构,从而探讨2-Cys Prx基因调控桃果实氧化还原信号作用机理奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
林世锋 安雪琴 杨承 王仁刚 任学良 赵杰宏 付强
为了研究多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)在烟草中的生物学功能,运用生物信息学方法,结合RT-PCR和SMART RACE技术,从烟草中克隆到2个多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因c DNA和DNA全长序列,分别命名为Nt PGIP1(Gen Bank登录号:KF317203)和Nt PGIP2(Gen Bank登录号:KF317204)。Nt PGIP1基因全长为1 413 bp,编码338个氨基酸;Nt PGIP2基因全长为1 185 bp,编码329个氨基酸;两基因均没有内含子序列,核苷酸序列有50%的一致性,编码的氨基酸序列有54%的一致性。两基因编码蛋白均含有植物PGIP蛋白...
[期刊] 水产学报
[作者]
彭扣 陈伟伟 胡炜 王玉凤 赵浩斌
肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)是动物肌肉生长发育的负调控因子。以泥鳅肌肉cDNA为模板,采用RT-PCR方法克隆了泥鳅MSTN基因的主要片段,其长度为815bp,编码271个氨基酸残基。泥鳅MSTN具有MSTN的共同特征,有蛋白酶水解位点RIRR和保守的半胱氨酸残基。RT-PCR分析表明该基因在肌肉中显著表达,在眼中也有微弱表达,而在其他所检测组织(脑、鳃、心脏、肝脏、肠、精巢、卵巢)未见表达。此结果表明泥鳅MSTN基因除对肌肉生长发育有调控作用以外,还可能在眼的发育中有一定作用。
关键词：
泥鳅 肌肉生长抑制素 克隆 组织表达
[期刊] 水产学报
[作者]
田雪 王良炎 刘洋洋 胡灿灿 庞小磊 吴利敏 李学军
肌肉生长抑制素(MSTN)是动物肌肉发育和生长过程中的负调控因子。为了明确淇河鲫MSTN基因序列及其在肌肉生长发育中的调控功能,本研究利用RACE方法克隆淇河鲫MSTN全长c DNA序列,q RT-PCR分析其在不同组织和胚胎发育阶段的表达情况。结果显示,淇河鲫MSTN c DNA序列全长2094 bp(no.KC851952.1),包含86 bp 5′非编码区、880 bp 3′非编码区和1128 bp开放阅读框,编码375个氨基酸残基,前22个氨基酸残基为信号肽,34256位氨基酸残基为TGF-β前肽
关键词：
淇河鲫 肌肉生长抑制素 克隆 组织表达
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张艺函 徐凡 蒋太英 崔胜男 马殿荣
衰老是植物界广泛存在的一种自然现象,在植物整个发育过程中具有重要的地位和生物学意义。叶片衰老是植物生长发育的最后一个阶段,在该过程中叶绿素、核酸、脂质、蛋白和其他大分子等被降解,细胞程序化死亡并引起叶色发生变化,然而目前关于这个生物学过程如何启动和如何调控的研究还比较有限。当植物受到外界环境的影响时也会加速其自身的衰老,蛋白磷酸酶催化的蛋白质去磷酸化反应会在植物适应外界环境的多种生命活动过程中发挥重要的作用。2C型蛋白磷酸酶是植物中数量较多的一类,其通过脱磷酸化来调节细胞的生长发育以及信号传递,从而调整体内相关基因的变化来对抗逆境的胁迫。通过试验研究发现并克隆了一个新的参与水稻(Oryza sativa)叶片衰老进程调控的2C型蛋白磷酸酶编码基因OsSAPP2,并通过双元表达载体构建获得了组成型异源过表达OsSAPP2基因的转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana)。通过对35S-OsSAPP2转基因拟南芥的表型观察可知,35S-OsSAPP2转基因拟南芥出现莲座叶片变小、数量减少,抽苔和开花时间明显提前,株高增加,叶片颜色变浅、衰老加速等表型。在叶龄依赖和人工黑暗诱导的衰老过程中,过表达OsSAPP2基因导致转基因拟南芥叶绿素含量下降,叶片萎蔫加剧。实时荧光定量PCR检测结果表明,35S-OsSAPP2转基因拟南芥中衰老标志基因SAG12,衰老关键转录因子NAC2、NAP、WRKY6和叶绿素降解关键酶编码基因ACD1等表达量上升;从植物进入衰老过程开始,光合作用关键基因RbcS和RbcL表达量快速下降。可见,OsSAPP2基因参与植物叶片衰老进程的调控,是衰老进程的正向调控因子。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
谢海娟 叶广继 王舰 杨永智
【目的】为明确马铃薯蔗糖转运蛋白(SUT2)对盐胁迫的响应,本研究对StSUT2的功能进行初探。【方法】通过同源克隆技术得到马铃薯StSUT2基因并进行生物信息学分析,使用荧光定量PCR技术检测马铃薯青薯9号不同器官中SUT2基因在盐胁迫下表达量的变化,随即构建表达载体并遗传转化烟草,测定转基因烟草在盐胁迫下脯氨酸、可溶性蛋白和可溶性糖含量的变化。【结果】①马铃薯StSUT2基因CDS长度为1818 bp,编码605个氨基酸;系统进化树分析表明,马铃薯StSUT2与番茄亲缘关系最近。②马铃薯StSUT2基因可被盐胁迫诱导,其中根、茎中的表达量在胁迫8 h最大,而叶中的表达量在4 h最大。③构建表达载体pJAM1502-StSUT2并转化烟草,经PCR和qRT-PCR鉴定,获得6株转基因植株,并选取表达量最高者进行后续实验。④盐胁迫下测定野生型与过表达植株中脯氨酸、可溶性蛋白以及可溶性糖含量发现,过表达植株中脯氨酸、可溶性蛋白以及可溶性糖含量均高于野生型。【结论】StSUT2可能会通过提高渗透性物质含量来增强植物的耐盐性。
关键词：
马铃薯 蔗糖转运蛋白 盐胁迫 克隆与转化
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