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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
杜文敬 李昊 薛超 朴善花 王春生 安铁洙
为培育肌肉丰满绵羊品系,以前期试验中获得的干涉MSTN基因的转基因细胞株为核供体,进行核移植,将获得的重构胚进行体外培养和胚胎移植。结果表明:所获得的重构胚与绵羊成纤维细胞为核供体时的重构胚分裂比率(分别为44.6%和24.1%)及其发育至桑椹胚比率(分别为15.6%和33.0%)相比,差异无统计学意义;将重构胚移植23只受体后,获得1只流产胎儿,对其进行PCR鉴定,结果显示MSTN基因干涉序列已整合入流产胎儿的基因组中。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赛务加甫 张立 杨丽 彭新荣 郭志林 李向臣 权富生 安志兴 郑月茂 赵雪 张涌
以山羊皮肤成纤维细胞为供体细胞,绵羊去核卵母细胞为受体细胞进行种间体细胞核移植,构建山羊-绵羊重构胚,并对其采用离子霉素联合6-DM AP法和胞质注射绵羊精子提取物法进行激活,比较两种不同激活方法对山羊-绵羊种间体细胞核移植重构胚的激活效果。结果表明,共构建获得山羊-绵羊重构胚238枚,重构胚在体外能够发育至囊胚阶段;离子霉素联合6-DM AP法激活的卵裂率为58.33%(70/120),囊胚发育率为4.28%(3/70);胞质注射绵羊精子提取物法激活的卵裂率为63.55%(75/118),囊胚发育率为6.66%(5/75),两种方法的激活效果差异不显著。
关键词：
异种核移植 成纤维细胞 激活 山羊 绵羊
[期刊] 华北农学报
[作者]
汪立芹 王静 赵云程 林嘉鹏 黄俊成
旨在研究羔羊、胎儿成纤维细胞、绵羊类胚胎干细胞及处理方式对核移植效率的影响。比较了羔羊皮肤成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;胎儿成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;羔羊成纤维细胞、胎儿成纤维细胞、类胚胎干细胞在可用率及对融合率的差异和类胚胎干细胞与转基因羔羊皮肤成纤维细胞对核移植效率的影响。结果表明,饥饿对胎儿成纤维细胞可用率影响不大(P>0.05),但平衡时间影响极大(P<0.01);饥饿及平衡时间对胎儿成纤维细胞影响都很显著(P<0.01);胎儿成纤维细胞的可用率极显著高于类胚胎干细胞和羔羊皮肤成纤维细胞(P<0.01),融合率显著高于羔羊(P<0.05),但...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
付静涛 朱士恩 余文莉 刘国世 冯建忠 张忠诚
在生产条件下,对3个优良品种的127只绵羊(道塞特47只、萨福克49只、杜泊31只)和111只波尔山羊供体使用不同国别生产的促卵泡素(FSH)实施超数排卵处理,然后对1 231只小尾寒羊和奶山羊受体实施不同方法的胚胎移植,旨在筛选出切合于生产实际成本低、效率高的超数排卵和胚胎移植方案。实验结果表明,使用新西兰产FSH对波尔山羊超数排卵后平均获得可用胚胎14枚/只,显著高于澳大利亚产FSH效果(平均7.59枚/只)(P0.05);进一步采用中国科学院产和新西兰产FSH分别对道塞特、萨福克和杜泊3个品种...
关键词：
绵羊 山羊 超数排卵 胚胎移植 妊娠率
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘晓燕 于永生 刘晓辉 王正朝 王晓阳 朴庆林 张立春 金海国
【目的】利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料。【方法】以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得转K2.9基因细胞,将获得的转基因阳性细胞与体外成熟的绒山羊卵母细胞进行核移植,并对生产的重构胚进行了体外培养。本文分别进行了激活方法、供体细胞和卵母细胞来源的筛选,且对获得的囊胚进行了PCR鉴定。【结果】(1)Iono+6-D对成年羊卵母细胞的孤雌激活效果好于A23187+6-D,显著提高了胚胎的卵裂率。(2)羔羊孤雌胚的卵裂率显著低于成年羊,但...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
权富生 赵晓娥 刘风军 李相臣 杨春花 张涌
在绵羊胚胎移植供、受体麻醉中,用速眠新麻醉剂以肌肉注射和静脉注射2种方法给药,测定了麻 醉绵羊进入麻醉期的各项生理常数,观察了麻醉诱导期、麻醉期、苏醒期绵羊的表现及其所用时间,综合评定了麻 醉效果。结果表明,两种麻醉方法均可以取得良好的麻醉保定效果。与肌肉注射麻醉相比,静脉注射麻醉的用药量 只有肌肉注射的1／5-1／7,麻醉绵羊进入麻醉期时间短(平均1．03-3．82 min),手术后苏醒早,有利于提高胚胎移 植手术的效率,而且安全性较高。研究还发现,不同品种绵羊对速眠新的反应有差异,体重、体况、气候等因素均影 响麻醉剂的用药量和麻醉效果。
关键词：
速眠新 麻醉剂 绵羊 胚胎移植
[期刊] 华北农学报
[作者]
贺三刚 陈芯 刘晨曦 刘国松 刘明军
采用测序和PCR-RFLP的方法,分析了MSTN基因启动子区在7个品种绵羊中的单核苷酸多态性,结果表明:存在2个SNP位点(-959T/C,-784G/A),表现为6种基因型(TT、TC、CC、GG、GA、AA),在-959T/C位点中,国外肉用绵羊品种陶赛特、德国肉用美利奴及我区的巴士拜羊,TT为优势基因型,地方品种绵羊巴音布鲁克羊、多浪羊和阿勒泰羊在该位点中CC为优势基因型,经χ2检验,其群体的基因频率和基因型频率均处于Hardy-Weinberg平衡状态,群体遗传多态性分析表明,这6个绵羊品种中群体的多态信息含量(PIC)均处于0.25～0.50之间,为中度多态,特克赛尔羊在该位点未发生...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
汪立芹 陈大勇 周云 陈莹 林嘉鹏 吴阳升 黄俊成
【目的】为了在不影响后代生产性能的基础上最大限度地提高体内、体外胚胎移植效率,从而为体外胚胎在生产中的应用奠定基础。【方法】从移植胚胎数量方面着手,比较其对体内、体外胚胎移植受胎率和产羔率的影响;并以常用的胚胎移植作为对照,研究体外胚胎与其生产效率存在的差距;并对不同来源的后代生产性能进行测定,对比体外胚胎在生产中的生产效率。【结果】(1)移植2枚体外早期胚胎的受胎率(60.42%)显著高于移植1枚胚胎的结果(48.54%)(P<0.01);(2)移植单枚体外胚胎的受胎率和产羔率皆显著低于体内胚胎(P0.05)。(4)体外胚胎移植后代的公羔比例与体内胚胎没有差异,但显著高于自然繁殖(P0.05),且与自然繁殖组间都没有差异(P>0.05)。【结论】相对于早期胚胎,体外胚胎移植2枚,体内胚胎移植1枚的生产效率较高。并且对后代生产性能没有影响。
关键词：
绵羊 体外胚胎 胚胎移植 受胎率 产羔率
[期刊] 水产学报
[作者]
龚小玲 吴颖 崔忠凯 鲍宝龙
公鱼属种类曾在中国被广泛移植,但被移植的种类却存在一定的争议,实验利用COⅠ基因序列片段对来自黑龙江、新疆和云南3地7处移植公鱼属种类进行了鉴定,并对它们之间的遗传关系进行了探讨。与GenBank和DNA Barcoding鉴定中心的条形码网站BOLDSystems进行比对,发现3地7处的移植公鱼均与西太公鱼序列相似度达到99%以上;移植公鱼及西太公鱼群体间和群体内的遗传距离均在0.1%～0.3%,与公鱼属其它种类的种间遗传距离则在10%以上;在NJ、Bayesian系统树上,移植公鱼、西太公鱼聚为同一单系,支持率超过98%;以上结果都证明这些移植公鱼均为西太公鱼。研究表明,7处移植公鱼都受到...
关键词：
移植公鱼 西太公鱼 物种鉴定 COⅠ基因
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘满清 杨其恩 索伦 刘霖 牛晔 朱士恩
本实验对昆明白系小鼠的桑椹胚实施OPS法玻璃化冷冻,研究不同管内解冻程序对胚胎体内外发育的影响,旨在为小家畜胚胎冷冻、解冻和移植提供技术参数。采用OPS冷冻两步法(10%(体积分数)EG+10%(体积分数)DMSO溶液中平衡30 s,移入EDFS30平衡25 s)保存小鼠桑椹胚。一步法解冻是将OPS直接插到盛有0.5mol/L蔗糖的离心管中分别平衡1、2、3、4、5和6 min,解冻后经体外培养结果表明,平衡2~4 min组囊胚发育率(93.58%~97.22%)与对照组(100%)无显著差异(P>0 05);实施两步法解冻时将OPS先后插入0.5和0.25mol/L蔗糖中,体外培养结果显示,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周磊 李东旭 冒魏佳 刘孜斐 时晓丽 高雪 万永杰
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑（PrimeEditor，PE）对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素Myostatin（MSTN）基因外显子进行敲除，旨在比较两种技术敲除MSTN基因的效率，并验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊 MSTN基因的三个外显子分别设计sgRNA（single guide RNA， sgRNA）以及pegRNA（prime editing guide RNA， pegRNA），构建出相应的质粒，然后，将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染至湖羊骨骼肌卫星细胞中。24 h后观察细胞荧光，48 h后将细胞消化，使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞，收集细胞获得基因组DNA进行桑格测序，检测两种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因三个外显子敲除的基因编辑工具，质粒测序结果显示序列插入正确；CRISPR/Cas9编辑效率（65%，88%和91%）显著高于先导编辑的编辑效率（57%，29%和33%），而先导编辑的indel比率显著低于常规的CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下，常规CRISPR/Cas9相比于先导编辑对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除有更高的编辑效率。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晨曦 唐森 李文蓉 刘明军
【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘晓燕 杨梅 张寒莹 王正朝 汪立琴 陈童 郭志勤 王锋
【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70%～80%汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4d组;将供体细胞4℃保存2d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2n=56,核型式为...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戴津泼 华松 张涌
利用PCR反应延伸过程中,3′端碱基不配对,PCR反应不能启动的等位基因特异性PCR分析法(AS-PCR)原理,采用生物软件DNASTAR分析牛、羊线粒体细胞色素b(Cytb)基因,以牛、羊碱基差异较大位点作为上游引物的3′端来设计引物,进行PCR扩增反应,分析牛羊异种克隆胚中线粒体的变化情况。结果表明,AS-PCR法是一种快速、有效鉴定异种重构胚中线粒体异质性的方法。
关键词：
AS-PCR 核移植 线粒体 细胞色素b
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李俊杰 李俊 孙洁 桑润滋
【目的】提高山羊卵丘细胞核移植效果。【方法】采用秋水仙胺提高山羊卵母细胞去核率,5-氮-2'-脱氧核苷(5-aza-dC)和曲古菌素A(TSA)影响山羊卵丘细胞核移植胚胎。【结果】0.5μg·ml-1秋水仙胺处理山羊卵母细胞效果最好,胞质突起率达91.7%(P<0.05);通过比较盲吸去核法与化学辅助去核法的去核率及构建卵丘细胞核移植胚胎的体外发育能力发现,化学辅助去核法的去核率达100%,所构建的重构胚体外发育能力较高,桑椹胚率和囊胚率分别达25.2%和13.1%,显著高于盲吸去核法(P<0.05)。采用0.01μmol·L-1的5-aza-dC处理山羊卵丘细胞,核移植胚胎桑椹胚率和囊胚率分...
关键词：
山羊 卵丘细胞 核移植效果
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