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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱静 岳思宁 陈琛 宋书琪 连玲丹 赵明文
[目的]通过对谷氨酸合酶(glutamate synthase,GOGAT)的基因序列进行预测和分析,构建谷氨酸合酶基因的沉默转化子,验证谷氨酸合酶在灵芝吸收、利用氮源、生长及次级代谢中的作用。[方法]利用真菌中已报道的谷氨酸合酶基因,在灵芝基因组库中分析比对得到灵芝中可能的谷氨酸合酶基因。通过构建进化树和结构域分析及酶活性测定,确定灵芝谷氨酸合酶序列。随后利用RNA干扰技术,将灵芝的GOGAT基因进行沉默,研究GOGAT对灵芝生长及次级代谢的影响。[结果]获得灵芝谷氨酸合酶序列,该酶具有保守的谷氨酸合酶结构域,并且在进化上高度保守。在4种氮源(谷氨酰胺、铵盐、脯氨酸和硝酸盐)条件下检测谷氨酸合酶活性和基因转录水平,野生菌株中的GOGAT比酶活和转录水平在不同氮源条件下没有显著变化。通过RNA干扰方法,获得沉默效率分别为(77.0±1.9)%和(77.5±2.0)%的GOGAT沉默菌株2株。平板试验表明,将GOGAT沉默后,灵芝菌丝的生长受到一定程度的抑制。在硝酸盐培养条件下,相比于野生菌株,GOGAT沉默菌株基本停止生长;而在脯氨酸存在条件下,2株沉默菌株的生长直径分别降低(16.0±1.9)%和(21.0±1.3)%。进一步检测灵芝三萜含量发现,当使用铵盐或脯氨酸作为唯一氮源培养时,相比于对照菌株,GOGAT沉默菌株中的灵芝三萜含量分别降低(32.1±4.5)%和(11.0±1.1)%;而以谷氨酰胺和硝酸盐培养时,各菌株中的灵芝三萜含量没有显著变化。[结论]本研究获得了灵芝中合成谷氨酸的重要酶基因GOGAT,发现其对灵芝的生长及次级代谢十分重要。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨志方 肖潇 司美茹 成娟丽 沈锡辉 王瑶
【目的】鉴定谷氨酸棒状杆菌中ncgl2588基因编码的苯酚羟化酶，并验证其在苯酚降解中的作用。【方法】构建谷氨酸棒状杆菌ncgl2588基因缺失突变株，比较突变株和野生型菌株利用苯酚能力的差异；同时将ncgl2588基因克隆到表达质粒pET28a中并转化入大肠杆菌BL21(DE3)，利用IPTG诱导重组菌株原核表达，纯化并测定重组蛋白对苯酚的羟化作用。【结果】成功构建了谷氨酸棒状杆菌ncgl2588基因缺失突变株，其在以苯酚为惟一碳源和能源的培养基中不能生长，而野生型谷氨酸棒状杆菌能正常生长；pET28ancgl2588重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达分子质量为73 ku的目的蛋...
关键词：
谷氨酸棒状杆菌 基因敲除 苯酚羟化酶
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吕莹果 张晖 马晓博 姚惠源
【目的】分离纯化米胚芽谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD),并对其酶学性质进行研究。【方法】通过(NH4)2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱、Superdex 200凝胶过滤色谱和Glu SephroseCL 4B亲和色谱等分离纯化技术,对米胚芽GAD进行分离纯化。用体积排阻高效液相色谱测定米胚GAD的相对分子质量,SDS-PAGE测定其亚基的相对分子质量。测定米胚GAD的最适温度和pH,通过酶动力学试验测定其动力学常数(Km)和最大反应速度(Vmax),并测定KCl和MgSO4等化学物质对酶活性的影响。【结果】分离纯化得到了米胚G...
关键词：
米胚芽 谷氨酸脱羧酶 酶学性质分析
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曹志华 高贵琴 张巧玲
采用垂直板聚丙稀胺凝胶电泳方法 ,对鲤鱼 (LyprinusCarpio)的肠道组织、肠内微生物谷氨酸脱氢酶 (GDH)同工酶进行分析 ,并对GDH活性进行测定 ,结果显示 ,摄食添加尿素饲料的鲤鱼肠组织及肠道微生物GDH同工酶谱与对照组有明显不同。试验组多一条酶谱且酶带染色深 ,表明鲤鱼在一定程度上能利用尿素合成 -谷氨酸 ,其合成可以通过肠组织和肠内微生物两条途径进行。而对GDH酶活性测定表明 ,试验组和对照组的肠组织和肠内微生物之间的酶活性均无显著性差异
关键词：
鲤鱼 肠道 肠内微生物 GDH同工酶
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨胜远 陆兆新 孙力军 吕凤霞 别小妹 刘战民
从爬山虎茎中分离到5株内生菌,其中菌株EJC-1具有谷氨酸脱羧酶(GAD)活性。当湿菌体与10 g.L-1谷氨酸钠溶液比例为1∶10(W∶V)时,在30℃和120 r.min-1下振荡反应24 h,细胞转化液中γ-氨基丁酸浓度为(3.07±0.23)mmol.L-1。通过形态特征、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定EJC-1为巨大芽孢杆菌(Bacillus megateri-um)。同时基于16S rDNA构建了系统进化树,并对EJC-1进行了系统发育分析。B.megateriumEJC-1 GAD的最适反应温度和pH分别为50℃和5.6。低于40℃,GAD在pH5-6范围内较稳定。2...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈旭 曾茜 朱森林 杜慕云 刘璞玉 杨仁德 魏善元
为了解灵芝南ＧＬ１１菌丝的生物学特性，以菌落直径和菌丝体干重作为主要考察指标，结合菌落长势、菌丝球大小和均匀性等因素，采用固体和液体培养方法对菌丝生长曲线以及不同碳氮营养、ｐ Ｈ和温度等条件下研究灵芝南ＧＬ１１菌丝（体）的生长情况。结果表明：培养７２～９６ Ｈ为对数生长期，可溶性淀粉、蛋白胨可为母种培养基的优质碳氮源，初始ｐ Ｈ ６．０和３０℃为最佳条件；而在液体培养基中菌丝对于麦芽糖和蛋白胨的利用效果最好，并且当接种量为４％（ｖ／ｖ），在初始ｐ Ｈ ８．０和２６℃条件下有利于液体种的制备。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
穆小民 杨晓贺 吴显荣 沈黎明
林生山黧豆谷氨酸脱羧酶的亚基分子为量70kD，天然分子量为140kD，是2个相同亚基组成的二聚体。N-末端氨基酸为丙氨酸。圆二色谱分析表明，该酶在207．5nm和215nm有一平缓的负峰，二级结构中α-螺旋占34．28％，β-折叠占33．24％，无规则卷曲占32．28％，紫外吸收表现一般蛋白质的特征吸收光谱，在278nm处有最大吸收。酶最适pH5．4，对谷氨酸的Km值为1．62×10-3mol·L-1,最适温度40℃，酶特异性地使谷氨酸脱羧，不能使门冬氨酸等其他氨基酸脱羧。比较结果说明该酶在已知结构和性质上与人及大鼠脑的谷氨酸脱羧酶接近，但和已知的几种植物的酶相差较远。
关键词：
林生山黧豆 谷氨酸脱羧酶 性质 比较研究
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
朱静 师亮 任昂 刘锐 赵明文
灵芝是具有广泛应用价值的食药用真菌，灵芝三萜是灵芝的主要药用成分之一，也是衡量其经济价值的重要指标。虽然灵芝三萜的主要合成途径已清晰，但是其分子调控机制并不清晰。基于近年来基因组学、蛋白质组学等的发展和遗传研究手段的进步，本文综述了灵芝三萜合成途径中的功能基因、信号分子(如活性氧、一氧化氮、钙离子等)和环境因子(如高温、营养、化学物质等)对灵芝三萜生物合成的重要作用，表明灵芝三萜的生物合成是由多种因素共同调控的，为高品质灵芝栽培提供技术创新的理论依据和技术指导，对提高我国食药真菌产品在国际市场的竞争力具有重要意义。
关键词：
灵芝 灵芝三萜 信号分子 基因 环境因子
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张成 耿照玉 赵晓惠
L-茶氨酸是茶叶的特征性非蛋白质氨基酸,具有多种有益生物学功能。近年来,将其作为一种功能性饲料添加剂应用于畜禽生产已见报道,展现出了巨大的潜能。本文主要综述了L-茶氨酸的抗氧化和免疫调节功能及其在畜禽生产中的应用现状,旨在为L-茶氨酸在畜禽生产中的合理应用提供依据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
段远霖 李合生 伍素辉 杨泽敏
加钙培养的小麦黄化苗和绿苗，经过红光（Ｒ） 、远红光（ＦＲ） 处理有效地提高谷氨酸合成酶（ＧＯＧＡＴ） 的活性。不同光质对麦苗硝态氮代谢关键酶活性的影响与细胞内钙调系统及其作用靶酶———Ｃａ２＋ＡＴＰａｓｅ 、Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ 活性有密切的联系。Ｃａ２ ＋ － ＡＴＰａｓｅ 、Ｈ＋ － ＡＴＰａｓｅ 的作用能改变细胞内Ｈ＋ 、Ｃａ２＋ 的浓度，从而调节细胞的内环境，进而对植物的氮代谢过程起调节作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
植爽 任艳红 唐星 徐凤翔 王传宏 赵爱春 王茜龄
【目的】克隆桑树的谷氨酸脱氢酶基因GDH,了解其结构、组织特异性表达以及调控特点,并获得桑树谷氨酸脱氢酶蛋白,为进一步研究谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)在桑树氮代谢过程中的功能奠定基础,也为多年生木本植物的GDH研究提供参考。【方法】根据川桑基因组数据库搜索GDH同源序列设计引物,以杂交桑品种桂桑优62号(M.atropurpurea Roxb.)c DNA为模板,通过RT-PCR克隆获得Ma GDHs。利用NCBI上BLAST和CDD进行氨基酸序列比对和保守结构域
[期刊] 淡水渔业
[作者]
岳华梅 吴金平 陈细华 阮瑞 李创举
谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)可通过逆催化谷氨酸脱氨参与氨基酸代谢,也可生产合成氨,参与氮代谢。实验克隆得到达氏鳇(Huso dauricus)谷氨酸脱氢酶基因(gdh)的开放阅读框序列。该序列全长为1 635 bp,编码544个氨基酸。氨基酸序列多重比对结果显示达氏鳇GDH与其它脊椎动物的序列一致性较高。进一步的系统进化树分析发现,达氏鳇GDH与两栖类、爬行类及哺乳类聚为一支。组织表达分析结果表明,达氏鳇gdh的mRNA在各组织中都有分布,并且在肠中转录水平最高。随后,采用荧光定量PCR分析了饲料中添加双低菜粕对达氏鳇蛋白质代谢相关基因(gdh、氨肽酶N apN、小肽转运载体pepT1)及应激反应相关的热休克蛋白(hsp90)基因表达的影响。在肝脏中,不同饲料投喂组gdh和hsp90的转录水平没有显著差异。在肠中,菜粕组gdh及apN基因的转录水平显著高于基础饲料组;菜粕组pepT1基因的转录水平也高于基础饲料组,但是没有显著性差异。以上结果表明,植物蛋白原料菜粕添加可引起达氏鳇肠道中蛋白质代谢水平上升,而不引起鱼体的应激反应。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
何玉英 李少飞 王清印 李健
采用ＲＡＣＥ技术克隆获得中国明对虾（ＦＥｎｎＥＲｏｐＥｎＡＥｕｓ ＣｈｉｎＥｎｓｉｓ）谷氨酸脱氢酶ＧＤｈ基因（ＦＣ ＧＤｈ）。ＦＣ ＧＤｈ基因全长１７７９ ｂｐ，包括１个１６５９ ｂｐ的开放阅读框（ｏＲＦ），编码５５２个氨基酸，预测分子量大小为６１．３ ｋ ＤＡ，理论等电点为６．５４。同源性分析显示，ＦＣ ＧＤｈ氨基酸序列与其他动物高度保守，其中，与凡纳滨对虾最为相似，高达９８％，其次为中华绒螯蟹，为８９％。系统进化树分析显示，ＦＣ ＧＤｈ氨基酸序列与凡纳滨对虾ＧＤｈ聚为一支，之后依次为：中华绒螯蟹、黑腹果蝇、埃及按蚊。组织表达分析发现，ＦＣ ＧＤｈ基因在肌肉、鳃、肝胰腺、胃、肠、淋巴和血淋巴．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周发林 陈劲松 黄建华 杨其彬 邱丽华 马振华 江世贵
采用ｃＤＮＡ末端快速扩增技术（ｒＡｐｉＤ ＡｍｐｌｉｆｉｃＡｔｉｏＮ ｏｆ ｃＤＮＡ ｅＮＤｓ，ｒＡｃｅ）获得了斑节对虾（ｐｅＮＡｅｕｓ ｍｏＮｏＤｏＮ）谷氨酸脱氢酶基因（ｐｍＧＤＨ）的ｃＤＮＡ序列。该序列全长２３８６ ｂｐ，开放阅读框（ｏｒｆ）为１６７７ ｂｐ，３＇非编码区（ｕｔｒ）为６８８ ｂｐ，包括含有２７个碱基的ｐｏｌｙ（Ａ）尾，５＇非编码区（ｕｔｒ）为２１ ｂｐ。ｏｒｆ可编码５５８个氨基酸，预测分子量为６１．８３７ ｋ Ｄ，理论等电点为６．５７。序列含有ｅｌｆＶ ＤｅＨｙＤｒｏＧ Ｎ与ＮＡＤ ｂｉＮＤ １ Ｇｌｕ ＤＨ两个保守结构域，３７个磷酸化位点，３个糖基化位点。通过同源性、相似．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘志恒 黄欣阳 刘淼 杨红 孙俊 赵志慧
对芝麻镰孢茎枯病病原菌(Fusarium oxysporum)的生物学特性进行了研究。结果表明:病菌菌丝在供试10种培养基上均能良好生长,在查氏琼脂培养基和液体培养基上生长较快;菌丝生长温度范围10～30℃,最适温度25℃;最适pH值为7;光照抑制菌丝生长,菌丝致死温度为64℃10min。病原菌在VBC培养基上易于产孢,产生的孢子多为大型分生孢子,而在CA培养基上产生小型分生孢子较多;产孢温度范围10～30℃,最适30℃,最适pH值为9。分生孢子萌发适宜碳源为1%木糖溶液,适宜氮源为0.01%脲溶液;分生孢子在10～30℃温度间均能萌发,最适25℃;萌发最适pH值为8,光照抑制孢子萌发,分生孢...
关键词：
芝麻镰孢茎枯病 尖孢镰孢菌 生物学特性
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