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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
屈泰龙 李润成 钱幸 杨宇 余兴龙
为探寻转移因子(TF)对猪圆环病毒亚单位疫苗免疫效果的影响,将猪脾脏研磨,并反复冻融研磨液,离心获取冻融上清,用超滤法从上清液中提取转移因子。TF经理化检验合格后,以添加剂的形式与猪圆环病毒亚单位疫苗(Cap疫苗)混合,制成TF–Cap疫苗,并和未添加TF的Cap疫苗同时进行小鼠免疫试验。TF–Cap疫苗和Cap疫苗免疫的小鼠都设一免组和二免组,首次免疫后每隔10 d对实验鼠进行尾静脉采血,并用间接ELISA方法测定血清中猪圆环病毒2型(PCV2)的抗体水平。结果表明:用超滤法制得的TF,多肽含量为1.83 mg/mL;抗体检测数据显示,4个免疫组与对照组(注射生理盐水)的抗体检测值有极显著差...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王新 郭万柱 周婷 徐志文 王印 王小玉
【目的】构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因疫苗,并对其免疫效果和安全性进行研究。【方法】将PCV2ORF2基因从pMD-ORF2*质粒(包含PCV2 SCH A株ORF2基因)酶切回收,插入到真核表达载体pcD-NA-3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA-ORF2,对该质粒进行酶切和PCR鉴定。将pcDNA-ORF2转染IBRS-2细胞,进行Western blotting检测。将构建好的pcDNA-ORF2制成核酸疫苗,按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠,同时设pcDNA-3.1(+),PCV2全毒和PBS为对照,共免疫2次,间隔2周。分别于首免后第14天和56...
关键词：
猪圆环病毒2型 ORF2基因 核酸疫苗
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然
采用氯化铯平衡密度梯度离心获得较为纯净的病毒粒子后,经过免疫电镜技术(液相免疫电镜法和免疫胶体金标记法)对P1病毒进行了观察鉴定。结果表明,P1病毒呈球形、无囊膜、直径约为25 nm。
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 解建平 杨浩 周建新 金全胜 王玉然
通过免疫亲和层析对类猪圆环病毒因子P1纯化进行了研究。采用环氧活化及NHS活化的琼脂糖凝胶,与兔抗P1表位肽抗体偶联,对P1进行了免疫亲和吸附,通过电镜技术证实获得了纯化病毒。结果表明,免疫亲和层析是有效的P1病毒纯化方法。
关键词：
类猪圆环病毒因子P1 纯化 免疫亲和层析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵晓云 乔绪稳 陈瑾 李鹏成 于晓明 朱国强 郑其升 侯继波
【目的】研究利用大肠杆菌可溶性表达ＰＣＶ２ｂ亚型ＯＲＦ２基因，利用重组ＣａＰ蛋白制备ＰＣＶ２ ＶＬＰ疫苗的可行性。【方法】根据大肠杆菌密码子使用频率表优化合成ＰＣＶ２ ＮＪ株ＯＲＦ２基因，将其插入原核表达载体Ｐ ＱＺ１，鉴定阳性后转入表达宿主菌ｂＬ２１，利用原核表达平台ＣＶＣ１１０２对重组菌进行诱导表达。利用ＳＤＳ－ＰａＧＥ与ＷＥＳｔＥＲＮ ｂＬＯｔｔｉＮＧ对目的基因的表达及产物的可溶性进行分析；利用电镜分析技术鉴定重组ＣａＰ蛋白ＶＬＰ组装；利用ｂＣａ试剂盒测定重组大肠杆菌破碎后上清中总蛋白量，利用薄层扫描分析确定目的蛋白百分比，得出目的蛋白量，将重组ＣａＰ蛋白的浓度调整为１ ｍＧ·ｍ Ｌ－１．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵晓云 乔绪稳 陈瑾 李鹏成 于晓明 朱国强 郑其升 侯继波
【目的】研究利用大肠杆菌可溶性表达PCV2b亚型ORF2基因,利用重组Cap蛋白制备PCV2 VLP疫苗的可行性。【方法】根据大肠杆菌密码子使用频率表优化合成PCV2 NJ株ORF2基因,将其插入原核表达载体pQZ1,鉴定阳性后转入表达宿主菌BL21,利用原核表达平台CVC1102对重组菌进行诱导表达。利用SDS-PAGE与Western blotting对目的基因的表达及产物的可溶性进行分析;利用电镜分析技术鉴定重组Cap蛋白VLP组装;利用BCA试剂盒测定重组大肠杆菌破碎后上清中总蛋白量,利用薄层扫描分析确定目的蛋白百分比,得出目的蛋白量,将重组Cap蛋白的浓度调整为1 mg.mL-1。使...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许宗丽 谢芝勋 谢丽基 刘加波 邓显文 谢志勤 庞耀珊 范晴 罗思思
设计了2对特异性引物,PCR扩增出鸭源NDV分离株GX2011/19的F基因和DuCV的Cap基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1,成功构建重组融合表达质粒pcDNA3.1-F-Cap。经酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pcDNA3.1-F-Cap转染Vero细胞,采用间接免疫荧光检测到目的基因的体外表达。将pcDNA3.1-F-Cap作为DNA疫苗对2周龄的SPF雏鸭以胸部肌肉多点注射的方式进行免疫。分3个实验组,每组接种剂量分别为100、200和300μg/只,另设2组为载体质粒空白组和灭活疫苗组。ELISA检测抗体水平,试验结果显示:各DNA疫苗免疫组的NDV抗体和DuCV抗体...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 王玉然 董美响
研究类猪圆环病毒2型因子P1体内诱导的细胞凋亡作用。将P1分子克隆接种普通仔猪,用原位末端标记技术(TUNEL)检测猪的扁桃体、脾脏、腹股沟淋巴结等免疫器官细胞的凋亡情况。猪感染P1后21和35 d的扁桃体、脾脏和腹股沟淋巴结等免疫器官细胞出现了凋亡。P1可能引起猪的免疫抑制。
关键词：
猪圆环病毒2型 P1 凋亡 TUNEL
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈果亮 余兴龙
将猪瘟病毒弱毒C株ST细胞苗以不同剂量(106 TCID50和105 TCID50)免疫28日龄仔猪,通过临床症状观察、病理剖检和组织病理学观察、抗体检测、特异性淋巴细胞增殖试验及抗原检测等方法评价疫苗免疫效果。结果表明:该疫苗接种仔猪后无任何临床症状,无病毒血症,无排毒现象;不同剂量免疫组,在2免后10 d左右猪瘟特异性抗体阳转,抗体水平于2免后20 d左右达到峰值。以上结果表明,猪瘟弱毒疫苗毒株C株的ST细胞传代疫苗对仔猪安全有效。
关键词：
猪瘟病毒 C株 ST细胞 免疫效果
[期刊] 华北农学报
[作者]
袁廷杰 王加启 杨永新 卜登攀 章玉涛 赵圣国 周凌云 李发弟
为探讨脲酶B(Ure B)亚单位疫苗免疫后奶牛血清蛋白质组分的表达变化。选用8头健康的泌乳荷斯坦奶牛,分为免疫处理组和空白对照组,分别于胯部两侧肌肉注射Ure B亚单位疫苗(含抗原蛋白0.2 mg)和生理盐水,每隔2周进行加强免疫,并于免疫后第56天采集奶牛血样,用间接ELISA法测定血清中特异性IgG、IgM和IgA效价,用二维凝胶电泳(2-DE)结合MALDI-TOF-TOF质谱技术研究血清蛋白质组表达变化。免疫处理组奶牛血清中特异性IgG效价显著高于对照组(P0.05)。血清蛋白质组分析发现6个差异表达蛋白...
关键词：
脲酶B亚单位疫苗 奶牛 血清 蛋白质组
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
魏春华 黄夏玲 杨圆 何乐 林志锋 徐叶 黄文琳 柳开隆 戴爱玲 杨小燕 刘建奎
[目的]利用DNA改组技术(DNA shuffling)对不同谱系的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因进行体外重组,构建具有良好交叉保护作用的DNA疫苗,为研制新型PRRSV疫苗提供参考。[方法]利用DNA改组技术对PRRSV谱系1、3、5.1、8.7毒株的ORF5基因进行体外突变重组,筛选去除信号肽的重组突变体。将重组突变体与真核表达载体pCAGGS-HA连接,构建重组表达质粒并进行酶切和测序鉴定,经脂质体转染MARC-145细胞,利用间接免疫荧光试验(IFA)和Western blotting试验检测目的蛋白的表达情况。将重组质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46(ORF5基因重组的DNA疫苗)免疫小鼠,试验同时设pCAGGS-HA空载体组、PBS空白对照组、弱毒疫苗组(经典弱毒疫苗Ingelvac PRRS MLV,MLV组)和pCA-ORF5-MLV组(ORF5基因来自Ingelvac PRRS MLV),评估其免疫效果。[结果]筛选到2个去除信号肽的重组突变体(ΔORF5-8和ΔORF5-46)。成功构建重组表达质粒pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46,其可在MARC-145细胞中表达GP5蛋白。与pCAGGS-HA空载体组和PBS空白对照组相比,pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46组免疫小鼠血清白介素4(IL-4)和干扰素γ(INF-γ)含量均极显著提高(P<0.01),脾淋巴细胞增殖能力均极显著增强(P<0.01),均能产生针对GP5蛋白的抗体,血清中和试验表明,免疫组小鼠血清能对异源毒株产生交叉中和抗体(抗体平均滴度为10～16)。[结论]重组DNA疫苗pCA-ΔORF5-8和pCA-ΔORF5-46均能有效刺激并诱导机体产生细胞及体液免疫应答,具有良好的免疫原性。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈汉忠 谢婷 罗秀帧 姚玲 郭直 孙坚 欧阳康 韦晓宝
将野毒(强毒)混合卵囊制成微囊型强毒鸡球虫疫苗,探讨该剂型球虫疫苗拌料免疫鸡的效果。结果表明,3个剂量组(200、300、400个卵囊/羽)的增重和肉料比均与空白对照组相当,其中200个卵囊/羽的增重和肉料比还略优于空白对照组。微囊型鸡球虫疫苗使用方便,不需逐只鸡免疫,节省人力物力,剂量较容易控制,即使用于免疫小鸡,只要剂量适宜也能获得安全的效果。该剂型球虫疫苗的进一步完善和推广应用,将为我国鸡球虫病的免疫预防提供新的方法。
关键词：
微囊型球虫疫苗 免疫剂量 免疫效果 鸡
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈瑾 黄春娟 于晓明 侯立婷 乔绪稳 郑其升 侯继波
为了研究ＰＥＤＶ的新型亚单位疫苗，提高ＰＥＤＶ亚单位疫苗的免疫原性，选取免疫增强剂ＣＶＣ１３０２、ＣＶＣ１３０３与国家兽用生物制品工程技术研究中心构建的可溶性表达ＰＥＤＶ Ｓ蛋白核心表位ＣＯＥ的重组蛋白（Ｐ ＱＺＣＯＥ－ＬＴＢ）混合乳化制成疫苗，免疫４周龄的ＩＣＲ小鼠，首免１４ Ｄ后加免１次，随后采集首免１４（加强免疫前），２１，２８，５５ Ｄ的小鼠血清，分别用琼扩试验的方法定性检测血清Ｉｇｇ抗体以及用ＥＬＩＳＡ试剂盒定量检测小鼠血清Ｉｇｇ抗体滴度动态变化，肠组织ＳＩｇＡ抗体滴度。结果表明，重组蛋白与ＣＶＣ１３０３配合使用免疫小鼠能产生显著高于灭活苗（ＣＶ７７７）阳性对照组的Ｉｇｇ和ＳＩｇＡ抗．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
秦磊 陆承平 陈怀青
将嗜水气单胞菌的胞外毒素(HEC) 和胞外蛋白酶(ECPase) 与迟缓爱德华氏菌脂多糖(LPS)、脱毒多糖(PS) 偶联, 制成3 种亚单位偶联疫苗 (HEC-PS、HEC-LPS、ECPase-PS), 分别免疫小鼠。另设这两种细菌的全菌灭活苗免疫及注射生理盐水对照组, 每组8 只。在第2 次免疫后第7 天用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT), 检测脾淋巴细胞转化率与腹腔巨噬细胞吞噬活性, 并检测各组小鼠的全菌凝集抗体。结果表明, 亚单位疫苗的这两项细胞免疫指标明显高于对照组,但略低于全菌灭活苗免疫组, 而细胞免疫指标与抗体水平无对应的平行关系。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
曾宪辉 曾令兵 周勇 范玉顶 陈倩 刘文枝 张雪萍 张琳琳
根据大鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus,GSIV)主衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因序列设计特异性引物,经PCR扩增得到MCP基因编码框1392 bp全长序列,将其定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组质粒并命名为pc DNA-MCP。将pc DNA-MCP质粒转染大鲵肌肉细胞系(GS-M),间接荧光免疫染色结果显示,MCP蛋白可在GS-M细胞中表达,且转染后72 h的表达量显著高于转染后48 h;收集转染后72 h的GS-M细胞,经Western blot检测,可检测到MCP蛋白的特异性表达...
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