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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李若楠 康瑞芬 沈丹 戴鹏远 唐倩 李春梅
[目的]本试验以猪空肠上皮细胞（IPEC-J2）为模型，探讨谷氨酰胺（Gln）对呕吐毒素（DON）诱导的IPEC-J2细胞凋亡和炎症的影响。[方法]通过MTT方法测定细胞活力来选择适宜的Gln浓度，以不添加Gln和DON的细胞为空白对照组，试验组分别为0.75 mmol·L~(-1) Gln组，2.0 μg·mL~(-1) DON组和2.0 μg·mL~(-1) DON+0.75 mmol·L~(-1) Gln组，处理24 h后测定各组细胞凋亡率、活性氧自由基（ROS）及细胞凋亡和炎症相关基因和蛋白的表达水平。[结果]与对照组相比，DON处理24 h显著升高细胞的凋亡比例和ROS含量(ROS荧光密度/细胞总数)（P<0.01）；与DON组相比，DON+Gln组显著降低细胞的凋亡比例和ROS含量（P<0.01）。与对照组相比，DON组上调了IPEC-J2细胞白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL–6）、环氧合酶2（COX–2）及肿瘤坏死因子α（TNF-α）炎症相关基因和Caspase-3及Caspase-8凋亡相关基因的表达水平；与DON组相比，DON+Gln组下调了IPEC-J2细胞IL-1β、COX–2、Caspase-3、Caspase-8、BAK和Bcl-2基因的表达水平。蛋白免疫荧光结果显示，与对照组相比，DON组上调IPEC-J2细胞Caspase-3，核转录因子κB（NF-κB）和磷酸化核转录因子κB（phospho-NF-κB）蛋白的表达，而添加Gln后（DON+Gln组）下调了相关蛋白的表达。[结论]Gln通过清除DON诱导的IPEC-J2细胞中过量的ROS和调节炎症和凋亡相关基因及蛋白的表达量来缓解由DON引起的肠道上皮细胞损伤。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
严玉霖 高洪 翁银标 赵汝
为揭示内毒素(ET)诱导体内细胞凋亡的现象和阳离子A(CA)的保护效应,从家兔耳缘静脉注射400 U/kg ET建立内毒素休克模型,并设对照组和CA保护组,在第3、4、8和12 h分别收集外周血淋巴细胞(PBL)和肝细胞,电子显微镜观察PBL发生凋亡的形态学特征;运用缺口末端标记技术(TUNEL)观察肝细胞凋亡的形态学变化并计算肝细胞凋亡指数;采用流式细胞术(FCM)检测肝细胞的凋亡率。结果显示,PBL发生凋亡的超微结构特征表现为核染色质浓缩呈"新月体"状、"八字形"状或"花瓣"状等,在休克晚期出现凋亡小体;与对照组相比,TUNEL法检测到的肝细胞凋亡指数先上升到70%,然后下降到59%,后又...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张亚南 李轩 陈慧子 余凯凡 朱伟云
[目的]本文以猪肠道上皮IPEC-J2细胞为模型,探究不同水平丙酸钠对细胞紧密连接和炎症细胞因子的影响。[方法]分别用1和10 mmol·L~(-1)丙酸钠处理IPEC-J2细胞,以不加丙酸钠处理IPEC-J2细胞为对照组,分别处理12 h和24 h后测定各组细胞活力、跨膜电阻(TEER)值、紧密连接相关蛋白及炎症细胞因子基因表达和细胞上清液中炎症因子浓度。[结果]丙酸钠处理24 h后,处理组细胞活力显著下降(P<0.05),细胞的TEER值则显著上升(P<0.05)。ELISA测定结果表明,丙酸钠显著刺激IL-8和TNF-α的分泌(P0.05)。[结论]丙酸钠选择性上调紧密连接蛋白家族相关基因的表达,一定程度上维护小肠上皮细胞屏障功能的完整性,同时调节细胞炎症反应,揭示丙酸在调节小肠上皮细胞屏障功能以及炎症反应过程中发挥重要作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
庞敏 屈佩 高春蕾 王宗灵 张镱
通过MTT分析、光学显微镜观察、Hoechst33342染色质荧光染色、DNA琼脂糖凝胶电泳、罗丹明123染色及钙离子激光扫描显微镜检测等手段,分析了虾夷扇贝毒素(yessotoxin,YTX)对Hela细胞的毒性作用。通过实验发现,正常Hela细胞与不同浓度YTX共孵育24 h后,一定浓度的YTX能对Hela细胞产生毒性作用,使其发生明显凋亡特征,如形态变化、染色质凝缩、DNA片段化以及线粒体膜电位降低。此外,YTX还能造成Hela细胞内胞质钙离子升高。这种毒性作用可能是YTX通过对胞内钙离子浓度的影响进而诱导发生的。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陶文静 张子婷 刘媛 宋丹 李向臣
【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂，能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而，NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用，为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料，采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化；设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理，并与BPA共处理PK15细胞，CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）mRNA相对表达量，蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、cleaved-Caspase3）水平；免疫荧光染色检测凋亡细胞数量和核因子κB(NF-κB)核易位。【结果】与对照组相比，BPA处理显著降低了细胞内CAT、T-SOD和GSH-Px活性（P<0.05）。CCK-8结果显示，与对照组相比，BPA显著降低PK15细胞活力，而不同浓度的NAC均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05），而NAC预处理抑制BPA诱导增加的炎症相关因子（IL-8、IL-6和IL-1β）mRNA相对表达量，免疫荧光检测NF-κB核易位显示，对照组的NF-κB主要分布在细胞质中，而BPA处理后的NF-κB主要分布在细胞核，NAC预处理明显减少核NF-κB的表达。【结论】NAC显著提高BPA诱导降低的PK15细胞活力，抑制BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
萧晟 刘丹丹 甘芳 黄克和
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)暴露对体外培养的仔猪空肠上皮(IPEC-J2)细胞增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及其相关机制。[方法]以不同浓度的DON(0、0.5、1、2、4、8、和16 μmol/L)处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT法、Hoechst 33258、western blot、Millipore-ERS和IFA检测DON对IPEC-J2细胞增殖、对细胞凋亡、屏障功能和自噬的影响;通过添加自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)来升高细胞的自噬水平,用上述方法检测RAPA对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度达到4、8和16 μmol/L时:1)细胞增殖显著下降(P<0.05);2)凋亡细胞数量和凋亡相关蛋白Cleaved-caspase3表达显著增加(P<0.05);3)细胞跨膜电阻和紧密连接蛋白occludin表达显著下降(P<0.05);4)自噬相关蛋白LC3-II和Atg5表达显著下降(P<0.05);5)当添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)时,可以显著缓解DON引起的细胞增殖毒性、凋亡和屏障障碍。[结论]DON暴露通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
萧晟 刘丹丹 甘芳 黄克和
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对体外培养的仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)增殖、凋亡和屏障功能的影响,探讨DON的肠道毒性作用及相关机制。[方法]以不同浓度(0、0.5、1、2、4、8、和16μmol·L~(-1))DON处理IPEC-J2细胞24 h后,采用MTT、Hoechst 33258、Western blot、Millipore-ERS和IFA法检测DON对IPEC-J2细胞增殖、凋亡、屏障功能和自噬水平的影响;在4μmol·L~(-1) DON处理组添加自噬激活剂雷帕霉素(Rapa)来提高细胞的自噬水平,用上述方法检测Rapa对DON引起的IPEC-J2细胞增殖毒性、凋亡和屏障功能的影响。[结果]与对照组相比,当DON浓度为4、8和16μmol·L~(-1)时,细胞活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),细胞跨膜电阻(TEER)值和紧密连接蛋白Occludin表达显著下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Atg5表达显著下降(P<0.05)。添加Rapa可以显著缓解DON引起的细胞毒性、凋亡和屏障功能障碍。[结论]DON通过抑制自噬引起IPEC-J2细胞增殖下降、凋亡增加和屏障功能障碍。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马春红 李秀丽 张红心 董文琦 戴志刚 王立安 贾银锁
以2对同核异质玉米B37和Mo17叶片的原生质体为试材,并将原生质体随机分为4组,HMC毒素质量浓度分别为0、50、100、150μg/mL,处理时间分别为1、3、6h。采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染的方法进行检测,观察处理后原生质体的凋亡特征及细胞凋亡率的变化趋势。结果表明:HMC毒素处理玉米原生质体后发生细胞凋亡,并出现凋亡小体、染色质边集或环状染色质等凋亡特征;经不同浓度HMC毒素处理B37和Mo17玉米原生质体,CB37的最大凋亡率为10.80%,NB37为4.90%,CMo17为21.00%,NMo17为8.83%;HMC毒素对2种基因型的C、N细胞质所测结果一致,均为...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
庞卫军 许儒祥 熊燕 孙世铎 杨公社
【目的】探讨烟酰胺(nicotinamide,NIC)和罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对猪前体脂肪细胞凋亡的作用及分子机制,寻找通过凋亡方式调控脂肪细胞数目进而控制生脂的新途径。【方法】分别用含有0、0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L-1RSG的培养基处理猪前体脂肪细胞,在处理后的48 h,对不同处理组细胞进行Hoechst33258和Annexin-V-FITC/PI染色以观察细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡情况;并收集细胞总蛋白,用Western blotting方法检测细胞凋亡关键基因的蛋白表达水平;基于RSG促凋亡的浓度梯度结果,选用1.0mmol·L...
关键词：
猪 烟酰胺 罗格列酮 前体脂肪细胞 凋亡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马立 金鑫 林佳佳 陈佳雯 海思娆 裘知 王正 汪洋 赵杰 李玉 冯士彬 吴金节 王希春
[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯(Deoxynivalenol，DON)诱导仔猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)焦亡的分子机制。[方法]以500ng·mL~(-1)DON和1μmol·mL~(-1)4-PBA(内质网应激抑制剂)单一及联合染毒IPEC-J2细胞24h。采用CCK-8测细胞活率；倒置显微镜观察细胞生长状况；透射电镜观察细胞超微结构;WB和qRT-PCR测内质网应激通路和细胞焦亡关键分子的基因相对表达量和蛋白表达水平；流式细胞仪测ROS含量。[结果]与对照组相比，DON组细胞缝隙变宽、细胞密度降低、超微结构被破坏，ROS、MDA、IL-1β、IL-18含量极显著升高（P<0.01），GRP78、IRE1、ATF6，、GSDMD和Caspase-1的mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01），GRP78、CHOP、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1的蛋白表达水平极显著升高(P<0.01)，SOD、GSH-Px、CAT的活性极显著下降（P<0.01）。与DON组相比，DON和4-PBA联合处理组的细胞数量增多，细胞缝隙变小，细胞器形态正常，ROS、MDA、IL-1β、IL-18含量以及ATF6、Caspase-1的mRNA相对表达量极显著下降（P<0.01），GSDMD、GRP78和IRE1的mRNA相对表达量显著下降（P<0.05)，GRP78、CHOP、ATF6、IRE1、GSDMD和Caspase-1的蛋白表水平极显著降低(P<0.01)，SOD、GSH-Px活性极显著上升（P<0.01）。[结论]DON可通过激活内质网应激通路诱导IPEC-J2细胞焦亡。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马春红 李秀丽 董文琦 张红心 李运朝 崔四平 王立安 贾银锁 戴志刚
【目的】研究玉米小斑病菌C小种毒素(HMC-toxin)诱导同核异质体玉米的离体根冠细胞发生凋亡的差异性及凋亡规律。【方法】采用吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)荧光复染以及Hoechst 33258荧光染色的方法检测。【结果】HMC毒素诱导根冠细胞发生凋亡,出现凋亡小体与染色体边集形态特征。在3种毒素浓度、3种处理时间下,Mo17-C的根冠细胞死亡率均高于Mo17-N。采用AO与EB复染方法,在150μg.mL-1HMC毒素处理7 h时,Mo17-C细胞凋亡率达最高值,为68.7%,而Mo17-N仅为29%;经Hoechst 33258染色后,在150μg.mL-1HMC毒素处理下,Mo17-...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戴美玲 赵晓民 丁利 许信刚 黄勇 童德文
【目的】探讨猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染猪睾丸细胞(ST细胞)后是否可诱导细胞发生凋亡,并对凋亡的信号通路进行初步探究,为进一步揭示TGEV的致病机制提供理论基础。【方法】用TGEV感染对数生长期的ST细胞,同时设立对照组,在感染后不同时间取细胞样品,通过细胞形态观察、细胞活性检测、细胞凋亡率检测和细胞内Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9活性检测及Western blot分析等方法,研究TGEV感染对ST细胞的影响。【结果】TGEV感染可抑制ST细胞生长,并且呈现病毒感染剂量和感染时间的依赖性。倒置显微镜和荧光显微镜观察结果显示,10MOI(感染复数)的TGEV感...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马春红 李秀丽 董文琦 李运朝 崔四平 贾银锁 王立安
将玉米同核异质体不育细胞质CB37及其正常保持系NB37的离体根冠细胞分为4组,其中3组分别用质量浓度50μg/mL、100μg/mL和150μg/mL的玉米小斑病菌C小种(HMC)毒素诱导,1组用pH6.5PBS诱导作为对照,诱导时间分别为1h、4h和7h。然后采用中性红与伊文思蓝染色、吖啶橙(AO)与溴化乙啶(EB)复染和Hoechst33258染色3种方法检测玉米根冠细胞的凋亡状况。结果表明:HMC毒素诱导玉米根冠细胞发生凋亡,并出现凋亡小体与染色体边集形态特征。中性红与伊文思蓝染色,只能检测出活细胞和死细胞,且在3种毒素浓度、3种处理时间下,CB37的根冠细胞死亡率均高于NB37;采用...
关键词：
玉米小斑病菌C小种 毒素 细胞凋亡 检测
[期刊] 华北农学报
[作者]
马春红 李秀丽 董文琦 及增发 李晓煜 戴志刚 王立安 贾银锁
以B37-C和B37-N的玉米原生质体和叶片为试材,研究HMC毒素对两种同核异质玉米B37细胞凋亡的诱导作用。经Hoechst33258荧光染色表明:HMC毒素处理后的玉米原生质体均出现细胞凋亡现象,在荧光显微镜下可观察到凋亡小体、染色质边集或环状染色质等凋亡特征。原生质体的细胞凋亡率,B37的C细胞质显著高于N细胞质玉米,且凋亡率随处理浓度和处理时间的增加而上升。用HMC毒素处理玉米叶片,明显出现DNA-ladder现象时所需的毒素浓度C、N两种细胞质均为200μg/mL;但C细胞质所需的时间为6 h,而N细胞质则需9 h。用荧光显微观察与凝胶电泳分析所获得的结果一致,均表现出C细胞质对毒素...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 王玉然 李广东 惠孝鑫
为了研究类猪圆环病毒2型因子P1和P2体外诱导的细胞凋亡作用,将P1和P2分子克隆分别转染PK-15细胞。结果表明,用透射电镜可以观察到P1和P2诱导PK-15细胞出现凋亡的典型形态学变化。
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