以叙利亚仓鼠肾细胞(BHKcell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量。结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用。染毒12h后,2.5、5、10、20和40μg·mL-1OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P<0.05),至染毒24h,40μg·mL-1OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%。OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂...

[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell, MDCK)为模型，研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene, LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L~(-1) OTA)、LYC组(55μmol·L~(-1) LYC)、O+L组(15μmol·L~(-1) OTA+55μmol·L~(-1) LYC),处理36 h,研究OTA对MDCK细胞结构、细胞凋亡、肾功能相关指标、氧化与抗氧化、炎性因子等指标的影响，并探讨LYC在OTA致MDCK损伤中的缓解作用。[结果]OTA作用导致细胞发生明显皱缩，细胞数量骤减；电镜结果显示OTA能够导致细胞膜破裂、细胞器出现不同程度损伤，MDCK中乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)水平与丙二醛(MDA)含量极显著增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);细胞中肾功能相关指标N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾损伤分子1(KIM-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)均极显著升高(P<0.01);同时极显著增加了MDCK的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素6(IL-6)、干扰素18(IL-18)及干扰素1β(IL-1β)的水平(P<0.01);OTA可诱导MDCK凋亡率极显著升高(P<0.01);而LYC能够有效减缓OTA造成的损伤，LYC组与OTA处理组相比形态较饱满，细胞间衔接紧密，细胞凋亡率显著下降；LDH、ROS、MDA水平(含量)降低，SOD、CAT、GSH-Px活性升高，并降低炎性细胞因子的表达。[结论]OTA能够抑制MDCK活性，改变细胞形态，导致肾功能指标、氧化与抗氧化功能与细胞炎性因子异常，加快细胞凋亡；LYC能够显著缓解OTA对MDCK的损伤。

[目的]本研究旨在探讨细胞培养基中添加不同浓度血清对赭曲霉毒素A (ochratoxin A， OTA)毒性的影响，以期更深入了解OTA的毒性，同时为其他OTA体外毒性研究提供重要参考价值。[方法]首先测定了OTA对人肾皮质近曲小管上皮细胞(human proximal tubule-derived epithelial cells， HK-2)细胞活力的影响，同时利用超高效液相色谱串联质谱技术检测了细胞上清液中OTA水平以间接反应细胞对OTA的摄入量，最终分析培养基中不同浓度血清对OTA毒性的影响。[结果]细胞培养基中添加5%浓度血清在48 h内不会影响细胞活力，可以作为细胞正常培养条件，添加2%浓度血清在36 h不会影响细胞活力，可以作为配制OTA工作液的细胞处理条件。基于优化的细胞培养及处理条件，OTA对HK-2细胞活力的影响结果表明，OTA抑制细胞活力呈现时间和剂量依赖性，OTA处理HK-2细胞12、24、36 h的IC_(50)分别为39.29、6.28和2.72 μmol·L~(-1)。同时OTA可以时间依赖性极显著提高细胞释放LDH，损伤细胞膜的完整性(P<0.01)。[结论]细胞培养基中添加不同浓度血清可影响OTA的毒性，且血清浓度越高，对OTA毒性影响越大。其中，当使用2%血清浓度的培养基配制OTA工作液时，可在不影响细胞活力的前提下最大限度降低血清浓度对OTA毒性的影响。

【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力进行分析,并对3种方法的鉴定结果进行比较。其中在紫外荧光法中,黑曲霉接种至可可浆培养基(CCA)培养,其他霉菌接种至察氏培养基(CA)培养,培养后能够产生荧光的菌株被认为是OTA产生菌。同时分别用高效液相色谱法(HPLC)和OTA胶体金试纸条对所有菌株培养物中的OTA进行检测。【结果】以HPLC检测结果为标准,用紫外荧光法对OTA产生菌初筛的假阳性率较高,假阴...

针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素Ａ单抗偶联物和赭曲霉毒素Ａ－ＢＳＡ偶联物（ＯＴＡ－ＢＳＡ），开发了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ的方法。研究结果表明：１当ＯＴＡ－ＢＳＡ配制终质量浓度为４．８ ｇ·Ｌ～（－１），质控线用羊抗鼠Ｉｇｇ配制终质量浓度为１．５ ｇ·Ｌ～（－１），硝酸纤维素（ＮＣ）膜的包被量为１．０μＬ·Ｃｍ～（－１）时呈现最清晰、最均匀的条带。２赭曲霉毒素Ａ胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到１．０μｇ·Ｌ～（－１），检测时间仅为５ ｍＩＮ，非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短，灵敏度高，与．．．

以雌性ICR小鼠为研究对象,尾静脉注射虾夷扇贝毒素24h后处死,通过脑组织切片,苏木精伊红染色、甲苯胺蓝染色以及钙结合蛋白S-100免疫染色,研究了虾夷扇贝毒素对小鼠浦肯野细胞的毒性作用。结果表明,尾静脉注射虾夷扇贝毒素的小鼠小脑浦肯野细胞细胞质有明显变化,同时在光学显微镜下观察到细胞核有收缩而用钙离子结合蛋白S-100的免疫荧光染色结果表明,虾夷扇贝毒素作用后,小鼠浦肯野细胞的S-100蛋白表达增多,而其他组织则没有明显变化。浦肯野细胞形态学以及细胞内钙离子结合蛋白的变化说明虾夷扇贝毒素可能对神经细胞有毒性作用。

小鼠神经母细胞瘤细胞经体外培养后,加入不同剂量的太平洋西加毒素(Pacific ciguatoxin-1,P-CTX-1)、箭毒苷和藜芦定,在不同时间点终止培养,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)标定活细胞量,分析西加毒素剂量与细胞活性之间的线性关系。结果发现,细胞与毒素作用不同时间,西加毒素剂量(x)与光密度值(y)之间的线性关系呈现差异。在10 h、15 h及20 h等不同时间,其线性方程分别为y=-0.082 6x+0.923 0(R2=0.978 9)、y=-0.044 3x+0.601 5(R2=0.962 1)、y=-0.020 4x+0.323 7(R2=0.928 1)。以10 h的检...

通过实验建立了一种饲料中棕曲霉毒素A的薄层层析测定方法。该法用氯仿:甲醇(2:1,V/V)提取样品中的毒素,提取液经分液法净化,在硅胶薄层板上用二次展开系统展开分离后,在紫外光灯(254nm和365nm)下检测定量。该法的方法灵敏度为1Oppb,回收率为70％～100％。

【目的】(1)研究黄曲霉毒素B1(AFB1)不同染毒水平(3,30,300μg·kg-1BW)染毒后,在不同时间点导致雏鸭肝细胞DNA损伤情况;(2)探明AFB1染毒剂量及染毒时间与雏鸭肝细胞DNA损伤之间的关系,为AFB1遗传毒性提供研究模型。【方法】96只雄性北京鸭雏鸭,随机分为16组,每组6只。第1组为对照组,第2至6组为低剂量(染毒)组、第7至11组为中剂量(染毒)组、第12至16组为高剂量(染毒)组。对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组雏鸭分别灌胃25%DMSO水溶液,0.25,2.5,25μg·mL-1溶液各1mL,对照组于灌胃1h后,各剂量染毒组分别于灌胃染毒1、2、8、24、4...

用透射电镜观察了镍化合物对蚕豆和冬小麦根端细胞超微结构的影响，结果表明，硫酸镍不同程度地引起蚕豆和冬小麦细胞的损伤。在１５μｇ／ｍｌ浓度下，镍化合物可诱导蚕豆根端细胞核变形，液泡内有凝聚物断续性附着于液泡膜内侧。在相同浓度下，硫酸镍对冬小麦根端细胞内部结构影响较小。在８０μｇ／ｍｌ浓度下，冬小麦细胞液泡有凝聚性变化，质壁有轻度分离。而蚕豆在此浓度处理下，核固缩，核膜崩解，细胞内部电子密度明显升高，结构呈凝聚状，欠清晰，液泡出现凝聚性变化，质壁出现重度分离。以上结果意味着镍化合物对蚕豆的损伤程度要高于对冬小麦的损伤程度。

以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。

以茶树籽为原料,真空冷冻干燥后粉碎并喷无菌水,使含水量分别为10%、15%、20%,人工接种产毒黄曲霉(Aspergillus flavus)ACCC30899,置于生化培养箱,观察产毒黄曲霉的生长状况;采用液相色谱串联质谱法分别于黄曲霉侵染7、14、21d、含水量大于15%的茶树籽所产黄曲霉毒素组分进行测定。结果表明:茶树籽粉末含水量高于10%时黄曲霉可生长;茶树籽粉末含水量大于15%时黄曲霉生长状态良好,黄曲霉毒素组分测定值均低于检测下限(0.03μg/kg),提示在产毒黄曲霉侵染含水量大于15%的茶树籽,产黄曲霉毒素的风险较小。

采用细胞体外培养的方法,在卵巢颗粒细胞对数生长期,对F-2毒素的繁殖遗传毒性和V-E对其的解毒作用进行了研究.结果表明,各毒素组细胞活性显著低于正常对照组,而丙二醛(MDA)含量显著低于正常对照组;各解毒组细胞活性均显著高于各毒素组,但明显低于正常对照组,而MDA含量显著低于各毒素组,但明显高于正常对照组.这表明,F-2毒素可能是通过脂质过氧化作用,对颗粒细胞致毒,V-E对F-2毒素具有较好的解毒作用,能提高中毒卵巢颗粒细胞的抗过氧化能力.

为补充三聚氰胺的毒理学资料,以易于生长的传代细胞为研究对象,采用形态学观察、MTT法、中性红法等,检测三聚氰胺及其与三聚氰酸混合物对体外培养的Vero细胞的影响。结果表明:不同浓度三聚氰胺及其与三聚氰胺混合物对Vero细胞均会产生一定影响:圆缩细胞增多,贴壁细胞数量减少,且呈现出一定的浓度依赖性。混合组还表现出不规则细胞形态增多。三聚氰胺浓度超过0.75mg·mL-1时会极显著抑制细胞的增殖(p<0.01),细胞毒性级为1级;而二者混合攻毒时毒性明显增强,浓度超过0.094mg·mL-1时会显著或极显著抑制细胞的增殖(p<0.05或p<0.01),细胞毒性级为2级。同时,该类化合物对蛋白质的合...