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[期刊] 实验技术与管理
[作者]
赵玉红 李欣 崔建林 赵立青 李登文 张金红 周浩
为进一步增强学科间的交叉与渗透,提高学生灵活运用多学科知识与方法的能力,对质粒DNA提取及电泳检测实验进行改革。在改进经典碱裂解法提取质粒DNA、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA的基础上,新增试剂盒方法提取质粒DNA、超微量分光光度计检测质粒DNA以及快速单酶切鉴定质粒DNA等实验内容。改革后的实验不仅促进经典与现代技术、方法的有机结合,而且增强学科间的相互融合,取得了良好的教学效果。
关键词：
质粒DNA提取 质粒DNA检测 电泳检测
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郝豆豆 张勇群 高玉花 雷鸣 武俊喜 拉多
【目的】从青稞种子中提取高质量的基因组DNA。【方法】以半粒无胚青稞种子和整粒青稞种子为材料,用6种不同的方法提取基因组DNA,用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整性,紫外分光光度计法检测DNA的浓度和纯度,并对提取的DNA进行了RAPD-PCR扩增检测,同时将剩下的半粒有胚青稞种子进行萌发实验。【结果】从半粒和整粒青稞种子中都可以提取到高质量的DNA,用提取的DNA作为RAPD-PCR扩增检测模板,得到的扩增产物条带清晰,多态性条带丰富,其质量满足RAPD分子标记的要求。【结论】高盐低p H法提取的DNA质
[期刊] 中国农业科学
[作者]
姚喜梅 石波 刘程程 梁平 李静梅
【目的】探索荧光辅助糖电泳(FACE)检测葡甘露寡糖组分的条件。【方法】以魔芋葡甘露寡糖为原料,对比3种荧光衍生剂的电泳分离效果,在此基础上研究分离胶浓度、衍生化反应条件及样品杂质对FACE分离效果的影响,确定FACE分析葡甘露寡糖的最佳条件。【结果】FACE分析葡甘露寡糖最佳条件是:荧光衍生剂为ANTS,分离胶浓度25%,ANTS用量2μL,衍生化反应温度37℃,衍生化反应时间16 h。【结论】FACE对葡甘露寡糖组分有很好的分离效果,使用本方法可以确定葡甘露寡糖中至少含有14种组分,为葡甘露寡糖的定性定量分析提供一种有效的检测手段。
[期刊] 华北农学报
[作者]
易红梅 王凤格 赵久然 王璐 郭景伦 原亚萍
以192份玉米品种为材料,用7对SSR引物对毛细管电泳荧光检测和常规的变性PAGE银染检测两种SSR标记检测方法进行比较分析。结果表明,两种方法检测的SSR标记片段大小一致。毛细管电泳荧光检测法检测的结果更为精确、灵敏、高效,更适用于高通量材料的检测分析。对少量材料进行检测分析以及SSR标记的筛选时,使用常规的变性PAGE银染检测法更经济适用。
关键词：
玉米 SSR 毛细管电泳 银染
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李战军 孔杰 孟宪红 张庆文 罗坤 栾生 肖广侠
比较了酚-氯仿法、煮沸法、试剂盒法3种基因组DNA提取方法对WSSV DNA提取效率、纯度及病毒检测结果的影响。结果表明,3种方法的DNA提取效率平均值分别为101.5、372.6、21.5 ng/μl;OD260/OD280范围分别是1.979~2.175(平均值为2.070)、1.699~1.932(平均值为1.796)、1.784~2.075(平均值为1.951);OIE巢式PCR阳性率分别为60%、50%、70%;TaqMan定量PCR检测的病毒阳性率均为100%,病毒拷贝含量分别为916.0~2.23×106、63.3~1.78×106、479.7~2.70×106Copies/μl...
关键词：
DNA提取方法 PCR WSSV
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢文洁 李文凤 黄应昆 罗志明 王明强 王晓燕
本研究利用尿素混合液直接从甘蔗黑穗病菌孢子提取基因组DNA进行PCR检测鉴定,经过反复试验,建立了一种简便、快速的检测鉴定方法。利用建立的方法对12个甘蔗黑穗病样品进行病菌基因组DNA提取,将甘蔗黑穗病菌特异性引物进行PCR检测,均扩增出大小为420 bp的预期DNA片段条带。PCR扩增产物经克隆测序,与GenBank数据库中的甘蔗黑穗病病原菌序列比对,同源性达99%。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
岳磊 蒋红霞 刘健华 廖晓萍 李树娟 陈雪影 吴彩霞 张小云 刘雅红
【目的】对广东地区分离得到的鸡源肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因检测。【方法】采用纸片扩散法对84株鸡源肠杆菌临床分离株进行27种抗菌药物的敏感性测定。通过PCR检测质PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr。研究PMQR基因阳性菌株染色体gyrA、gyrB、parC、parE基因喹诺酮耐药决定突变区(QRDRs)的变异情况。【结果】84株鸡源肠杆菌对兽医临床常用的恩诺沙星、氟罗沙星、氨苄西林、复方新诺明、强力霉素以及利福平、链霉素、罗红霉素的耐药率很高,且为多重耐药;对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、多粘菌素E和头孢氨苄的敏感性高。在84株鸡源肠杆菌中检测到1株同时携...
关键词：
鸡 肠杆菌 质粒 喹诺酮 耐药
[期刊] 华北农学报
[作者]
葛荣朝 赵宝存 李薇 王莎莎 沈银柱 黄占景
应用玉米盐溶蛋白PAGE电泳方法检测了10个玉米品种的纯度及其杂交种的真实性。通过品种间的盐溶蛋白谱带的对比,发现其中有2条蛋白带是各品种所共有的,而除这些共有的蛋白带以外,各品种还具有一些特异条带。根据每个品种特有的蛋白条带,建立其特征条带图谱,可应用于该品种的相关鉴定工作。
关键词：
玉米 盐溶蛋白 聚丙烯酰胺凝胶电泳
[期刊] 中国农业科学
[作者]
余明芬 曾洪梅 钟润涛 赵小明 邱德文
【目的】探索微流控芯片电泳方法在PCR产物检测方面的效果,并建立针对番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)的微流控芯片电泳检测方法,弥补琼脂糖凝胶电泳方法在试剂消耗、所用时间、安全性方面的缺陷。【方法】通过对TYLCV的基因组进行分析后,在该基因组中相对稳定的位置设计引物,同时兼顾引用已被研究者研究过的引物,对这些选择的引物进行特异性、稳定性、灵敏度等方面的验证,筛选出用于后续试验的引物。选择DNA标准物φX174/BsuR I(HaeⅢ)marker,分别进行琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳,对二者在耗材、耗时和灵敏度方面进行比较,确定微流控...
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄为平 郑晓鹰 邢宝田
利用等电聚焦聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，分析了大白菜、甘兰、绿菜花、甜椒中８个常用杂交种及其亲本（共２４份材料）的种子水溶蛋白电泳图谱。结果表明，等电聚焦电泳技术分辨率高，电泳条带多而且细，各材料蛋白谱带都在２０条左右，信息量大，利于进行深入细致的分析。８个杂交品种（Ｆ１）与其亲本间蛋白电泳图谱都有明显区别，并以此做为检验纯度的依据，进一步建立了这８个杂交种的纯度检验技术，同时在田间进行了验证性测定，二者鉴定结果相符，证明了本方法的可靠性。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王玉娟 王保根 汪诗珊 余金保 沈玉英 房经贵
为更好地将RAPD技术应用于梅花品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,以16个梅花品种为实验材料,对琼脂糖凝胶电泳以及聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测RAPD的PCR扩增产物的效果进行了比较,结果表明PAGE检测出谱带的总数量以及多态性谱带的数量均高于前者。根据2种电泳系统获得的标记信息构建的树状聚类图表明,PAGE检测的结果与传统梅花的分类情况完全一致。通过对随机挑选的25个片段进行克隆与测序的结果发现,25个片段都是对应引物的RAPD扩增产物。其中有4条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,而且可以扩增编码蛋白的基因片段。
关键词：
梅花 RAPD 多态性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
童敬 饶钦雄 郭平 李海燕 丁双阳
建立了猪饲料中螺旋霉素、替米考星和泰乐菌素3种大环内酯类药物的HPCE检测方法。确定了该过程中缓冲溶液的pH、缓冲溶液类型及离子强度等电泳条件,同时对毛细管长度、内径及分离电压等仪器参数进行优化,得到分离的最优条件:在毛细管有效长度50 cm、内径75μm,分离电压25 kV,40 mmol/L磷酸氢二钠-20mmol/L柠檬酸(pH2.5)缓冲液条件下,3种药物在15 min内得到完全分离。3种药物在10~100μg/g范围内线性良好,R>0.9993;饲料中螺旋霉素检测限为3.0μg/g,替米考星检测限为5.0μg/g,泰乐菌素检测限为8.0μg/g,添加回收率在74.5%~87.4%,方...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王午豪 齐芪 李赟 盖颖
杜仲作为一种传统的中药材,其药用成分主要为次级代谢产物绿原酸,是很多种中草药的重要活性成分,广泛存在于杜仲叶片和忍冬科植物的干燥花蕾或初开的花朵中。本研究提供了一种高效准确的从植物样本中检测绿原酸的方法。该方法使用萘乙酸作为内标物提高定量的精确性,减少系统误差,并通过毛细管电泳联用质谱定性提高检测的灵敏度。毛细管电泳联用质谱仪建立萘乙酸标准品与绿原酸标准品的标准曲线,其中萘乙酸与绿原酸的标准曲线相关性系数分别为0.999 4和0.999 1,均大于0.999 0,说明仪器方法及毛细管电泳参数与质谱参数可靠
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱恒乾 廖晓萍 陈朝喜 王秀梅 孙坚 孙迎 李亮 张美君 刘雅红
【目的】对广州分离得到的宠物源(主要是宠物猫、狗)大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药PMQR基因qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因的流行性检测。【方法】采用琼脂平板稀释法对164株临床分离的宠物源大肠杆菌进行15种抗菌药物的最小抑菌浓度测定。通过PCR检测qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因。建立大肠杆菌基因指纹图谱并对指纹图谱进行分析。【结果】164株宠物源大肠杆菌对12种兽医临床常用抗生素耐药率较高,且表现为多重耐药(5-14耐)。在164株宠物源大肠杆菌中检测到3个菌株同时携带qnrA、qnrB和qnrS基因,其中2株也携带aac(6′)-Ib-cr基因。阳性菌株...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾红梅 常维山 宋文刚 柴家前 孙英峰
为了研究胸腺五肽基因的免疫增强作用,根据GenBank收录的新城疫病毒(NDV) F基因序列,设计1对特异性引物,其中上游引物含有胸腺五肽(Thymopentin,TP-5)的基因序列。以NDV Z株F基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO重组,构建了真核共表达质粒pcDNATP-5NDVZF。将重组质粒pcDNATP-5NDVZF、pcDNANDVZF分别以100μg/只的剂量免疫小鼠,用间接ELISA法和MTT法检测其免疫原性。结果表明,重组质粒均能在小鼠体内诱导相应的体液免疫和细胞免疫,其中pcDNATP-5NDVZF的作用较p...
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