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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王红权 章怀云 张学文 肖调义 苏建明 唐湘北
为探明人α-干扰素在转Hu-IFN-α基因草鱼F1代中的表达水平,以转Hu-IFN-α基因草鱼F1群体为材料,随机抽取332尾鱼分离其血清后,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测人α-干扰素基因在转基因草鱼F1代中的表达情况.结果表明:转人α-干扰素基因草鱼F1代表达率为52.1%,表达水平偏低,其表达水平受外界因素影响.
[期刊] 水产学报
[作者]
肖调义 唐湘北 章怀云 张学文 苏建明 陈开健 许宝红
The Hu-IFN-αgene,which was transducted into downstream promoter of β-actin gene of common carp(Cyprinus carpio),was recombined by DNA recombination technology.These recombined genes were injected into 1-2 cell fertilized eggs of grass carp(Ctenophatyngodon idellus) by micro-injection technology,we g...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
陈开健 章怀云 肖调义 张学文 苏建民 陈韬 陈立祥 王晓清
采用显微注射法将人α干扰素(HuIFNα)重组基因转入草鱼Ⅰ～Ⅱ细胞期的受精卵,然后对转化培育出的草鱼个体提取血液总DNA进行PCR和Southern杂交检测及ELISA检测,以研究重组基因在受体基因组上的整合和表达情况。实验结果显示:HuIFNα重组基因能整合在草鱼基因组上,但其整合是随机的,整合位点没有固定区域,而且整合在受体草鱼基因组上的HuIFNα基因的表达率较低,表达水平在个体间有很大差异。大部分转基因个体外源基因表达水平集中在39～74pg/mL之间,表达最高个体HuIFNα浓度为1450pg/mL。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王红权 章怀云 肖调义 唐湘北 苏建明 陈开健 雷威
为了分析外源基因在转基因鱼F1中的遗传特征和规律,采用PCR检测技术对Hu-IFN-α基因在转基因草鱼及其杂交F1,雌核发育F1中的遗传表达情况进行检测.检测结果为:对1120尾转基因草鱼的PCR阳性检测,检出率为60%;258尾转基因草鱼杂交F1,阳性检测率为53.8%;36尾转基因草鱼雌核发育F1,阳性率为91.7%,说明Hu-IFN-α基因成功导入草鱼中,并能遗传给F1.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
苏建明 章怀云 张学文 肖调义 陈韬 陈立祥 陈开健
采用显微注射法将人α-干扰素抗病基因转移到草鱼受精卵中 ,获得转基因群体 ,通过 PCR及 Southern杂交对转基因草鱼进行分子水平的检测 ,以进一步验证外源人α-干扰素是否整合入草鱼基因组 .结果表明 ,外源人α-干扰素抗病基因已整合入草鱼基因组中 .采用腹腔注射法 ,对转基因鱼进行草鱼出血病病毒接种攻毒试验 ,结果显示转基因草鱼比对照组的抗病毒能力有显著提高
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈立祥 张学文 肖调义 汪冬庚 符少辉 苏建明 陈开健 章怀云
为提高草鱼对出血病的抗性 ,采用显微注射法 ,将克隆在鲤 β-肌动蛋白基因启动子下游的人 α-干扰素基因转移到草鱼受精卵中 ,获得了大量转基因个体 .抽取转基因鱼血浆 ,以酶联免疫吸附法检测了转基因草鱼中人α-干扰素基因的表达情况 .从 6 72尾转基因草鱼中检测出 15 8尾有 α-干扰素的表达 ,阳性率为 2 3.5 1% ,其中表达水平最高个体血浆中α-干扰素质量浓度为 145 0 pg/ m L .基因表达量随季节和个体发育时期有所变化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
许宝红 肖调义 唐湘北 章怀云 苏建明 张学文 陈韬 陈立祥
为快速获得转Hu-IFN-α基因抗病草鱼纯系,从转Hu-IFN-α基因草鱼中,挑选9尾高表达水平的雌鱼作为亲本,经人工雌核发育,得到子一代水花89尾,与普通草鱼的雌核发育结果相比,两者孵化率差异不显著,但畸形率前者比后者高.从雌核发育子一代鱼苗中随机选取45尾鱼苗投喂含甲基睾丸素的饲料,进行生理转雄性试验,获得生理转雄性鱼苗21尾.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
章怀云 张学文 汪冬庚 肖调义 陈立祥 苏建明 陈开健
采用先进的人体血液测定仪 ,测定了转 hu- IFN- α基因草鱼和普通草鱼血液的各项生理生化指标 .统计分析结果表明 ,转 hu- IFN- α基因草鱼与普通草鱼血指标值 (红细胞数、白细胞数、血红蛋白、红细胞压积 )之间没有明显差异 ,但血浆生化指标中白蛋白、白蛋白 /球蛋白比值转基因鱼高于普通草鱼 .在转基因组内 ,血常规的歧值较高 ,说明转基因在个体中可能存在着不同的表达水平 .
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈开健 章怀云 张学文 肖调义 陈立祥 苏建民 汪冬庚
为研究转人 -α-干扰素基因草鱼的食用安全性 ,以转人 -α干扰素基因草鱼肉糜饲喂大鼠 ,在 30 d内对试验鼠进行了临床观察 .试验结束时 ,对试验鼠进行了血液学检测、解剖学观察和组织学检查 .结果表明 ,饲喂转人 -α干扰素基因草鱼肉糜的大鼠临床表现正常 ,血液学指标、解剖学形态和重要器官组织学图像与对照组动物没有显著差别
关键词：
转人-α-干扰素基因草鱼 大鼠 饲喂试验
[期刊] 海洋渔业
[作者]
李想 黄文树 黄贝 徐继松 翟少伟 梁英 张婉婷 刘海姿
分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel。将重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel分别转化入Escherichia coli M15和Escherichia coli BL21感受态细胞进行表达,并优化IPTG诱导表达体系后用SDS-PAGE电泳鉴定IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白表达形式。IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果显示,重组表达载体pQE30-IFN-γ与pET32a-IFN-γrel分别在E.coli M15和E.coli BL21中得以正确表达。重组IFN-γ蛋白分子量为21 kD左右,表达的融合蛋白以可溶性形式存在;重组IFN-γrel蛋白分子量为31 kD左右,以包涵体形式存在。且两者均在1.0 mmol·L~(-1) IPTG诱导6 h时表达量最高。经镍柱纯化和Western blot检测,成功获得高纯度的IFN-γ和IFN-γrel重组蛋白。建立了日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因的原核表达系统,为进一步研究日本鳗鲡干扰素系统的功能及调控机制奠定了基础。
关键词：
日本鳗鲡 Ⅱ型干扰素 原核表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈玥 李家乐 沈玉帮
为了研究C1qC基因在草鱼(Ctenopharyngodon idella)免疫过程中所起的作用,利用RT-PCR和RACE方法克隆获得了C1qC基因cDNA全长序列,经序列分析表明,所克隆的C1qC cDNA全长为916 bp,包括开放阅读框(open reading frame,ORF)735 bp,5′端非编码区(untranslated region,UTR)89 bp和3′端非编码区(UTR)92 bp。735 bp的ORF共编码244个氨基酸,相对分子量为26 162.5 U。同源性分析表明,草鱼与斑马鱼(Danio rerio)的相似度最高,达到71%。经草鱼呼肠孤病毒(gras...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张好放 郁二蒙 王广军 余德光 李志斐 谢骏
为研究TGF-β1/Smad4信号通路在草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肌肉发育过程中的作用机制,首先克隆了草鱼TGF-β1、Smad4基因开放阅读框(ORF,Open reading frame)序列各1 134和1 644bp。其次,在TGF-β1、Smad4序列两端分别加上相应的酶切位点,同时对pcDNA3.1(+)真核表达载体进行双酶切,将带酶切位点的片段正向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建TGF-β1、Smad4基因的真核过表达载体pcDNA3.1(+)-
关键词：
草鱼 克隆 真核表达载体 RNA干扰
[期刊] 中国农业科学
[作者]
闫若潜 谢彩华 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬
【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rCh...
[期刊] 水产学报
[作者]
邵健忠 项黎新 李亚南
草鱼干扰素 (IFN)诱生条件与规律的研究结果显示 ,病毒侵染草鱼后能迅速诱导IFN的合成 ,2 4h即可在血清中检测到IFN活性 ,3d后活性达到高峰。草鱼IFN的合成受温度、病毒种类、病毒剂量、鱼体营养状况等因素的影响。 2 5℃水温下诱生的IFN活性明显高于 15℃和 8℃。RNA病毒的诱生能力高于DNA病毒 ,其中以双链RNA病毒GCHV的诱生能力最强。在急性致死剂量以下提高病毒感染剂量以及维持鱼体的正常营养状况 ,有利于提高IFN的产量。用适量IFN或灭活GCHV预注射草鱼 ,作起动或预诱导处理 ,能显著促进IFN的诱生。病毒活性、鱼龄大小对IFN的诱生无显著影响。
关键词：
草鱼 干扰素 诱生条件
[期刊] 华北农学报
[作者]
王丹 解文杰 朱叶飞 赵金良 陈晓武
为了分析尼罗罗非鱼干扰素调节因子１（ＩＲＦ１）的表达规律及其功能，克隆了尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因ｃ ＤＮＡ全长，与其他脊椎动物ＩＲＦ１基因进行比对，构建ＩＲＦ家族系统进化树。然后使用Ｐｏｌｙ Ｉ∶ｃ对尼罗罗非鱼进行体内注射诱导抗病毒免疫反应，利用荧光定量ＰｃＲ技术检测处理组和对照组中尼罗罗非鱼各组织ＩＲＦ１基因的表达差异。最后构建尼罗罗非鱼ＩＲＦ１基因真核表达载体，对其进行细胞定位。结果表明，尼罗罗非鱼ＩＲＦ１有８８８ ｂＰ的开放读码框，编码２９５个氨基酸的蛋白序列。该蛋白Ｎ端高度保守，并含有６个保守的色氨酸，具有ＤＮＡ结合结构域。对蛋白相似率的计算发现尼罗罗非鱼与斑马鱼ＩＲＦ１相似度为５２．１．．．
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