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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
蒋春美 师俊玲 刘延琳
【目的】探求一种能够快速、准确地筛选出赭曲霉毒素产生菌的分析方法,为赭曲霉毒素的检测与防治奠定基础。【方法】分别采用紫外荧光法、胶体金免疫试纸条法和高效液相色谱(HPLC)法,对分离自葡萄表面的189株霉菌产生赭曲霉毒素A(OTA)的能力进行分析,并对3种方法的鉴定结果进行比较。其中在紫外荧光法中,黑曲霉接种至可可浆培养基(CCA)培养,其他霉菌接种至察氏培养基(CA)培养,培养后能够产生荧光的菌株被认为是OTA产生菌。同时分别用高效液相色谱法(HPLC)和OTA胶体金试纸条对所有菌株培养物中的OTA进行检测。【结果】以HPLC检测结果为标准,用紫外荧光法对OTA产生菌初筛的假阳性率较高,假阴...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
韩薇 缪德年 张部昌 顾赛红 赵志辉
以叙利亚仓鼠肾细胞(BHKcell)为模型,用噻唑兰(MTT)法检测赭曲霉毒素(ochratoxin A,OTA)对细胞活力的影响,用单细胞凝胶电泳法和DNA梯形条带法检测OTA对细胞DNA的损伤,用黄嘌呤氧化酶法检测细胞中SOD活力的变化,用硫代巴比妥酸(TBA)法测定细胞培养液中MDA的含量。结果显示:OTA对BHK细胞活力的影响呈现时间和剂量依赖性的抑制作用。染毒12h后,2.5、5、10、20和40μg·mL-1OTA剂量组BHK细胞的活力均显著降低(P<0.05),至染毒24h,40μg·mL-1OTA染毒剂量组细胞活力下降达90%。OTA对BHK细胞DNA的损伤作用同样存在明显的剂...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李俊霞 梁志宏 关舒 汪晓 王宁 计成 牛天贵
【目的】筛选能降解黄曲霉毒素B1(AFB1)的细菌,以期在该毒素的生物脱毒中得到应用。【方法】以香豆素为惟一碳源和能源进行AFB1降解菌株的初筛,之后将初筛的10株菌分别降解浓度为100μg·kg-1的AFB1。【结果】筛选出的NMO-3菌株降解AFB1能力达85.7%,显著高于其它菌株(P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙长坡 常晓娇 伍松陵 沈晗
【目的】开发一种精准度高、灵敏性好、简便快捷的鉴别黄曲霉毒素产毒菌株的方法,为粮食储藏中黄曲霉毒素污染提供早期预警,为食品工业的质量安全控制提供技术保障,为黄曲霉毒素污染的生物防治提供无毒微生物来源。【方法】利用生物信息学方法分别以黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(Aspergillus parasitieus)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、酱油曲霉(Aspergillus sojae)的黄曲霉毒素合成基因簇中的关键调控基因aflR及其启动子序列为研究对象,采用PCR-RFLP方法对黄曲霉毒素可能产生菌株进行鉴别分析研究;为进一步验证PCR-RFLP...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
畅晓渊 刘国荣 李平兰 Magdy M.Osman 吴寒宇
通过抑菌活性试验、蛋白酶敏感性试验、菌株的动力学生长曲线测定、菌株的生理生化试验以及16S rRNA序列鉴定试验,对埃及传统Domiati奶酪中的产抗黄曲霉毒素的活性物质的菌株进行分离与鉴定。结果显示:分离得到的菌株的发酵上清液对多株受试真菌均有明显抑制作用,尤其对产生黄曲霉毒素的黄曲霉(Asper-gillus flavus)有很强的抑制效果;该菌株产生的抑菌活性物质不是蛋白类物质,也不同于一般细菌素;该菌鉴定为扩展短杆菌(Brevibacteriumlinens),命名为lpl-8菌。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
关心 何剑斌 董双 臧健 龙淼
以香豆素为唯一碳源，利用微生物去毒法，初步筛选出３２株生长良好的活性菌株，再添加ＡＦＢ１标准品（菌液毒素终质量浓度２．５μｇ／ｍ Ｌ），通过高效液相色谱（ＨＰＬＣ）检测ＡＦＢ１降解率，结果显示，从鸡粪中分离并命名为Ｆ６的菌株高效降解黄曲霉毒素Ｂ１，降解率达８３％。对菌株Ｆ６进行细胞形态及生理生化特性鉴定，初步判断为芽胞杆菌属，１６Ｓ ｒｒＮＡ序列同源性比对分析，与蔬菜芽胞杆菌国际标准株ＡＴＣＣ７００００５（登录号Ｎｒ０４３３２５．１）核苷酸同源性为９９．３％，由此可确定，Ｆ６菌株为蔬菜芽胞杆菌，命名为ＢＡＣｉＬＬｕＳ ｏＬｅｒｏＮｉｕＳ ｇＸ０１（登录号ＫＰ２９７８９６）。分离菌株Ｆ６发酵液各．．．
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
黄巧莲 金庆日 章先 周一媚 陈彦永 徐露凝 杨永春 程昌勇 田广燕 桂海娈 方维焕 宋厚辉
针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素Ａ单抗偶联物和赭曲霉毒素Ａ－ＢＳＡ偶联物（ＯＴＡ－ＢＳＡ），开发了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ的方法。研究结果表明：１当ＯＴＡ－ＢＳＡ配制终质量浓度为４．８ ｇ·Ｌ～（－１），质控线用羊抗鼠Ｉｇｇ配制终质量浓度为１．５ ｇ·Ｌ～（－１），硝酸纤维素（ＮＣ）膜的包被量为１．０μＬ·Ｃｍ～（－１）时呈现最清晰、最均匀的条带。２赭曲霉毒素Ａ胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到１．０μｇ·Ｌ～（－１），检测时间仅为５ ｍＩＮ，非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短，灵敏度高，与．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴坤
通过实验建立了一种饲料中棕曲霉毒素A的薄层层析测定方法。该法用氯仿:甲醇(2:1,V/V)提取样品中的毒素,提取液经分液法净化,在硅胶薄层板上用二次展开系统展开分离后,在紫外光灯(254nm和365nm)下检测定量。该法的方法灵敏度为1Oppb,回收率为70％～100％。
关键词：
饲料 薄层层析 真菌毒素 棕曲霉毒素A
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王宁 马秋刚 计成 关舒 牛天贵
本研究对一株具有降解黄曲霉毒素B1活性的黏细菌的产酶条件进行了优化。通过单因素实验和正交实验得到最优化的培养基以及培养条件。优化后的培养基为:酵母粉7 g/L、CaCl2.2H2O为1 g/L、MgSO4.7H2O为0.5 g/L、VB12为750μg/L;并确定其最佳培养条件为:初始pH 7.5、接种量20%、发酵时间50 h、发酵温度30℃。在上述最佳培养基和最佳发酵条件下,该菌株降解黄曲霉毒素B1的能力为78.2%。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵杰 周天红 刘选辉 冯士彬 辜丽川 李玉 吴金节 王希春
[目的]本试验以犬肾小管上皮细胞(Madin-Daby canine kidney cell, MDCK)为模型，研究赭曲霉毒素A(OTA)对MDCK的毒性作用以及番茄红素(lycopene, LYC)对细胞损伤的缓解效应。[方法]将对数生长期MDCK,随机分为对照组(无添加)、OTA组(15μmol·L~(-1) OTA)、LYC组(55μmol·L~(-1) LYC)、O+L组(15μmol·L~(-1) OTA+55μmol·L~(-1) LYC),处理36 h,研究OTA对MDCK细胞结构、细胞凋亡、肾功能相关指标、氧化与抗氧化、炎性因子等指标的影响，并探讨LYC在OTA致MDCK损伤中的缓解作用。[结果]OTA作用导致细胞发生明显皱缩，细胞数量骤减；电镜结果显示OTA能够导致细胞膜破裂、细胞器出现不同程度损伤，MDCK中乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)水平与丙二醛(MDA)含量极显著增加(P<0.01),超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性极显著降低(P<0.01);细胞中肾功能相关指标N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β2-微球蛋白(β2-MG)、肝脏型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)、肾损伤分子1(KIM-1)、视黄醇结合蛋白(RBP)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)均极显著升高(P<0.01);同时极显著增加了MDCK的肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素6(IL-6)、干扰素18(IL-18)及干扰素1β(IL-1β)的水平(P<0.01);OTA可诱导MDCK凋亡率极显著升高(P<0.01);而LYC能够有效减缓OTA造成的损伤，LYC组与OTA处理组相比形态较饱满，细胞间衔接紧密，细胞凋亡率显著下降；LDH、ROS、MDA水平(含量)降低，SOD、CAT、GSH-Px活性升高，并降低炎性细胞因子的表达。[结论]OTA能够抑制MDCK活性，改变细胞形态，导致肾功能指标、氧化与抗氧化功能与细胞炎性因子异常，加快细胞凋亡；LYC能够显著缓解OTA对MDCK的损伤。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董芳 张志岐 聂冬霞 范楷 娄秀萍 朱雪婷 韩铮 赵志辉
[目的]本研究旨在探讨细胞培养基中添加不同浓度血清对赭曲霉毒素A (ochratoxin A， OTA)毒性的影响，以期更深入了解OTA的毒性，同时为其他OTA体外毒性研究提供重要参考价值。[方法]首先测定了OTA对人肾皮质近曲小管上皮细胞(human proximal tubule-derived epithelial cells， HK-2)细胞活力的影响，同时利用超高效液相色谱串联质谱技术检测了细胞上清液中OTA水平以间接反应细胞对OTA的摄入量，最终分析培养基中不同浓度血清对OTA毒性的影响。[结果]细胞培养基中添加5%浓度血清在48 h内不会影响细胞活力，可以作为细胞正常培养条件，添加2%浓度血清在36 h不会影响细胞活力，可以作为配制OTA工作液的细胞处理条件。基于优化的细胞培养及处理条件，OTA对HK-2细胞活力的影响结果表明，OTA抑制细胞活力呈现时间和剂量依赖性，OTA处理HK-2细胞12、24、36 h的IC_(50)分别为39.29、6.28和2.72 μmol·L~(-1)。同时OTA可以时间依赖性极显著提高细胞释放LDH，损伤细胞膜的完整性(P<0.01)。[结论]细胞培养基中添加不同浓度血清可影响OTA的毒性，且血清浓度越高，对OTA毒性影响越大。其中，当使用2%血清浓度的培养基配制OTA工作液时，可在不影响细胞活力的前提下最大限度降低血清浓度对OTA毒性的影响。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈兰明 陈永萱
采用辣根过氧化物酶标记高亲和力的黄曲霉毒素Ｂ１抗体，建立了标记抗体型直接竞争抑制ＥＬＩＳＡ快速筛选法。该法检测ＡＦＢ１的线性范围为０．２５～５．０ｎｇ／ｍＬ，灵敏度为１２．５ｐｇ。
关键词：
黄曲霉毒素B_1 ELISA 筛选
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
史莹华 方丽云 孙宇 许梓荣 王成章
选用60头质量28 kg左右的“杜长大”三元杂交猪,随机分为2组,每组3个重复,每重复10头猪(公母各半),分别饲喂基础日粮(C组)和基础日粮+0.1 mg/kg黄曲霉毒素(AF组),预试期7 d,正试期90 d,研究黄曲霉毒素对猪生长性能、内脏器官相对质量、血清和肝脏酶活性指标的影响。结果表明,黄曲霉毒素(AF)显著降低了试验猪的生长性能,AF组猪日增重降低了12.90%(P<0.01),料重比提高了7.54%(P<0.01);AF显著影响试验猪内脏器官的相对质量,AF组猪肝脏、肾脏、脾脏、胰脏的相对质量分别较C组提高了8.24%(P<0.05)、27.27%(P<0.01)、41.18%(...
关键词：
黄曲霉毒素 猪 生长性能 肝功能
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王妍入 李培武 张奇 丁小霞 张文
【目的】笔者实验室前期免疫并构建噬菌体展示纳米抗体库,应用此抗体库筛选、制备可以用作黄曲霉毒素无毒替代抗原的纳米抗体。本研究旨在探明已筛选出的噬菌体展示纳米抗体Phage 2-5用作黄曲霉毒素替代抗原的活性,为后续纳米抗体的合成以及黄曲霉毒素绿色免疫分析方法的建立奠定基础。【方法】前期,笔者实验室对羊驼免疫黄曲霉毒素抗原(AFB1-BSA),经过5次免疫后,取血,提取RNA,反转录为cDNA,并采用PCR技术对抗体可变区VHH区域进行扩增,与载体pComb3X偶联,构建噬菌体展示纳米抗体库;经过吸附-洗脱的淘选过程筛选出能够与黄曲霉毒素竞争结合抗黄曲霉毒素单克隆抗体1C11的噬菌体展示纳米抗体...
关键词：
黄曲霉毒素 模拟抗原 噬菌体展示纳米抗体
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