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[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁明山 陶震
利用启动子探针型载体ｐＳＵＰＶ２首次从诸葛菜总ＤＮＡ中克隆了７个具有启动功能的ＤＮＡ片段。转化Ｅ．ｃｏｌｉ表明最高卡那霉素（ｋｎａ）抗性为１４０μｇ／ｍｌ，最低为２０μｇ／ｍｌ。含启动子片段的７个重组质粒分别命名为ｐＳＵＰＺ１－７。Ｓｏｕｔｈｒｅｎ印迹表明ｐＳＵＰＺ６对Ｋｎａ的抗性功能来源于诸葛菜的１０ｋｂ、５ｋｂ和３．９ｋｂ片段。
[期刊] 林业科学
[作者]
杨桂燕 郭宇聪 张凤娇 赵震 高彩球
［目的］ＶＨＡｃ基因（Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ ｃ亚基）是Ｖ－ＡＴＰＡｓｅ的重要亚基，能响应盐、重金属等胁迫，过表达刚毛柽柳ＴＨＶＨＡｃ１基因的酵母能提高抗ｃｄｃｌ＿２耐ＮＡｃｌ能力。本研究拟通过分离ＴＨＶＨＡｃ１基因不同长度启动子片段并对其胁迫后活性进行分析，以进一步探讨ＴＨＶＨＡｃ１基因响应ｃｄｃｌ＿２和ＮＡｃｌ胁迫的机制。［方法］根据ＴＨＶＨＡｃ１基因启动子中含有的ｄｏｆ顺式作用元件的分布，将ＴＨＶＨＡｃ１基因上游启动子分为２０５ ｂＰ（－１—－２０５），５０４ ｂＰ（－１—－５０４）和７８１ ｂＰ（－１—－７８１）３个不同长度片段。将这些不同长度启动子片段分别替换Ｐ ｃＡＭｂＩＡ１３０１载体上．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
任伟 王志锋 周艳春 于洪柱 徐安凯
为了进一步提高转BADH基因植株的胁迫抗性,分离强胁迫诱导型启动子,以生长在新疆北部干旱沙漠地带的异苞滨藜(Atriplex micrantha)为研究对象,依据已经克隆的BADH基因cDNA序列,参照陈柏君等的方法,分离到长为1 509 bp的5'端上游序列(Genebank:HM230828),预测其转录起始位点为T(+1),位于ATG翻译起始位点的上游82 bp处,同时还发现了一段新的内含子序列(260 bp)。经PLACE和PLANT CARE软件分析,发现此序列具有启动子的基本转录元件:TATA盒和CAAT盒,包含多个抗逆调控元件:ABA响应元件(ABRE),水杨酸诱导元件(-58b...
关键词：
BADH基因 启动子 内含子 克隆
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵军良 巫东堂 王秀英 李改珍 巫一伦
减数分裂是有性繁殖的重要过程。已经发现,在玉米和拟南芥中,同源联会缺乏基因1(phs1),只允许同源染色体联会,而阻止非同源染色体联会。为了研究phs1在拟南芥中的表达,从拟南芥基因组中通过PCR扩增出phs1启动子,然后将phs1及其启动子克隆到含荧光表达蛋白GFP、YFP的表达载体上,最后将构建好的载体转化到根癌农杆菌中,用来转化拟南芥。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
邹芝英 王茂元 李大宇 杨弘
采用高保真PCR方法从尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)基因组DNA中分离出β-actin基因启动子序列,将β-actin基因启动子插入pN1-EGFP构建成真核细胞表达载体pEGFP-β-actin,并通过脂质体转染法将重组载体导入人胚肾上皮细胞HEK 293T,荧光显微镜下观察外源基因EGFP在细胞中的表达情况。结果显示:β-actin基因启动子调控区具有典型的启动子特征,含有TATA Box、CArG和CCAAT Box 3个重要的顺式作用元件。荧光显微镜下观察到50%～60%的HEK 293T细胞中发出绿色荧光,显示尼罗罗非鱼β-actin基因启动子能够驱动EGF...
[期刊] 华北农学报
[作者]
董浩 赵轶君 李红民
根据其他植物中已知的光合作用关键酶1,5-二磷酸核酮糖羧化/加氧酶小亚基编码基因(rbcS)及其启动子序列设计简并引物,以生菜叶片基因组DNA为模板,利用PCR扩增技术获得生菜rbcS上游1 046 bp的序列元件(GenBank登录号:JQ741945)。序列分析表明,该序列元件包含植物启动子所必需的核心元件CAAT-box和TATA-box,同时包含具有参与光应答、茉莉酸应答、脱落酸应答、乙烯应答、热胁迫应答及分生组织激活等相关的多种调控元件。序列比对表明,该序列与菊科、茄科、豆科3种科属多种植物的rbcS启动子序列存在较高同源性。该启动子的获得为开展以生菜作为外源蛋白表达宿主的相关研究奠...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王海英 叶星 白俊杰 夏仕玲 劳海华 简清 王琳
利用PCR技术克隆唐鱼(Tanichthy salbonubes)β-actin基因。所克隆的β-actin基因片段为1464bp,包含长为1374bp的启动调控区和90bp的部分开放阅读框。启动调控区包括105bp的β-actin基因上游调控序列、第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有对转录起重要作用的CAATBox、TATABox、CArGBox等元件。将唐鱼β-actin启动调控区克隆到红色荧光表达载体pDsRed2-1上,并显微注射到唐鱼受精卵中,荧光显微镜观察红色荧光蛋白(RFP)的表达。结果表明,RFP在转基因唐鱼中的表达阳性率较高,最高可达51.8%,且RFP的表达水平较...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋江华 朱熠鹏 余小林 向珣 曹家树
【目的】探讨花药绒毡层特异启动子BcA9调控的反义BcMF12基因对白菜(Brassica campestris L.ssp.chinensis,syn.B.rapaL.ssp.chinensis)基因沉默的效果,明确其对花粉发育的影响。【方法】在从白菜花蕾cDNA中克隆BcMF12基因的保守区段的基础上,将白菜花药特异表达启动子BcA9与反义BcMF12基因融合,构建反义表达载体,并经农杆菌介导导入到白菜基因组中,利用抗生素筛选和分子检测筛选出转基因植株。【结果】PCR和Southern检测结果表明,BcA9启动子驱动的反义BcMF12-GUS报告基因已整合到白菜基因组中;Northern杂...
[期刊] 华北农学报
[作者]
上官小霞 吴霞 李燕娥
通过PCR法扩增出陆地棉GhRDL1基因ATG上游1.2 kb的片段,将该片段融合GUS报告基因进行棉花、拟南芥及烟草转化。分析显示,GhRDL1基因启动子是一个棉纤维或表皮毛特异的启动子,能够驱动靶基因在单细胞的表皮毛(如棉纤维和拟南芥表皮毛)表达;在烟草表皮毛中,GUS基因在多细胞的腺毛(包括顶端的腺体细胞和柄细胞)和非腺毛中皆有表达。表明GhRDL1基因启动子是一个多功能的表皮毛特异启动子,可以用于棉花基因工程改良和植物次生代谢工程的研究。
关键词：
棉纤维 启动子 GhRDL1基因 表皮毛
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李永权 刘淼 上官黎阳 王晓红 胡涛 唐柳 张明生
[目的]克隆钩藤(Uncaria rhynchophylla)中马钱苷酸甲基转移酶(loganic acid methyltransferase,LAMT)基因及其启动子,对UrLAMT基因的组织表达及其对生物和非生物胁迫的响应进行分析,并对UrLAMT及其启动子的生物信息学进行分析,为进一步研究UrLAMT转录调控奠定基础。[方法]基于钩藤的转录组数据设计引物,采用PCR从钩藤cDNA中克隆UrLAMT序列,并对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR,分析UrLAMT在钩藤不同组织(根、茎、叶、花、果实、钩)中的表达,以及对外源茉莉酸甲酯(MeJA)、遮光/复光胁迫的响应;利用FPNI-PCR技术克隆UrLAMT上游启动子序列,并验证其活性,结合酵母单杂交试验,分析相应转录因子与UrLAMT启动子的调控关系。[结果]克隆得到钩藤UrLAMT序列,其长度为1 137 bp,共编码378个氨基酸。UrLAMT蛋白质相对分子质量为42.64 ku,理论等电点为5.76,为亲水性蛋白,无信号肽,不含跨膜结构,定位在细胞质中;UrLAMT基因在钩藤叶中表达量最高,其次为根;UrLAMT均能响应MeJA和光;其与短小蛇根草和长春花的进化关系较近。UrLAMT启动子序列长度为1 141 bp,除核心响应元件外还含有多个光响应元件,UrLAMT启动子在酵母中与光调控转录因子HY5存在相互作用。[结论]获得了UrLAMT基因及其启动子序列,其在钩藤叶中表达量最高,可能受光诱导。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王明明 李安宁 赵志东 张亚冉 段美艳 王亚宁 李世军 昝林森
【目的】鉴定牛ＭＹＯＺ１基因转录起始位点，确定牛ＭＹＯＺ１基因核心启动子区域，为进一步研究牛ＭＹＯＺ１基因的转录调控机制奠定基础。【方法】以秦川牛肌肉５′ＲＡＣＥ准备ＣＤＮＡ为模板，设计５′ＲＡＣＥ扩增试验，确定牛ＭＹＯＺ１基因转录起始位点。以秦川牛外周血基因组ＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ克隆获得牛ＭＹＯＺ１基因转录调控区－１ ６２８／＋６１目的片段。通过生物信息学分析软件预测可能包含的转录因子结合位点，设计逐段缺失引物，获得７个亚克隆，将其分别与ＰＧＬ３－ＢＡｓｉＣ载体连接，得到牛ＭＹＯＺ１基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒，通过脂质体法转染Ｃ２Ｃ１２细胞系，检测７个重组质粒的荧光素酶活性，分．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王珊 陈宏 蔡欣
根据G enB ank中已公布的人、猪和小鼠的MyoG基因的5′侧翼和部分第一外显子序列设计PCR引物,用touch-dow n PCR技术扩增了牛MyoG基因的启动子序列,构建了重组克隆载体pGEM-T-MyoG,并通过PCR扩增、限制性酶切对阳性克隆进行了鉴定、测序及生物信息学分析。结果表明,牛MyoG基因的启动子序列(G en-bank中注册号为AY 882581)长度为672 bp,其与猪、人和小鼠相应序列的同源性分别为94%,91%和88%,且其在不同物种之间具有一定的保守性。牛MyoG基因启动子的克隆与序列分析为进一步研究牛MyoG基因的表达调控奠定了基础。
关键词：
MyoG基因 启动子序列 序列分析 牛
[期刊] 华北农学报
[作者]
李君 闫志浩 贾万里 许蒙蒙 张景锋 徐秋良 韩浩园 权凯
脂肪甘油三酯水解酶(ATGL)是脂肪水解过程中的主要限速酶，是调控细胞中甘油三酯和脂肪酸之间平衡的关键因子。为了分析奶山羊ATGL基因启动子的结构及转录调控机制，以奶山羊全血DNA为模板，通过PCR技术扩增出ATGL基因5′侧翼序列并进行生物信息学分析；构建了5个不同长度的启动子缺失片段报告基因载体，通过转染奶山羊乳腺上皮细胞并检测其活性，确定其核心区域；分别用PPARG激动剂罗格列酮和SREBP1激动剂T0901317处理细胞，检测其对ATGL启动子活性的影响。结果表明，克隆得到奶山羊ATGL基因5′侧翼序列2 721 bp,包含转录起始位点上游2 024 bp。经在线软件分析发现，ATGL启动子含有真核生物启动子元件TATA-box和CpG岛；对转录因子结合位点预测发现，其上含有FOXO、SREBF1、PPARG、C/EBPα和E2F1等结合位点。启动子活性分析结果表明，ATGL启动子核心区域位于转录起始位点上游-256—+1位，且在-527—-256位存在负调控元件。用罗格列酮和T0901317处理细胞后发现，二者均能显著上调ATGL启动子活性，且罗格列酮作用的区域为-527—-256位，T0901317在-882—-527位发挥作用，表明PPARG和SREBP1调控ATGL启动子活性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘南南 张文伟 江玲 沈文飚 翟虎渠 万建民
从栽培水稻品种越光中克隆了水稻脂氧合酶-3基因(Lox-3)的启动子,长度为1343bp,其序列与日本晴对应的序列完全相同。生物信息学分析表明,该启动子序列中包含受信号诱导的元件(G-box)、温度响应元件(CCGAAA)和水分胁迫响应元件(CACATG)等顺式作用元件;进一步构建了Lox-3基因启动子与gus和gfp基因的融合表达载体并获得转基因植株,发现报告基因在转基因植株的根、茎、叶、花药、种胚及种皮中均有表达,在萌发种子的胚和胚芽中也有表达,但在胚乳中不表达。此外,经ABA、NaCl及人工陈化处理后对报告基因的表达进行了定量分析,发现这些非生物胁迫可能通过诱导启动子顺式元件致使报告基因...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈虹君 高臻毅 郭小勤
ＩＤＤ基因家族编码一种混合型的转录因子，多数参与植物的生长发育．真核基因的表达受多种因素的调控，其中启动子在转录水平上的调节作用至关重要．本研究截取毛竹ＩＤＤ家族８个基因（Ｐｈ ＩＤＤ１－２，Ｐｈ ＩＤＤ４－８和Ｐｈ ＩＤ１）起始密码子前２ ０００ ｂＰ序列，顺式作用元件分析显示，这些基因启动子中均存在ＴＡＴＡ框和ＣＡＡＴ框，除此之外，上游调控区域还存在光响应元件、激素响应元件、逆境胁迫元件以及其他响应元件，其中有些元件是某个基因所特有的，表现出该基因家族各基因独特的表达模式，也表明该家族基因的功能分化，参与植物发育的各个阶段．
关键词：
毛竹 IDD基因家族 启动子 顺式元件
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