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[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 张涛 侯俊利
为了解超低温冷冻对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)胚胎线粒体DNA影响,选取细胞分裂期胚胎为研究对象,研究了4种玻璃化液处理和超低温冷冻对胚胎线粒体DNA的影响。结果表明:经过玻璃化液处理和冷冻后,胚胎线粒体上的Cytb基因能被稳定扩增,PCR电泳产物大小约1 600 bp,产物经回收后进行双向测序、比对和校正,获得10条Cytb基因全序列,长度为1 135 bp,其中有5个核苷酸变异位点,1 135 bp的Cytb基因序列一共编码378个氨基酸残基,从ATG第一位起始密码子开始到1 140位终止。经过玻璃化液处理和冷冻后,胚胎线粒体上的COI基因也能被稳定扩增,PCR电泳产...
[期刊] 水产学报
[作者]
黄晓荣 庄平 章龙珍 冯广朋 刘鉴毅 张涛 赵峰 侯俊利
为了解超低温冷冻对胚胎形态结构的影响,以中华绒螯蟹为研究对象,运用石蜡切片、扫描电镜和透射电镜观察细胞分裂期、原肠期和原溞状幼体期胚胎,分别用玻璃化液处理和经超低温冷冻后外部形态和内部结构的变化。结果发现:(1)显微观察表明,细胞分裂期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后吸水膨胀明显,三步平衡后胚胎形态无明显变化,超低温冷冻后,卵黄物质从细胞中溢出,细胞破损严重;原肠期胚胎在玻璃化液中用二步平衡法处理后,外部形态与鲜胚无明显差异,经过冷冻后,所有胚胎内部变成粉红色,胚体由原来的透明变成不透明状,细胞膜边缘模糊似绒毛状;(2)扫描电镜观察,玻璃化液处理后的所有原肠期胚胎表面褶皱呈沟壑状,形成一层网...
关键词：
中华绒螯蟹 胚胎 形态结构 超低温冷冻
[期刊] 中国水产科学
[作者]
黄晓荣 庄平 章龙珍 冯广朋 刘鉴毅 张涛 赵峰
研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)4个不同发育时期胚胎对A号玻璃化液的耐受性和玻璃化冷冻保存。结果表明,不同时期的胚胎对玻璃化液的耐受能力不同,其中卵裂期胚胎对玻璃化液的耐受能力较差(20~30 min),前无节幼体期和原溞状幼体期胚胎在玻璃化液中的适应时间较长(40~60 min);随着平衡时间的延长,中华绒螯蟹各个时期的胚胎成活率逐渐下降。中华绒螯蟹前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,0.25mol/L的蔗糖分别洗脱5、10、15、20 min后,胚胎成活率无显著性差异(P>0.05)。前无节幼体期胚胎在A号玻璃化液中平衡40 min,在–196℃冷冻4...
关键词：
中华绒螯蟹 胚胎 玻璃化 冷冻保存
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取６ ｉｎｄ健康的雄性俄罗斯鲟（Ａｃｉｐｅｎｓｅｒ ｇｕｅｌｄｅｎｓｔＡｅｄｔｉ），经人工催产后获得成熟的精子，研究超低温冷冻（－１９６℃）对俄罗斯鲟精子顶体酶活性及ｄｎＡ损伤影响。结果显示：俄罗斯鲟鲜精中顶体酶的平均活性为（３６．１８±２．５４）μｉｕ·１０－６，经过超低温冷冻后，精子顶体酶活性显著降低，添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（２１．５５±０．７９）μｉｕ·１０－６，未添加抗冻保护液精子中顶体酶活性降至（９．５８±１．０８）μｉｕ·１０－６，且三者间有显著性差异（ｐ＜０．０５）。单细胞凝胶电泳结果表明，俄罗斯鲟鲜精彗星率为（３７．３３±７．７７）％，添加抗冻剂后冻精的彗星率为（．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
章龙珍 鲁大椿 柳凌 郭峰 张洁明
泥鳅胚胎 (胚孔封闭期 )用 10 #玻璃化液作为低温保护剂 ,经低温 (- 196℃ )冷冻保存 17h后 ,38℃水浴解冻 ,解冻后的胚胎获得了成活。在稀释液B1、B2、B3中分别有 2 6 .7% ,15 .0 % ,3.0 %成活的胚胎。解冻后的胚孔封闭期胚胎经过 5 0h的培养 ,胚胎从胚孔封闭期发育至尾鳍出现期。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
舒雪密 叶欢 仲嘉 张鸣 罗江 刘源 杜浩
中华鲟(Acipenser sinensis)是我国一级重点保护水生动物,其精原干细胞等种质资源冷冻保护技术尚不完善。本研究在前期建立的匙吻鲟(Polyodon spathula)精原干细胞冷冻保存液配方基础上,研究解冻温度、抗氧化剂和抗冻蛋白对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,以期建立高效的中华鲟精原干细胞超低温冷冻保存方法。研究结果表明,实验设置的解冻温度(20、25、30和40℃)中25℃组冷冻保存效果最佳:解冻后细胞数目为(3.86±0.51)×10～5,细胞存活率可达(96.36±0.53)%;比较不同浓度组(500、1000和1500 mg/L)的谷胱甘肽、抗坏血酸和α-生育酚等3种抗氧化剂对中华鲟精原干细胞冷冻保存效果的影响,结果显示,冷冻保存液中添加1000 mg/L α-生育酚的实验组,解冻后得到的细胞数目最多(7.64±0.34)×10～5,显著高于其他抗氧化剂添加组,细胞存活率可达(92.82±0.72)%;通过比较不同浓度(0.1、1.0和10μg/mL)的两种类型抗冻蛋白(AFPI和AFPIII)对中华鲟精原干细胞的冷冻保存效果,发现添加了1.0μg/m L AFPI的实验组解冻效果最好,解冻后得到的细胞数目为(6.85±0.19)×10～5,显著高于其他实验组,细胞存活率为(86.89±0.73)%。综上所述,中华鲟精原干细胞冷冻保存的最佳解冻温度为25℃,1000 mg/L α-生育酚作为抗氧化剂,和1.0μg/m L AFPI作为抗冻蛋白对其冷冻保存效果最佳。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 江琪 刘鉴毅 姚志峰 张涛 冯广朋 赵峰
研究超低温冷冻保存(-196℃)对日本鳗鲡精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后日本鳗鲡精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,日本鳗鲡精子的活力下降,精子内GR活性显著升高(P
关键词：
超低温冷冻 日本鳗鲡 精子 酶活性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 张涛 冯广朋 赵峰 刘鉴毅 王妤 章龙珍 庄平
选取6 ind健康的雄性俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti),经人工催产后获得成熟的精子,运用扫描电镜和透射电镜,观察了超低温冷冻前后精子的形态结构。结果显示,经过超低温冷冻后精子形态结构发生了较大变化,其中冻精顶体长度、头中部宽度及中段宽度与鲜精相比显著增加(P<0.05);中段长度及后外侧延伸物与鲜精相比显著减少(P<0.05)。冻后有38.6%的精子在形态结构上受到不同程度的损伤。精子的结构损伤主要表现在精子顶体不明显或与核发生糅合,后外侧延伸物消失,甚至顶体脱落;精子核膜皱
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 刘鉴毅 张涛 冯广朋 赵峰
研究超低温(-196℃)冷冻保存对大黄鱼(Pseudosiaena crocea)精子内总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)等酶活性的影响。运用试剂盒分别测定了冷冻前后大黄鱼精子内酶活性的变化。结果表明,经过超低温冷冻保存后,大黄鱼精子的活力下降,精子内GR活性从(4.42±0.29)U·L-1增加到(58.93±2.26)U·L-1(P<0.05);其它几种酶的活性均显著下降(P<0.05),总ATP酶、CK、SDH的活性分别从冻前的(60.16±5.88)U·mL-1、(11.91...
关键词：
超低温冷冻保存 大黄鱼 精子 酶活性
[期刊] 水产学报
[作者]
高天翔 张秀梅 渡边精一
参考果蝇和蚤状的线粒体DNA 12SrRNA序列进行了中华绒螯蟹与日本绒螯蟹的线粒体DNA12SrRNA基因片段的引物设计、PCR扩增及序列测定。两种的碱基序列长度相同 ,为 45 7bp ,其A、T、G、C含量相似 ,分别为 15 9bp (34.79% )、177bp (38.73 % )、5 1bp (11.16 % )、70bp (15 .32 % )和15 9bp(34.79% )、178bp(38.95 % )、5 0bp(10 .94% )、70bp(15 .32 % )。中华绒螯蟹与日本绒螯蟹间有 5处碱基序列差异 ,在 98bp、15 1bp、317bp和 417bp碱基处...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
高天翔 吉崎悟朗 渡边精一
首次进行了中华绒螯蟹（ Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒ ｓｉｎｅｎｓｉｓ）线粒体 ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ的序列分析。参考果蝇、蚤状溞序列对中华绒螯蟹线粒体ＤＮＡ １２ＳｒＲＮＡ基因片段做了引物设计、ＰＣＲ扩增及序列测定，结果得到 ４５７ ｂｐ的碱基序列，其Ａ、Ｔ、Ｇ、Ｃ含量分别为 １５９ｂｐ（３４．７９％）、１７７ｂｐ（３８．７３％）、５１ｂｐ（１１．１６％）、７０ｂｐ（ １５． ３２％），与果蝇、蚤状溞的相同基因片段的序列含量基本相似。
[期刊] 水产学报
[作者]
浦蕴惠 许星鸿 高焕 刘兆普 阎斌伦
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对脊尾白虾精子内琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、Na+/K+-ATP酶、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GR)与顶体酶活性的影响,以期为提高脊尾白虾精子超低温冷冻效果提供理论依据。设置对照组(未添加抗冻剂)、3个实验组[分别添加DMSO(V/V)10.0%、12.5%、15.0%],于冷冻0、1、3、5、7、15 d取样测定各酶活性。结果表明,经冷冻后,除GR外,其他所测酶活性均出现显著下降(P<0.05),在冷冻...
关键词：
脊尾白虾 精子 超低温冷冻 酶活性
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄晓荣 章龙珍 庄平 江琪 姚志峰 刘鉴毅
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对斑尾刺虾虎鱼成熟卵中总ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和丙二醛(MDA)等酶活性的影响。结果表明,经过冷冻保存后,总ATP酶、CK、SDH和LDH的活性显著下降(P<0.05),同时可见添加抗冻剂组比未添加抗冻剂组下降幅度更大(P<0.05);SOD、CAT和GSH-PX的活性也显著下降(P<0.05),未添加抗冻剂组比添加抗冻剂组下降更明显(P<0.05);MDA的活性显著升高,且未添加抗冻剂组显著高于添加抗冻剂组(P<0.05)。超...
关键词：
超低温冷冻 斑尾刺虾虎鱼 卵 酶活性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐滨 江琪 庄平 章龙珍 黄晓荣 王斌 张涛 闫文罡
研究了超低温冷冻保存(-196℃)对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)精浆和精子中总三磷酸腺苷酶(AT-Pase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)等酶活性的影响,并分别测定了冷冻前后俄罗斯鲟精浆和精子中酶的活性。结果显示,经过超低温冷冻保存后,俄罗斯鲟精子活力下降,精子内各酶活性均显著降低,添加冷冻保护液组精子中总ATPase、SDH、LDH和CK的活性分别从(198.47±14.43)U/mL、(30.00±2.65)U/mL、(6 982.29±24.32)U/L和(1.94±0.05)U/mL下降至(110.19±2.32)U/m...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
崔超越 耿智 冯广朋 张涛 赵峰 杨刚 庄平 黄晓荣
为探究温度对中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)雌蟹繁殖性能及所产胚胎质量的影响，开展了不同温度(6 ℃、9 ℃、12 ℃、15 ℃、18 ℃、21 ℃)下亲蟹的繁殖产卵实验，分析了各温度下雌蟹的交配率、产卵率、产卵量和生殖力等繁殖性能以及所产胚胎卵径、生化成分和脂肪酸组成等胚胎质量。结果显示，随温度的升高，亲蟹的交配率逐渐增加，产卵率、产卵量、生殖力和生殖指数均呈先上升后下降的趋势，其中温度15 ℃时，雌蟹的产卵率、产卵量、生殖力以及生殖指数均最高，且与其他各温度组都有显著差异(P<0.05)。温度18 ℃时，所产胚胎卵径最大，平均为(431.17±13.69) μm，15 ℃时，单个胚胎干重最重，平均为(31.28±4.61) μg，但与18 ℃组无显著差异(P>0.05)。随温度的升高，胚胎中灰分和磷脂呈逐渐增加的趋势，总脂肪则逐渐下降，甘油三酯和总胆固醇表现为先升高后降低，粗蛋白和水分的变化不明显。其中18 ℃时，胚胎中粗蛋白、甘油三酯和总胆固醇含量均最高。中华绒螯蟹胚胎中共检测出21种脂肪酸，其中饱和脂肪酸(SFA)和单不饱和脂肪酸(MUFA)在温度12 ℃下总量最高，但与其他各组无显著差异(P>0.05)。6 ℃下胚胎所含C20:5n3(EPA)、C22:6n3(DHA)、C20:4n6(ARA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)的总量均最高。研究表明，温度对中华绒螯蟹所产胚胎质量有一定影响，15 ℃时中华绒螯蟹繁殖性能最佳。结果为开展中华绒螯蟹繁育生物学研究提供了基础资料，同时也为长江口中华绒螯蟹渔业资源养护提供了科学支撑。
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