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[期刊] 水产学报
[作者]
覃映雪 徐晓津 鄢庆枇 苏永全 刘力铭 李学刚
采用转座子mini-Tn10/Km构建了致病性溶藻弧菌的突变库,采用半固体双层平板初筛到73株运动缺陷突变株,初筛的突变株纯化及重复筛选后获得运动性缺陷表型稳定的突变株ND-01MM,Southern鉴定确定其为单位点插入。野生型菌株ND-01和运动缺陷突变株ND-01MM对致病性溶藻弧菌的天然宿主大黄鱼粘液的趋化、粘附以及在大黄鱼吞噬细胞内存活能力等生理功能的比较研究发现,溶藻弧菌运动缺陷后趋化及粘附能力均极显著下降(P0.05)。采用腹腔注射和浸泡两种方式感染大黄鱼,结果发现运动缺陷对浸泡感染的影响较为明显,但对腹腔注射的...
关键词：
溶藻弧菌 运动缺陷 转座子 毒力
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李倩 李贵阳 李杰 莫照兰
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的运动能力、菌膜形成能力、胞外蛋白酶产生能力等表型特征的变化与细菌的致病性相关。为了寻找影响鳗弧菌表型变化的基因，本研究使用转座子mini-Tn10 (pLOF/Kana)构建了鳗弧菌M3突变株文库，筛选影响表型变化的菌株及相关基因，证明了这些表型变化的突变子与毒力存在一定的相关性。对M3突变文库的1152突变子进行筛选，获得泳动能力改变的突变子1个(编号为6G＿1)，酪蛋白酶活性发生改变的突变子3个(编号为5A＿11、7B＿12和7E＿12)，明胶酶活性发生改变的突变子1个(编号为7H＿1)，以及菌膜形成能力发生显著变化的突变子3个(编号为5E＿2、6A＿2和6E＿12)。对转座子插入位点进一步分析显示，一个磷酸二酯酶相关基因突变引起泳动能力增强(P<0.05)，leuD、rseB和thiQ突变引起酪蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，potD突变引起明胶蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，leuO、ilvH和grpB的突变引起菌膜形成能力明显减弱(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑雪芳 刘波 朱育菁 陈德局 陈小强
【目的】研究青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)Tn5转座子突变菌株的异质性,筛选出无致病力高效生防菌株。【方法】利用已构建的青枯雷尔氏菌致病力参考指标"弱化指数(attenuation index,AI)"和接种番茄植株的生物测定法对60株供试的青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株进行致病力测定;利用高效离子交换色谱法研究不同致病力突变菌株的色谱行为异质性;构建色谱效价指数(chromatography titer index,CTIi),CTIi=Si/(S1+S2+S3)×100
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周向珍 朱辉
以百脉根根瘤菌MAFF303099为材料,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10 000个MAFF303099的转座接合子,构建随机插入突变体库进行保藏;同时建立了一套能从突变体库中快速筛选突变菌株的方法,且鉴定到共同结瘤基因nodB的突变体。结果表明:组成突变体库的接合子基因组中均有Tn5-sacB插入,三亲本转化效率为3.75×10(-5);与野生型相比,MAFF303099 nodB的突变体在表型上不能使其宿主百脉根形成根瘤。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
宣雄智 谢珍玉 周永灿 王世锋 吴学贵
提取了10株不同毒力的溶藻弧菌脂多糖,其中HN08811、HN08155、HN08813、HN08335、HN07006为毒力菌株,HN08805、HN08307、HN08156、HN08801和TG06003为非毒力菌株。分别取10μg进行SDS-PAGE电泳。结果表明,不同毒力溶藻弧菌脂多糖的电泳条带存在较丰富的多态性,在类脂质A区段(分离胶的上半部分),不同菌株间图谱呈片状堆积,多态性难以分辨;在抗原多糖O-特异性侧链条带区段(分离胶的下半部分),除HN07006外,毒力菌株的条带清晰,数目在7~9条之间,所有非毒力菌株产生细而密集的可辨条带。本文为一类遗传型的溶藻弧菌毒力菌株的快速鉴别...
关键词：
溶藻弧菌 脂多糖 毒力 多态性
[期刊] 华北农学报
[作者]
成业 么大轩 刘云婷 胡文静 段会军
为了探讨Ｍｕ转座子使玉米发生甜质突变的分子机理，利用Ｍｕ－ＡＦＬＰ方法分离ＭｕｔＡｔｏｒ转座子插入位点的侧翼序列，并根据侧翼序列的延伸设计一对特异性引物Ｐ１、Ｐ２，验证转座子插入的真实性，同时对插入位点所在的基因进行生物信息学分析。结果显示：侧翼序列长２９９ ｂＰ，插入位点位于第３染色体，该转座子的插入属于真实插入；突变基因全长５ ７４６ ｂＰ，共编码５９２个氨基酸；所编码蛋白的理论分子量为６７．５ ｋ ＤＡ，疏水性氨基酸含量为４２．０６％，具有１０个跨膜结构域，属于亲水性内膜蛋白。该结果为更好地利用ＭｕｔＡｔｏｒ转座子创制甜玉米新种质奠定了基础，也对揭示玉米胚乳发育与淀粉合成机制具有重要意义．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
卫亚红 段敏 向照举 曲东 王瑶
【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株４Ｆ６中的邻苯二酚－２，３－双加氧酶基因（Ｃ２３Ｏ），构建其Ｔｎ５插入突变体，为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的３Ｇ７Ｔｎ５突变体菌株为基础，借助ｐＫＤ４６质粒的λ－ｒｅＤ同源重组酶，将转座子Ｔｎ５从菌株３Ｇ７中电击转化至４Ｆ６，消除ｐＫＤ４６质粒，敲除４Ｆ６菌株中的Ｃ２３Ｏ基因，测定出发菌株３Ｇ７、４Ｆ６及Ｔｎ５插入突变体菌株３Ｇ７－Ｇ９、３Ｇ７－Ｈ５、４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５间位苯环的裂解活性。【结果】４２℃条件下消除了Ｔｎ５插入突变体受体菌４Ｆ６中的ｐＫＤ４６质粒，构建了４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５突变体。Ｔｎ５转座子插入突变．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马欣 刘俊 乔俊卿 伍辉军 高学文
为了鉴定枯草芽孢杆菌定殖和促进植物生长相关基因,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA转化枯草芽孢杆菌OKB105菌株。高温诱变条件下,筛选了2 000个转座子插入突变的单克隆,构建了OKB105菌株的突变体文库。对随机挑选的15个突变体采用PCR及Southern杂交验证,结果表明:转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到OKB105菌株的染色体上。
[期刊] 水产学报
[作者]
储卫华 陆承平
以携带质粒ｐＡＭ１２０（Ａｐｒ、Ｔｃｒ／Ｔｎ９１６）的大肠杆菌ＣＧ１２０株为供体菌，与受体菌嗜水气单胞菌Ｊ－１株，采用滤膜接合法进行接合转移，在选择平板（含Ｔｃ、ｃｆｚ和脱脂奶）上进行筛选，筛选出６株蛋白酶缺失株（ＥＣＰａｓｅ－），ＥＣＰａｓｅ－菌株其生长速度，对正常鲫血清的抗性降低，用脱脂奶平板法及底物法检测，蛋白酶产霞明显降低。与亲本Ｊ－１株相比，突变株致病力降低，对鲫的半数致死量大于１０~８（Ｊ－１株对鲫的半数致死量为５×１０~３）。用ＥＣＰａｓｅ－突变株 ＭＪ－１株的１８ｈ培养物（５ ×１０~６ＣＦＵ）接种健康鲫，不产生亲本 Ｊ－１株引起的病变及死亡。用ＭＪ－１活菌免疫鲫，在第５周产生...
关键词：
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 Tn916诱变
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董玉慧 罗力嘉 李梦莹 欧喜超 刘春法 范伟兴 赵雁林 周向梅
为了解我国新疆地区牛分枝杆菌的毒力基因变异情况并初步评估其毒力变化,利用聚合酶链式反应(PCR)检测临床分离的66株牛分枝杆菌的29个毒力基因,经Sanger测序后与标准株AF2122/97和本实验室保存的两株牛分枝杆菌(M.bovis C68004和M.bovis N)进行序列比对,对基因突变情况进行统计,分析基因突变对其编码蛋白功能和结构的影响。结果表明:1)临床分离株与本实验室保存的高毒力菌株M.bovis N毒力基因突变位点具有很高的相似性,在检测的29个毒力基因中,50%以上临床分离株与M.bovis N共有25个基因序列一致;2)临床分离株广泛存在的Mb2958、Mb2982C和Mb1553C基因突变PROVEAN评分均低于-2.5,可能改变其编码的酶催化活性,进而影响细胞壁脂类合成;3)Mb0607、Mb0609、Mb0606、Mb2979C和Mb1214基因突变分别造成哺乳动物细胞入侵蛋白、甲基转移酶和酰基转移酶蛋白二级结构改变,或许对细菌的胞内生存产生影响。综上,本研究筛选出8个关键毒力基因,这些基因的突变可能在新疆地区牛分枝杆菌流行菌株的毒力变化中发挥重要作用;同时,本研究揭示了关键毒力基因的突变特征,为进一步研究牛分枝杆菌遗传多样性及进化规律奠定了基础。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
胡梦华 马立才 赵姝 刘旭 周俊芳 房文红
从发病的凡纳滨对虾中分离并经鉴定得到一株溶藻弧菌（命名为：Ｖ＿Ａ－７６），通过对虾回感实验和药物敏感性实验分别对Ｖ＿Ａ－７６菌株的耐药表型和致病能力进行了研究，并运用ＰＣＲ方法检测了该菌的毒力相关基因、整合子和耐药基因的携带情况。对虾感染实验结果表明，溶藻弧菌Ｖ＿Ａ－７６能够导致凡纳滨对虾发病死亡。经ＰＣＲ检测发现，该菌携带８种毒力相关基因：ｔｄｈ、ｔｌｈ、ｔｏｘ Ｓ、ＣｏｌｌＡｇｅｎＡＳｅ、ｆｌＡ Ａ、ｏｍＰ Ｗ、ＡＳＰ Ａ和ｆｕＲ。药敏结果显示，Ｖ＿Ａ－７６对环丙沙星、氯霉素、链霉素、红霉素、磺胺甲噁唑、复方新诺明和利福平７种药物表现出较高的耐药水平，且该菌包含１类整合子、４类超级整合子Ｓ．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
郑玉东 张翔 姚梦丽 谷莉 黄博闻 辛鲁生 白昌明 王崇明 唐小千
我国是贝类养殖产量最高的国家，近20年来贝类养殖年产量保持在1 000万t以上。流行性病害给贝类养殖产业造成的经济损失逐年上升，2021年高达100多亿元。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是近年来贝类病害中最常见的细菌性病原之一，对贝类养殖产业的健康发展构成严重威胁。本研究旨在分析不同养殖环境水体和贝类组织中，溶藻弧菌的基因变异、毒力基因、耐药性及其分布规律。对12株溶藻弧菌分离株开展多位点序列分型(multilocus sequence typing， MLST)、毒力因子以及菌株耐药性分析，研究结果表明，12株溶藻弧菌的序列型(sequence typing， ST)分型互不相同，7株为PubMLST数据库已经收录的ST型，5株因管家基因的等位基因位点变化而形成新的ST型；上述结果显示，贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有较高的遗传多样性。12株溶藻弧菌都携带tlh、fur和collagenase三种毒力基因，但均未检测到tdh、trh、toxR和tcpA毒力基因。溶藻弧菌携带毒力因子的种类和数量受地区分布等因素的影响。不同来源的溶藻弧菌均具有多重耐药特征，对青霉素和氨苄西林产生抗性。本研究表明，贝类养殖环境中的溶藻弧菌具有种群复杂、遗传多样性高的特点；不同来源菌株在毒力基因携带和耐药性方面存在较大差异。本研究通过探究不同区域内不同来源的溶藻弧菌遗传变异及耐药性差异，对贝源溶藻弧菌的有效防控提供一定理论参考。
关键词：
溶藻弧菌 MLST 毒力基因 耐药性分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张如佳 王阳 王美南 井金学 李振岐
为了得到带有明确遗传标记的毒性突变菌株,应用基因枪转化技术,以小麦条锈菌野生白化菌系为转化受体,以含有潮霉素抗性基因(Hyg)的质粒为插入载体,对基因枪介导小麦条锈菌插入突变的条件进行了研究。结果表明,当小麦条锈菌夏孢子萌动2 h,可裂膜承载压力为1 100 Psi时进行轰击转化,所得的小麦条锈菌夏孢子在含有潮霉素的培养基上萌发率最高,为36.09%。进一步将转化的小麦条锈菌夏孢子进行扩繁,在筛选品种上筛选,将筛选到的突变体在其上继代培养4代,获得了两个稳定的毒性突变菌株MM-2、MM-3。MM-2菌株对南大2419的毒性减弱,反应型由野生菌系的4型变为2型;MM-3菌株在南大2419的反应型...
关键词：
小麦条锈菌 基因枪 毒性变异 插入突变
[期刊] 华北农学报
[作者]
李淼 李春玲 宋帅 杨冬霞 蔡汝健 李艳 蒋智勇 勾红潮 楚品品
分泌型核酸酶基因ssnA是近年来研究发现的一种脱氧核糖核酸酶,被认为是一种猪链球菌2型(SS2)潜在的毒力因子。为了分析ssnA基因对于SS2毒力的影响,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组构建了SS2流行毒力株GD01的ssnA基因缺失突变菌株,并通过比较分析了野生菌株与缺失突变菌株的生长特性及溶血活性等生物学特性。结果显示,GD01株与ΔssnA突变株的生长速度及溶血活性没有明显差异;ssnA基因缺失后SS2对Hep-2细胞的黏附及入侵能力则明显下降。小鼠毒力试验结果显
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张婷婷 辛颖 张志强 任充华 杨涵江 王令 张智英
【目的】构建在小鼠水平上实现多个目的基因的表达以及标记基因安全删除的转基因载体。【方法】以载体为模板,分别扩增SV40P neo、IRES、tk-PloyA,通过overlap PCR连接,并在两端添加方向相同的LoxP序列,构建转基因基本载体PB-NIT;然后通过overlap PCR扩增获得Tet-CMV-SV40 T-T2A-p 53-PolyA基因表达盒,将其插入PB-NIT中,构建载体PB-NIT-STP;最后将转录因子激活域rtTA通过同尾酶连接插入PB-NIT-STP,构建载体PB-rtTA-NIT-STP。【结果】经酶切和测序等鉴定,以上载体均正确;经转座活性鉴定,共转染转座子...
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