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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯鹤 冯雪 郭咏昕 强卫东 王清曼 邹德毅 吴治邦 杨晶
【目的】构建转血管内皮生长因子165(VEGF165)基因的红花,为利用植物生物反应器规模化生产VEGF165奠定基础。【方法】采用PCR方法,克隆获得植物偏好性的VEGF165基因,将其与pOP质粒连接,构建重组质粒pOP-VEGF165,对其进行NcoⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定。采用冻融法将质粒pOP-VEGF165转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导获得转化红花植株,经PCR鉴定得到转基因红花阳性植株。【结果】克隆获得了495bp的VEGF165基因片段,并成功构建了植物特异表达载体pOP-VEGF165,用其转化红花子叶后,共获得了8株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性。...
关键词：
血管内皮生长因子 红花 遗传转化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯鹤 冯雪 郭咏昕 强卫东 王清曼 邹德毅 吴治邦 杨晶
【目的】构建转血管内皮生长因子165(VEGF-165)基因的红花，为利用植物生物反应器规模化生产VEGF-165奠定基础。【方法】采用PCR方法，克隆获得植物偏好性的VEGF-165基因，将其与pOP质粒连接，构建重组质粒pOP-VEGF-165，对其进行NcoⅠ和HindⅢ双酶切及PCR鉴定。采用冻融法将质粒pOP-VEGF-165转入根癌农杆菌EHA105中，通过农杆菌介导获得转化红花植株，经PCR鉴定得到转基因红花阳性植株。【结果】克隆获得了495 bp的VEGF-165基因片段，并成功构建了植物特异表达载体pOP-VEGF-165，用其转化红花子叶后，共获得了8株转基因红花植株，其中...
关键词：
人表皮生长因子 红花 遗传转化
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
陈烁桢 马冬梅 钟再选 樊佳佳 朱华平 苏换换
为了探究侏儒型华南鲤(Cyprinus carpio rubrofuscus)生长发育迟缓的分子机制，深入分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor， VEGF)在鱼类生长过程中的作用，本研究比较分析了侏儒型华南鲤和生长正常华南鲤(对照组)的生长性状、摄食率和饲料利用率等指标，并扩增和测序分析了华南鲤vegf_(121)基因的cDNA序列，利用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测了生长正常华南鲤vegf_(121)基因的mRNA在11种组织中的表达量，以及在侏儒型鱼的心脏、垂体、大脑、肌肉和下丘脑中的表达水平。摄食实验结果显示，侏儒型华南鲤的摄食率和增重率显著低于体型相似的生长正常华南鲤，而饲料转化率与正常鱼无显著差异。同时，获得华南鲤vegf_(121)基因cDNA序列1 235 bp，其中开放阅读框432 bp，编码144个氨基酸。该蛋白属于VEGF家族的VEGF_(121)亚型。其氨基酸序列与11种已知鱼类VEGF_(121)序列同源性在79.86%以上，而与人类(Homo sapiens)和小鼠(Mus musculus)的同源性仅为51.02%和52.74%。VEGF_(121)亚型在人类和鱼类的同源性较低且时空分布存在较大差异，可能与其呼吸方式和呼吸系统的血管形成模式差异有关。qRT-PCR结果显示，在生长正常华南鲤11个组织中均能检测到vegf_(121) mRNA的表达，说明vegf_(121)对于华南鲤不同组织中血管的发育有不同程度的调控作用。比较侏儒型华南鲤和生长正常鱼的下丘脑等5个组织中该基因的表达发现，在侏儒型华南鲤下丘脑组织中的表达水平显著高于生长正常鱼；而在大脑和垂体中，vegf_(121)的表达水平相当；在肌肉和心脏组织中，vegf_(121)的表达水平都较生长正常鱼低，但差异不显著。因此，推测侏儒型华南鲤的生长发育缓慢可能与下丘脑的血管生成异常和器质性病变影响鱼体的食欲调控信号有关，进而导致鱼体生长缓慢。本研究为进一步探讨侏儒型华南鲤生长发育缓慢的原因提供了科学依据。对养殖经济鱼类群体中侏儒型个体产生原因的遗传学研究及增加养殖鱼类的产量具有重要意义。
关键词：
华南鲤 血管内皮生长因子 侏儒 摄食
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周婷婷 王沥浩 王文慧 冯雪 杨晶
【目的】制备转人表皮生长因子(Human epidermal growth factor,hEGF)基因红花植株,为利用植物生物反应器规模化生产hEGF奠定基础。【方法】利用分子生物学方法将植物偏好的双基因hEGF克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-hEGF-hEGF,采用冻融法将质粒pOP-hEGF-hEGF转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导方法转化红花,采用PCR检测、Southern blot筛选转基因红花阳性植株。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-hEGF-hEGF,通过转化红花子叶,共获得了30株转基因红花植株,其中3株鉴定为阳性,转化率为10%;对转化植...
关键词：
人表皮生长因子 红花 遗传转化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨晶 王兰 黄建 陈玉斌 郭咏昕 易善勇 官丽莉 杜林娜 李海燕 李校堃 姜潮
【目的】构建转角质细胞生长因子-2基因(KGF2)红花,为KGF2药用蛋白的生产奠定了基础。【方法】利用融合PCR方法扩增人源KGF2基因与拟南芥油体蛋白Oleosin基因的融合基因,将融合基因克隆至表达载体pOP上,构建了重组质粒pOP-OL-KGF2,采用冻融法将质粒pOP-OL-KGF2转入根癌农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,采用PCR检测筛选转基因红花阳性植株,SDS-PAGE检测Oleosin-KGF2融合蛋白的表达情况。【结果】成功构建了植物特异表达载体pOP-OL-KGF2,转染后共获得了12株转基因红花植株,其中2株鉴定为阳性,阳性率为17%,对转化植株进行DN...
关键词：
角质细胞生长因子-2 红花 遗传转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴晓云 阎萍 梁春年 郭宪 包鹏甲 裴杰 褚敏 丁学智 刘文博 焦斐 刘建
利用分子克隆技术获得了牦牛VEGF-A基因编码区序列,并采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白的基本理化性质、疏水性、信号肽、二级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,牦牛VEGF-A基因包含一个573 bp的开放阅读框,编码190个氨基酸;其编码蛋白属于亲水性蛋白,具有明显的信号肽。二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主。VEGF-A基因编码产物氨基酸邻接系统树表明,牦牛VEGF-A与黄牛、绵羊和成都麻羊等物种的VEGF-A氨基酸遗传距离较近,具有高度同源性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨晶 李洪锐 易善勇 郭咏昕 黄建 卢震 李海燕 李校堃 姜潮
【目的】获得转人源透明质酸酶基因PH20(hPH20)红花,为hPH20药用蛋白的生产奠定基础。【方法】人工合成hPH20基因,并在两端引入NcoⅠ/HindⅢ酶切位点。将合成的hPH20基因与pUC57载体连接,构建克隆载体pUC57-hPH20,对其进行双酶切鉴定。用NcoⅠ/HindⅢ酶切pUC57-hPH20获得hPH20基因,将其插入到植物油体高效表达载体pOBT上,构建重组质粒pOBT-hPH20,进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOBT-hPH20转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化红花,对转hPH20基因红花植株进行PCR检测。【结果】成功构建了hPH...
关键词：
红花 透明质酸酶hPH20 油体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张云月 付永平 王丕武 王鹏 李勃 马建 曲静
【目的】将具有广谱抗病性的hrpZpsta基因导入大豆,为培育抗灰斑病的转基因大豆新品系奠定基础。【方法】采用农杆菌介导法,以大豆子叶节为受体,将具有广谱抗性的hrpZpsta基因转入大豆品种"吉林30"中,以耐盐基因badh作为筛选标记性基因,经过抗性筛选,对转基因植株进行PCR检测、Southern杂交和RT-PCR检测分析。【结果】确定的NaCl筛选浓度为200mmol/L。对T1、T2和T3代转基因植株进行PCR检测,得到T1代阳性植株30株,T2代45株,T3代284株,说明外源hrpZpsta基因在转基因后代中能够遗传。Southern杂交结果表明,外源目的基因hrpZpsta已经...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李自超 张新春 张丽 庄炳昌 张承亮 王国英 付永彩
利用基因枪转化技术将来源于大肠杆菌的mtlD(1-磷酸甘露醇脱氢酶 )基因导入旱稻。研究结果表明 :旱稻愈伤组织的继代时间对抗性愈伤的筛选频率无明显影响 ;基因枪轰击后愈伤组织的恢复时间 (≤ 7d)较长时 ,潮霉素B质量浓度应适当提高。转基因植株及其后代的PCR ,dotblotting ,southernblotting和northernblotting检测表明 ,mtlD基因已整合到旱稻基因组中 ,并且稳定表达。在含 1 0 % (质量分数 ,下同 )NaCl的MS培养基上 ,转基因植株生长速率明显大于阴性对照 ;在含 0 75 %NaCl的盆中 ,转基因植株能够生长。盐分对转基因植株...
关键词：
旱稻 mtlD基因 耐盐性 基因枪转化
[期刊] 华北农学报
[作者]
蒋春志 张艳敏 郭北海 温之雨 李辉
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李红霞 汪妤 郭泾垒 张程炀 张战凤 彭惠茹
【目的】MYB转录因子在植物生长发育和抗逆过程中起着重要作用,克隆小麦MYB基因并对其功能进行研究,对植物MYB转录因子的调控机制具有重要意义。【方法】利用Affymetrix小麦芯片系统,分析2个小麦品种中国春(热敏感)和TAM107(耐热)在不同热胁迫处理下的转录谱,从热胁迫上调表达的EST序列中克隆得到小麦耐热相关TaMYB165基因,并对该基因的表达特性及功能进行研究;利用实时定量RT-PCR技术分析小麦不同发育时期、不同组织器官热胁迫处理下TaMYB165基因的动态表达模式,构建超表达载体并转化拟南芥,对获得的转基因拟南芥株系进行耐热性鉴定。【结果】克隆获得1个小麦MYB转录因子家族基因TaMYB165,该基因ORF长度为847 bp,编码282个氨基酸。同源序列分析表明,TaMYB165与高粱SORBIDRAFT 03g040120亲缘关系最近(73.2%),与水稻MYB蛋白和拟南芥AtMYB165的相似性分别为70.37%和33.0%。qRT-PCR结果显示,TaMYB165在小麦苗期和灌浆期都受热胁迫诱导表达,只是响应的早晚有所不同。在拟南芥中过量表达TaMYB165,转基因株系热胁迫后成活率提高,细胞膜热稳定性增强。【结论】TaMYB165是小麦热胁迫响应的重要转录因子,可作为小麦耐热育种的重要候选基因。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘倩 唐亮 谈立松 赵玉军
为获得鸡VEGF基因片段,原核表达GST-cVEG基因,并对融合蛋白进行分离纯化,应用RT-PCR从鸡睾丸中扩增出VEGF片段,将PCR产物克隆至pMD 18-T载体。随后,将cVEGF片段亚克隆至带有GST的原核表达载体pGEX-4T-2中,测序鉴定。将重组质粒pGEX4T2-cVEGF转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,IPTG诱导,并进一步通过Ni-NTA Agarose亲合层析纯化,纯化产物以SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,结果表明,成功地构建了原核表达质粒pGEX4T2-cVEGF。GST-cVEGF融合蛋白在大肠杆菌中得到了表达,Ni-NTA Agarose纯化...
关键词：
cVEGF 融合蛋白 原核表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
王朝风 岳耀敬 张勇 刘建斌 韩吉龙 赵兴绪 杨博辉
为研究藏羊VEGF-A基因编码区多态性与藏羊耐高寒、缺氧环境的相关性,以藏羊的血样为材料,运用DNA池测序和直接测序法检测VEGF-A基因的序列变异,比较其基因型频率和等位基因频率的差异,并对不同的多态位点间进行连锁不平衡和单倍型分析。然后预测蛋白质序列的改变,并用生物信息学软件对蛋白质序列的结构及性质进行分析。结果表明,在藏羊VEGF-A的编码区中有3个多态性位点,SNP2(g.15020T/A)碱基的突变导致了半胱氨酸变为丝氨酸。此氨基酸的变化并没有引起基因所编码蛋白的二级结构的变化。二级结构主要以无规则卷曲和α螺旋为主。SNP1(g.15005T/A)的基因型频率和等位基因频率在藏羊群体...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨晶 李洪锐 易善勇 郭咏昕 黄建 卢震 李海燕 李校堃 姜潮
【目的】获得转人源透明质酸酶基因PH20(hPH20)红花，为hPH20药用蛋白的生产奠定基础。【方法】人工合成hPH20基因，并在两端引入NcoⅠ/Hind Ⅲ酶切位点。将合成的hPH20基因与pUC57载体连接，构建克隆载体pUC57hPH20，对其进行双酶切鉴定。用NcoⅠ/Hind Ⅲ酶切pUC57hPH20获得hPH20基因，将其插入到植物油体高效表达载体pOBT上，构建重组质粒pOBThPH20，进行PCR和双酶切鉴定。采用冻融法将重组质粒pOBThPH20转入根瘤农杆菌EHA105中，通过农杆菌介导法转化红花，对转hPH20基因红花植株进行PCR检测。【结果】成功构建了hPH2...
关键词：
红花 透明质酸酶hPH20 油体
[期刊] 西南农业学报
[作者]
孙佩 童文 杨晓 黄璐琳 胡尚钦
为了建立红花新品种‘川红花2号’的HPLC指纹图谱,采用高效液相梯度洗脱方法,对12份‘川红花2号’样品和不同原产地红花材料进行色谱分离,所得图谱经"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"处理。结果表明,‘川红花2号’样品间相似度好,均大于0.95,不同原产地红花材料与川红花2号对照指纹图谱相似度低,小于0.93。因此,‘川红花2号’的指纹图谱全面反映了其内在品质,可用于该新品种药材的鉴别和质量控制。只有采用固定的红花品种、固定产地、固定采收期的样品建立的品种专属指纹图谱,才能达到相似度0.95以上。
关键词：
红花 新品种 高效液相 指纹图谱
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