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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孟超敏 张晓东 陈天佑
采用改进的CTAB法,研究了与PCR相匹配的转基因小麦单株微量DNA的快速提取方法。结果表明,该提取方法简便、快速、有效,提取的DNA产量和质量完全可以用于PCR扩增。对标准PCR的反应体系进行优化,建立了最佳的转外源高赖氨酸基因小麦植株的PCR扩增体系,即10×R eaction Bu ffer 2.5μL,M gC l225 mm o l/L,dNTP s 2.5 mm o l/L,模板DNA 30~60 ng,引物1.2μm o l/L,T aq酶1 U,加ddH2O至25μL,优化的PCR反应体系显著提高了转基因小麦植株筛选和鉴定的效率。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈茹 林志雄 刘琳琳 朱道中 罗长保 颜思通
取含有小鼠重金属螯合蛋白 (mMT)基因启动子及人生长激素 (hGH)基因的鱼样品 ,以Qiagene核酸纯化技术对鱼组织DNA进行纯化。常规PCR检测显示 ,mMT启动基因和hGH基因的PCR产物分别为2 4 0bp和 130bp ,与设计相符。PCR产物的核酸测序结果证实其扩增产物具特异性。地高辛 PCR(Dig PCR)标记反应显示 ,2个基因均产生 1条Dig标记的特异产物带。Dig PCR ELISA检测敏感性试验显示 ,对mMT启动子和hGH基因的检测敏感性可达 10 - 3,与常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳检测方法相比 ,检测敏感性可提高至 10 0～ 10 0 0倍。试验证明 ...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
甄贞 张明辉 刘营 敖金霞 于艳波 李璐 曲波 仇有文 高学军 张克俭
根据转基因玉米品系NK603外源插入片段与玉米基因组序列设计品系特异性引物,建立转基因玉米品系NK603的品系特异性环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,并对此方法进行灵敏度、特异性测试。试验表明该方法能够快速检测出转基因玉米NK603品系成分,检测灵敏度为0.1%,并具有较高的特异性和较好的稳定性。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘建越 邓欣 康林 余道坚 高必达 陈冬美
分别以RBCL基因和PRSV-CP基因、PRSV-RP基因为内源基因和目标基因,设计了3对特异性引物,对转基因番木瓜进行了SYBRGreen实时荧光PCR检测.结果表明,RBCL基因引物对所有供试样品成功扩增,Ct值为15～16,PRSV-CP引物对转PRSV-CP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为20～25,PRSV-RP引物对转PRSV-RP基因番木瓜样品成功扩增,Ct值为21～22.运用熔解曲线进行产物分析,验证了试验结果的特异性和准确性.
[期刊] 林业科学
[作者]
王学聘 卞祖娴 张香华 卢孟柱
欧美杨转基因植株的ＰＣＲ检测王学聘，卞祖娴，张香华，卢孟柱（中国林业科学研究院林业研究所北京１０００９１）关键词欧美杨，转基因植株，聚合酶，链式反应聚合酶链式反应（ＰｏｌｙｎａｅｎｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）是近几年发展起来的操作简便、结果...
关键词：
欧美杨,转基因植株,聚合酶,链式反应
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
朱元招 尹靖东 李德发 王凤来
试验建立大豆中转基因成分的定量测定方法。采用双链DNASYBRGreenI结合染料实时荧光定量PCR技术,扩增编码大豆凝集素的内参照基因lec和抗草甘膦转基因大豆中的外源花椰菜花叶病毒CaMV35s基因,绘制2种基因扩增的循环数拷贝数标准曲线图,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量;并作重现性和熔解曲线分析。结果表明,lec和CaMV35s基因标准曲线方程线性好,R2值分别达到0.9997和0.9992。不同转基因含量的标准及模拟大豆样品定量显示,实测值与实际值接近,相对偏差5%～11%。SYBRGreenI实时定量PCR方法可用于定量测定大豆中转基因品种的含量。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘翠芳 蒋继志 马平 李岩
转基因植物的安全性问题已成为全球争论与关注的焦点,许多国家都加强了对进出口转基因植物及其产品的管理,因此发展转基因产品的检测方法就显得尤为重要。PCR-ELISA是一种检测转基因植物及其产品的有效方法,现对PCR-ELISA方法的原理、优点及其在转基因植物及其产品检测中的应用进行了综述,并对其发展前景进行了分析。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈贞 芦春斌 杨梦婕 马骏 白卫斌 吴希阳
以棉花内源基因sad1、报告基因GUS、外源抗虫基因Cry1 Ab/Ac、筛选基因NPTⅡ、NOS终止子和CaMV35 S启动子为检测对象,设计的6对引物能扩增长度合适的基因片段且避免了引物二聚体。通过优化PCR扩增体系中不同引物终浓度的配比以及退火温度对多重PCR检测的影响,建立了棉花转基因成分6重PCR检测体系。结果表明:采用本研究建立的棉籽基因组DNA提取方法,该6重PCR检测体系能够有效地从少至1颗棉籽的少量样品里检测出棉花中的转基因成分。
关键词：
棉花 转基因检测 多重PCR
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
桂枝 韦东胜 高建明
以靶序列的选择、DNA提取和产物的检测为主线,概括了PCR(PolymeraseChainReaction,PCR)在定性检测基因修饰有机体(Geneticallymodifiedorganisms,GMOs)中的应用,指出了存在的问题以及未来的发展方向。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卫波 景蕊莲 王成社 昌小平
【目的】以2份六倍体小麦Opata85和W7984及其重组近交系(RIL)的111个株系和3份小麦二倍体野生近缘种为材料,研究用等位基因特异PCR检测普通小麦中单核苷酸多态性的方法。【方法】利用直接测序的方法检测2份六倍体小麦和3份小麦二倍体野生近缘种TaDREB1基因的DNA序列,在B基因组上发现了2个SNPs。以其为3′端,设计等位基因特异引物及其互补引物,对SNP进行分型,同时研究了特异引物3′端碱基错配对等位基因特异PCR的影响,优化了PCR反应体系。【结果】等位基因特异引物3′端不同位置的碱基错配及不同类型的碱基错配对PCR结果影响较大;在等位基因特异PCR中,Mg2+、dNTP及T...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
叶兴国 Shirley Sato 徐惠君 杜丽璞 Tom Clemente
以预培养 4 d的小麦幼胚愈伤组织为受体 ,L B培养基上激活培养 3 d或 AB培养基上激活培养 4 d,并在WCC培养基中重悬的 C5 8c1农杆菌菌系为供体 ,将含有目的基因、标记基因的 p PTN2 4 9、p PTN 2 5 4、p PTN2 70、p SIS-GFP等重组 DNA质粒转入了小麦 ,经在含 10～ 5 0 mg/ L geneticin( G4 18)、5 0 mg/ L cefotaxime、5 0 m g/ L vancomycin、5 0 m g/ L ticillicin选择培养基上多次选择 ,移栽前利用 npt EL ISA检测 ,移栽后利用叶片离体退绿、P...
关键词：
小麦 农杆菌 转基因植株 单拷贝整合
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏霜 陈贞 马骏 白卫滨 吴希阳
【目的】建立基于多重串联式PCR(multiplexed tandem PCR,MT-PCR)的基因碟片技术,并使之应用于转基因作物的大量、快速和稳定地检测。【方法】以转基因作物研究中常用的调控序列NOS终止子、FMV35S启动子及外源基因NPTⅡ、Cry1Ab、Cry1Ab/Ac、CP4-EPSPS、PAT和玉米内源基因IVR、棉花内源基因sad1、菜籽粕内源基因PEP为检测对象,针对每个基因设计内外2对引物,先进行一次循环数较少(10—20 cycles)的高通量多重PCR,以便在均匀地扩增各基因和调控序列的同时避免引物之间的竞争,然后利用巢式荧光定量PCR检测各个基因和调控序列,最后根据...
关键词：
转基因 多重串联式PCR 基因碟片技术
[期刊] 中国农业科学
[作者]
樊明涛 毕静莹 Mansel W Graffith
【目的】研究棒曲霉素扩张青霉菌(Penicillium expansum)的快速和特异性PCR检测方法。【方法】通过P.expansum的纯菌平板和液体培养以及纯菌接种于苹果、苹果果肉和苹果汁,用Cenis改良方法提取DNA,以基于isoepoxydon dehydrogenase和polygatacturonase编码基因的两对引物扩增P.expansum DNA,建立特异和快速的检测P.expansum的方法。【结果】基于polygatacturonase基因的引物具有很强的特异性,只有目标DNA片段被扩增,而基于isoepoxydon dehydrogenase基因的引物扩增特异性较差。...
关键词：
苹果 扩张青霉 PCR 快速检测
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘营 张明辉 霍楠 仇有文 敖金霞 高学军
为建立转基因大豆OsDREB3品系特异性定性检测方法,以转基因大豆OsDREB3为研究对象,通过染色体步行方法,成功获得转基因大豆OsDREB3上pCAMBIA1301质粒外源基因插入位点的5′端旁侧序列,其扩增片段覆盖了转化载体及转基因大豆基因组旁侧序列,扩增片段大小为344bp。同时根据旁侧序列设计引物,建立OsDREB3品系特异性定性PCR方法,以典型的转基因作物证明该方法检测转基因大豆OsDREB3具有高特异性,灵敏度为0.1%。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
邱驰 董薇 曹际娟 段玉玺
根据转基因油菜RT73品系转入的外源基因质粒图谱,设计品系鉴定的特异性引物,进行SYBR!Green I实时PCR检测,建立转基因油菜品系鉴定的SYBR Green I实时PCR方法。同时针对油菜FatA基因设计出内源基因。结果表明:应用实时PCR技术,利用SYBR Green I染料能选择性结合双链DNA的特点,可检测到RT73品系特异性靶序列扩增所产生的荧光信号,且通过溶解曲线确定其熔点值为80.2(±0.5)。SYBR Green I实时PCR能通过溶解曲线有效地区分特异性产物、非特异性产物以及引物二聚体,是鉴定转基因油菜RT73品系的新方法。
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