- 年份
- 2024(10502)
- 2023(15146)
- 2022(13011)
- 2021(12221)
- 2020(10263)
- 2019(23529)
- 2018(23360)
- 2017(44168)
- 2016(24255)
- 2015(27452)
- 2014(27297)
- 2013(26715)
- 2012(24623)
- 2011(22026)
- 2010(22156)
- 2009(20506)
- 2008(19104)
- 2007(16987)
- 2006(14973)
- 2005(13178)
- 学科
- 济(87005)
- 经济(86892)
- 管理(66938)
- 业(63065)
- 企(53655)
- 企业(53655)
- 方法(39031)
- 数学(33326)
- 数学方法(32866)
- 中国(29518)
- 融(27936)
- 金融(27928)
- 银(26363)
- 银行(26286)
- 行(25343)
- 财(25023)
- 农(23475)
- 学(23150)
- 制(21105)
- 业经(20576)
- 地方(20391)
- 理论(17413)
- 务(16427)
- 财务(16351)
- 财务管理(16317)
- 贸(16205)
- 贸易(16192)
- 易(15764)
- 农业(15747)
- 企业财务(15548)
- 机构
- 大学(334341)
- 学院(333034)
- 管理(125657)
- 济(123523)
- 经济(120509)
- 研究(116065)
- 理学(108306)
- 理学院(107003)
- 管理学(104792)
- 管理学院(104241)
- 中国(91139)
- 科学(76655)
- 京(72443)
- 农(63973)
- 所(60407)
- 财(58486)
- 研究所(55473)
- 业大(55314)
- 中心(54151)
- 农业(50772)
- 江(49587)
- 财经(46313)
- 北京(45664)
- 范(43458)
- 师范(42800)
- 院(42484)
- 经(42059)
- 州(40794)
- 技术(39165)
- 经济学(36481)
- 基金
- 项目(232202)
- 科学(179689)
- 基金(165887)
- 研究(164690)
- 家(147533)
- 国家(146294)
- 科学基金(123370)
- 社会(99313)
- 社会科(93910)
- 社会科学(93879)
- 省(93115)
- 基金项目(87934)
- 自然(83337)
- 自然科(81350)
- 自然科学(81328)
- 自然科学基金(79833)
- 划(78861)
- 教育(75515)
- 资助(68807)
- 编号(67174)
- 成果(55095)
- 重点(52739)
- 发(49590)
- 部(49242)
- 创(48514)
- 课题(47577)
- 科研(45348)
- 创新(45315)
- 计划(45055)
- 大学(42583)
- 期刊
- 济(134603)
- 经济(134603)
- 研究(96598)
- 中国(69501)
- 学报(63173)
- 农(58069)
- 科学(54412)
- 管理(46576)
- 大学(46193)
- 财(44721)
- 学学(43735)
- 融(40817)
- 金融(40817)
- 教育(39454)
- 农业(39446)
- 技术(28189)
- 业经(22015)
- 财经(21998)
- 经济研究(21650)
- 业(20548)
- 经(18698)
- 图书(17936)
- 业大(17235)
- 版(17116)
- 问题(16962)
- 科技(16960)
- 理论(16670)
- 实践(15412)
- 践(15412)
- 技术经济(14418)
共检索到497612条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾文超 甘鹏 熊亮 潘传英 蓝贤勇 陈宏
【目的】构建pTAT-bSox2-9R融合表达载体,并对其进行原核表达研究,为利用TAT和多聚精氨酸(9R)的跨膜作用实现转录因子蛋白直接重编程牛体细胞提供科学资料。【方法】以GenBank上公布的牛Sox2基因编码区序列为基础,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物;利用PCR扩增方法获得包括Sox2、TAT和9R的重组DNA序列,并将其克隆到空质粒pTAT-HA上,从而构建pTAT-HA-bSox2-9R重组表达载体;将经酶切鉴定和测序验证后的重组表达载体转化大肠杆菌,在不同IPTG浓度和诱导时间等条件下进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵轶君 董浩 潘红艳 徐芳 赵佳 步怀宇 李红民
为开发以绿色荧光蛋白(GFP)为基因的原核表达载体,根据NCBI基因序列设计引物,通过PCR扩增获得GFP编码基因,经限制性核酸内切酶消化后将GFP定向克隆至原核表达载体pMAL-c2X中malE基因下游的EcoRⅠ与HindⅢ位点之间,与malE基因融合为一个表达框。重组产物转化E.coli TB1感受态细胞,在添加有50 mg/mLAMP、10μmol/L IPTG的LB平板上于37℃培养12～16 h后放置于25～30℃的培养箱中继续培养4～6 h,365 nmUV照射下挑取转化克隆,经扩大培养后用IPTG诱导GFP的表达并用SDS-PAGE检测表达效率。结果表明,融合在麦芽糖结合蛋白下...
[期刊] 华北农学报
[作者]
王晓晔 石博妹 王英群 李珣 刘徳玉 李铭 李芳芳 胡传活
人工抗凋亡蛋白ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ能保护多种因素引起的细胞异常凋亡，为了获得高纯度Ｂｃｌ－ｘ ｌ与ＰＴＤ（ＰｒｏＴｅｉｎ ＴｒａｎｓＤｕｃＴｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ）的融合蛋白，首先采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取ｓＤ大鼠肝脏总ｒｎａ，将ｒｎａ反转录为ｃ Ｄｎａ，设计引物以ｃ Ｄｎａ为模板，Ｐｃｒ扩增Ｂｃｌ－ｘ ｌ基因，构建Ｐ ｕｍ１９－Ｔ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ质粒，并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定；其次设计包含ＰＴＤ序列的Ｂｃｌ－ｘ ｌ引物，以测序正确的Ｐ ｕｍ１９－Ｔ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ质粒为模板，Ｐｃｒ扩增ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ序列，将扩增序列克隆入Ｐ ｅＴ２８ａ载体，构建ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ蛋白的原核表达质．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨秀霞 侯雪宁 徐彬 郝萧 姜国建 樊廷俊
为了探索适用于体外培养的鱼细胞外源基因转入方法,本研究通过构建红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)转录因子Sox2的重组表达载体p ET32a(+)-Sox2-11R-6His,诱导表达并纯化得到了C末端连接多聚精氨酸(11R)的重组蛋白Sox2-11R-6His,以其与红鳍东方鲀精巢细胞系细胞共孵育12 h后,光镜观察结合Western Blot检测发现重组蛋白进入细胞的效率与浓度呈剂量依赖关系且最佳孵育浓度为8μg/m L,当重组蛋白质量浓度达到10μg/m L时,表现出明显的细胞毒性。对外源蛋白进行免疫荧光标记定位,发现重组蛋白分布于细胞质,部分进入到细胞核中。证明了穿膜肽1...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
王海峰 许文涛 苏春元 黄昆仑 罗云波 谷新晰 邱芳萍
从人体肾脏组织中提取的总RNA中通过反转录PCR(RT-PCR)扩增得到了ELA2B基因,并将其克隆到pGEM-T easy载体中。然后用限制性内切酶BamH I和HindⅢ对重组质粒pGEM-T easy/ELA2B和大肠杆菌E.coli表达质粒pET30a进行双酶切,成功构建了原核表达载体pET30a/ELA2B。将重组质粒转化大肠杆菌表达宿主BL21中,通过PCR和表型鉴定表明,ELA2B基因已经整合到大肠杆菌BL21染色体上。用IPTG对重组的大肠杆菌BL21进行诱导表达,得到的蛋白经SDS-PAGE分析结果表明:菌体中含有一明显特异性蛋白,大小为28 kD。经包涵体复性后在弹性蛋白酶...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
乔艳艳 杨翠云 于翠 曹洁 马青 张丽莉
根据烟草环斑病毒外壳蛋白(TRSV-CP)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,获得烟草环斑病毒基因组中编码外壳蛋白部分基因片段,将其插入原核表达载体pET28a中,获得重组表达质粒pET-CP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导蛋白大量表达。重组蛋白经过Ni+-NTA纯化后,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,TRSV-CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子质量约为34 ku,并具有免疫学活性。以纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,多抗血清效价达1∶409 600,可以与重组蛋白发生抗原抗体反应。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵传志 苏磊 李爱芹 夏晗 李长生 王兴军
克隆大豆油体蛋白特异启动子及油体蛋白基因的全长序列,利用连接PCR的方法,通过一个肠肽酶位点将人成骨蛋白成熟肽编码序列连接到油体蛋白基因3’端并克隆到表达载体pCAMB IA1302中,构建"油体蛋白-肠肽酶-人成骨蛋白"植物表达载体。通过酶切、PCR和测序鉴定,证明表达载体构建成功,将其命名为pCAM-oleo-Bmp7。通过蛋白分析软件DNAstar、S ignalP3.0和ProtComp v8.0等软件对重组蛋白的理化性质、二级结构、信号肽和细胞定位进行了分析和预测,证明融合蛋白很好的保留了原来两个蛋白的二级结构和理化性质。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李君武 宫君原 刘鑫 叶秋萍 黄清华
构建包含编码结核杆菌Esat6基因和乙肝病毒大包膜蛋白(L蛋白)基因的植物双元表达载体,并转化根癌农杆菌LBA4404。分别以质粒pPIC9K-L和结核杆菌基因组为模板进行PCR扩增,获得L和Esat6基因,然后运用部分重叠聚合酶链式反应扩增出L-Esat6融合基因片段,连接到有玉米特异性启动子globulin-1的pEGG载体上,将G-L-Esat6融合基因片段酶切下,连接到含有抗除草剂基因bar的双元表达载体pCAMBIA1300上,电击法将重组质粒转化到农杆菌LBA4404中。构建了真核表达重组质粒pCAMG-L-Esat6,测序分析表明,克隆的L和Esat6序列与NCB I上公布序列一...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧阳乐军 梁卓玲 黄真池 沙月娥 曾富华
【目的】构建aiiA基因的原核表达载体，并进行诱导表达，检测aiiA蛋白的抗病性，为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】 从pMD-TM-19-T Vector＋aiiA质粒中酶切获得aiiA基因，将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1＋aiiA，经双酶切及测序鉴定后，进行诱导表达，并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明，重组原核表达载体pGEX-4T-1＋aiiA构建成功。表达条件优化结果表明，在25 ℃下用0.2 mmol/L IPTG诱导9 h，aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明，...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
欧阳乐军 梁卓玲 黄真池 沙月娥 曾富华
【目的】构建aiiA基因的原核表达载体,并进行诱导表达,检测aiiA蛋白的抗病性,为进一步通过转基因技术培育转aiiA基因植株奠定基础。【方法】从pMDTM19-T Vector+aiiA质粒中酶切获得aiiA基因,将其与pGEX-4T-1表达载体连接构建重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA,经双酶切及测序鉴定后,进行诱导表达,并对表达产物的功能进行鉴定。【结果】双酶切与PCR检测结果表明,重组原核表达载体pGEX-4T-1+aiiA构建成功。表达条件优化结果表明,在25℃下用0.2mmol/L IPTG诱导9h,aiiA蛋白的表达量最高。aiiA重组蛋白抑菌试验结果表明,其能够降解细...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李军 吕长荣 窦琳 窦忠英
【目的】构建小鼠Nanog基因原核表达载体并进行表达,以期得到大量GST融合蛋白。【方法】根据Gene Bank中的Nanog序列及pGEX-KG中的多克隆位点设计引物,以含有Nanog基因片段的pNA992重组质粒为模板,经PCR扩增出918 bp的DNA片段。将所得片段与pGEX-KG载体连接,转化TGⅠ大肠杆菌,筛选阳性克隆,其扩增片段测序结果与原序列一致,表明原核表达载体pGEX-KG-Nanog已构建成功。提取pGEX-KG-Nanog质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中,经IPTG诱导后收集菌体进行SDS-PAGE电泳鉴定,并优化其表达条件。【结果】在大肠杆菌中获得Nanog基因...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘峰 曹雅琴 张学文 李良勇 邓晶 郭清泉
通过RT-PCR获得UDPGDH cDNA序列,经酶切、连接,以pET-32a为原核表达载体,构建成pET-32a-UDPGDH重组表达载体.经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化表达受体菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导后表达出1个约53 000的蛋白,与推测的UDPGDH编码产物的大小一致.凝胶成像分析表明,最高表达量可占菌体总蛋白的47.1%,表明UDPGDH重组载体在大肠杆菌中获得了稳定的表达.
[期刊] 华北农学报
[作者]
毕研丽 沈小燕 丛国正 刘湘涛 常惠芸 才学鹏
为研究口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因的分子生物学特性及定位,构建了3D基因真核表达载体pEGFP-3D,观察了3D在BHK-21细胞中的瞬时表达情况。从重组质粒pMD18-T-3D扩增到3D基因,与pGEM-T easy载体连接,将鉴定为阳性的重组质粒pGEM-3D与表达载体pEGFP-N1分别经BamHⅠ/HindⅢ酶切,进行定向亚克隆;重组表达质粒pEGFP-3D经PCR、酶切鉴定,阳性质粒进行测序。利用脂质体介导阳性pEGFP-3D质粒转染BHK-21细胞,免疫组化检测转染细胞中3D基因表达情况和3D基因在细胞中的定位,Western blotting验证pEGFP-3D融合基因的表达。...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
何超军 邱杨玉 毛芝娟 陈吉刚 吴志新
采用已构建的原核重组质粒pET30a-OmpK为模板,通过PCR扩增OmpK成熟肽基因片段,引入酶切位点后克隆至分泌表达载体pPIC9K,经SalⅠ线性化后,氯化锂法转化至毕赤酵母GS115中,并经G418遗传霉素筛选高拷贝酵母转化子,最后进行甲醇诱导表达,表达上清经SDS-PAGE电泳检测及Western-blot鉴定,表明重组蛋白已经表达。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐荣 吴清莲 孟玉 陈疏影 王先宏 何丽莲 李富生
【目的】本研究旨在构建适合甘蔗遗传转化的双基因表达载体,用于提高甘蔗栽培品种的抗旱能力,并探讨基因表达规律及互作效应。【方法】本研究以前期课题组在割手密中克隆到的具有抗旱功能ScNAC1和ScDREB为目的基因,以对单子叶植物高效、专一的Ubiquitin为启动子,以适于单子叶植物遗传转化的表达载体pCAMBIA1300-nu为基础载体,利用改造后的FMDV2A多肽进行连接,采用重叠延伸PCR(简称SOE PCR)将ScNAC1和ScDREB基因相融合,利用同源重组的方法连接表达载体。【结果】经PCR验证获得约2000 bp的目的条带,利用BamH I与Sac I双酶切,切出了载体的1条大片段和连接目的基因的3条小片段,测序结果验证扩增产物的正确性,融合基因在扩增过程中无突变发生。【结论】本研究成功构建了符合需要的融合基因表达载体,为后期甘蔗的遗传转化研究奠定了基础。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
CAC3基因转运肽序列和accD基因融合植物表达载体的构建
鳗鲡病原菌外膜蛋白三联表达载体的构建、表达与表达产物的纯化
牛疱疹病毒I型gB基因原核表达载体的构建和高效表达
黑腹果蝇抗真菌肽Drs及其同系物基因的原核表达与蛋白纯化研究
重组大肠埃希菌外膜蛋白OmpT的载体构建和表达条件优化及多克隆抗体制备
草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白与大肠杆菌LTB亚基植物融合表达载体的构建
嗜水气单胞菌外膜蛋白AHA2991的原核表达、纯化与免疫原性研究
蝴蝶兰2种病毒的同步检测及其CP融合反义表达载体构建
PPRV Nigeria75/1 H蛋白原核表达及抗原表位预测
猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化
