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[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
卓仁英 孙宗修
全球20%的耕地和近半数的灌溉土地都受到不同程度的盐害威胁,抗盐育种具有重要意义。针对常规育种周期长等明显的局限性,利用抗盐转基因可以迅速获得抗盐材料,明显缩短育种周期。利用PCR技术克隆获得Rd29A这一干旱、盐碱等逆境诱导表达的特异性启动子,与叶绿体转运肽和甜菜碱醛脱氢酶基因构建pBinRdMCS重组质粒,用于林木转化。通过克隆Rd29A启动子构建逆境诱导的高效表达载体,可对林木抗盐转基因育种提供理论指导。图5参8
关键词：
林木 抗盐 Rd29A启动子 BADH
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴杨 贺俐 赵书环 张木清
利用PCR技术从拟南芥(Arabidopsis thaliana)基因组中分离了rd29A基因上游420 bp的调控序列,序列分析表明,该片段与已报道的rd29A启动子有100%的同源性,包括DRE、ABRE等顺式作用元件.用rd29A启动子构建了具有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体,通过基因枪导入法转化甘蔗愈伤组织,经过抗性筛选获得再生植株,在PEG胁迫下,用荧光显微镜观察到s65t(GFP)基因在愈伤组织和叶片中表达,通过PCR鉴定获得了5株转基因植株.同时本文还构建了由rd29A调控的DREB2B基因的植物表达载体rd29A-dreb-hyg.
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴梅花 张丽 牛一丁 方天祺 哈斯阿古拉
以拟南芥基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到逆境胁迫诱导表达基因rd29A的启动子片段,将其克隆到pUC19质粒中进行序列分析。结果表明,获得的启动子片段大小为937bp,与已报道的该启动子序列比较,其核苷酸序列同源性为99.8%。
关键词：
拟南芥 rd29A 启动子 抗逆基因
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
李群 王学英 李贺 刘野 阮成江
利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)的基因组DNA和拟南芥(Arabidopsis thaliana)cDNA中分别扩增种子特异启动子napin和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)基因片段,并将它们依次插入到植物表达载体pCAMBIA1390的多克隆位点处,构建了种子特异启动子napin驱动的DGAT基因植物表达载体p1390ND,冻融法将其导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404、EHA105和AGL1中,PCR检测结果证明,重组质粒p1390ND已成功导入农杆菌细胞。该载体可应用于油料能源植物种子含油量的遗传改良。
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱亚兰 姚伟 窦建华 乐超银 何正权 陈发菊 梁宏伟 梁薇
根据GenBank已公布的种子特异性的Oleosin蛋白基因启动子序列设计合成引物,利用PCR技术从油菜总基因组DNA中扩增出Oleosin基因启动子序列(SOP),将该序列克隆到pGM-T载体中,经鉴定获得pGM-T-SOP重组载体。测序和序列分析表明,该启动子序列由899 bp核苷酸组成,其核苷酸序列与GenBank中的Oleosin基因启动子序列同源性高达95.6%。分别用限制性内切酶HindⅢ和BamH I双酶切重组质粒pGMT-SOP和双元植物表达载体pBI121,分别回收pGMT-SOP重组质粒中的SOP小片段和pBI121植物表达载体中去掉CaMV35S组成型启动子的大片段,经连...
关键词：
种子特异表达启动子 克隆 油菜
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
冯连荣 王占斌 宋立志
为了探索山葡萄CBF3基因(VaCBF3)对杨树的遗传转化的影响,及组成型启动子和诱导型启动子对转基因植株生长的影响,分别构建由2种类型启动子调控的植物表达载体。根据GenBank上公布的rd29A基因序列设计特异性引物,利用PCR方法从拟南芥基因组DNA中克隆rd29A基因启动子片段,利用限制性内切酶通过酶切、连接构建由组成型启动子35S和诱导型启动子rd29A基因启动子驱动的VaCBF3基因植物表达载体,利用冻融法完成重组质粒对根癌农杆菌LBA4404的转化。试验结果表明,所克隆的rd29A基因启动子片段序列分析表明该启动子片段长度为945bp,与GenBank中基因序列同源性达99%,具...
[期刊] 华北农学报
[作者]
李群 王学英 刘野 阮成江
利用PCR技术从甘蓝型油菜(Brassica napus L.)和酵母INVSc1(Saccharomyces cerevisiae)的基因组DNA中分别扩增获得种子特异启动子napin和3-磷酸甘油脱氢酶(GPD1)基因片段,并将它们分别克隆到pMD18-T载体中。利用中间载体pBluescriptKS将两目的片段插入到植物表达载体pCAMBIA1390的多克隆位点处,构建了种子特异启动子napin驱动的GPD1基因植物表达载体p1390NG,并用冻融法将其导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404、EHA105和AGL1中,可应用于油料能源植物种子含...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
刘学英 乌云塔娜
为了检测S12-RNase启动子的表达特性,以pBI101.2为基础,构建了砂梨S12-RNase基因启动子5’端系列缺失植物表达载体PS12-(0～5)-GUS-pBll01.2,并通过农杆菌介导的Floral Dip法转化哥伦比亚野生型拟南芥。卡那霉素和PCR鉴定表明:GUS基因已整合到转基因植株的基因组中,为下一步进行启动子功能的鉴定奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
倪志勇 于月华 刘超 任燕萍 陈全家 曲延英
为了研究miRNA表达的调控机制,以大豆Williams 82基因组DNA为材料,根据预测的gma-miR160o启动子序列设计引物,采用PCR方法克隆gma-miR160o上游一段长度为1 910 bp的启动子序列。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,gma-miR160o启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。将gma-miR160o启动子替代p BI121载体中的Ca MV35S启动子,构建了与GUS融合的启动子表达载体。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨志如 云锦凤 魏建华 徐春波
为研究冷诱导转录因子CBF1(C-repeat-binding-factor)基因对我国优良豆科牧草——苜蓿的抗寒性的改良作用,试验从拟南芥(Arabidopsis thaliana)中利用PCR方法分离了CBF1基因及其启动子,分别构建了CaMV 35S启动子和来源于拟南芥的CBF1启动子驱动的农杆菌介导的植物转化表达载体,为下一步研究利用CBF1基因改良苜蓿抗逆性奠定了基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵纯钦 徐登安 陈静 余懋群
组织特异性启动子是植物基因工程改良的重要工具。ＲＡＦＴＩＮ是禾本科植物花药绒毡层中特异积累与花药发育相关的蛋白，其调控序列可能提供一个很好来源的花药特异性表达启动子。为了解小麦ＴＡＲＡＦＴＩＮ１Ａ基因启动子的花药表达特异性，本研究分离了ＴＡＲＡＦＴＩＮ１Ａ基因的启动子，生物信息学分析表明，该启动子含有３种花药特异表达元件（总计１０个），１个ＡＢＲＥ脱落酸响应元件，ＴＧＡＣＧ－ｍｏＴＩＦ与ＣＧＴＣＡ－ｍｏＴＩＦ茉莉酸甲酯响应元件各１个，８个ＡＲＲ１ＡＴ细胞分裂素响应元件，以及２个ＤＲＥ和１个ｍＢＳ干旱响应元件。采用５＇端缺失的方法，分别克隆１４２９、８９８和３５１ Ｂｐ的启动子片段，经连接、转化．．．
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵纯钦 徐登安 陈静 余懋群
组织特异性启动子是植物基因工程改良的重要工具。RAFTIN是禾本科植物花药绒毡层中特异积累与花药发育相关的蛋白,其调控序列可能提供一个很好来源的花药特异性表达启动子。为了解小麦TaRAFTIN1a基因启动子的花药表达特异性,本研究分离了TaRAFTIN1a基因的启动子,生物信息学分析表明,该启动子含有3种花药特异表达元件(总计10个),1个ABRE脱落酸响应元件,TGACG-motif与CGTCA-motif茉莉酸甲酯响应元件各1个,8个ARR1AT细胞分裂素响应元件,以及2个DRE和1个MBS干旱响应元件。采用5'端缺失的方法,分别克隆1429、898和351 bp的启动子片段,经连接、转化...
[期刊] 华北农学报
[作者]
欧阳乐军 黄真池 沙月娥 曾富华
根据GenBank中植物病原物诱导型启动子碱基序列设计引物,以烟草基因组DNA为模板,扩增PPP3启动子。用PPP3替换pCAMBIA1301中与gus基因相连的35S启动子,构建重组质粒pCOMBIA+PPP3+gus后导入农杆菌GV3101。通过农杆菌介导的瞬时表达技术将受PPPs控制的gus基因导入烟草。分别接种青枯菌和水杨酸24 h后,烟草叶片中检测到gus基因转录效率分别提高了27.94,17.69倍。表明PPP3启动子具有本底表达水平低、诱导表达活性强的特点。
关键词：
诱导型启动子 瞬时表达 定量PCR
[期刊] 华北农学报
[作者]
任伟 王志锋 周艳春 于洪柱 徐安凯
为了进一步提高转BADH基因植株的胁迫抗性,分离强胁迫诱导型启动子,以生长在新疆北部干旱沙漠地带的异苞滨藜(Atriplex micrantha)为研究对象,依据已经克隆的BADH基因cDNA序列,参照陈柏君等的方法,分离到长为1 509 bp的5'端上游序列(Genebank:HM230828),预测其转录起始位点为T(+1),位于ATG翻译起始位点的上游82 bp处,同时还发现了一段新的内含子序列(260 bp)。经PLACE和PLANT CARE软件分析,发现此序列具有启动子的基本转录元件:TATA盒和CAAT盒,包含多个抗逆调控元件:ABA响应元件(ABRE),水杨酸诱导元件(-58b...
关键词：
BADH基因 启动子 内含子 克隆
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵军良 巫东堂 王秀英 李改珍 巫一伦
减数分裂是有性繁殖的重要过程。已经发现,在玉米和拟南芥中,同源联会缺乏基因1(phs1),只允许同源染色体联会,而阻止非同源染色体联会。为了研究phs1在拟南芥中的表达,从拟南芥基因组中通过PCR扩增出phs1启动子,然后将phs1及其启动子克隆到含荧光表达蛋白GFP、YFP的表达载体上,最后将构建好的载体转化到根癌农杆菌中,用来转化拟南芥。
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