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[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈锐 范学政 朱元源 邹兴启 徐璐 张乾义 王琴 赵启祖
【目的】牛病毒性腹泻病毒（ｂｏｖｉｎｅ ｖｉｒａｌ ｄｉａｒｒｈｅａ ｖｉｒｕｓ，ｂｖｄｖ）是一种可导致养牛业出现重大经济损失的常见病原体。该文以中国西部散养肉牛为研究对象，拟通过血清学方法和生物信息分析，评估ｂｖｄｖ在中国散养肉牛中的整体流行状况，探究国内流行的ｂｖｄｖ基因多样性，为制定针对ｂｖｄｖ的合理防控措施和疫苗的研发提供理论依据与素材。【方法】２０１４—２０１５年分别从云南、新疆、甘肃和内蒙古４省（区）采集散养肉牛的血清样本共１ ３３２份，利用ｂｖｄｖ抗体检测试剂盒进行检测，统计不同地区散养肉牛ｂｖｄｖ抗体阳性率。将抗体阴性的血清样本进行ｂｖｄｖ抗原检测，抗原阳性或可疑血清接种Ｍｄｂ．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
朱杰 杨才俊 祁明普 杨凯辉 王宇 陈颖钰 陈曦 胡长敏 郭爱珍
为全面评估我国牛群中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）病原流行率对该病毒感染的防控，在中国知网（CNKI）、万方、维普、PubMed和ScienceDirect 5个数据库中，检索截止到2021年9月1日发表的关于中国牛群BVDV流行情况的文献，并进行系统评价和Meta分析。共筛选出93篇关于BVDV病原学检测的研究论文纳入本次Meta分析中。分析结果显示：我国牛群中BVDV病原（抗原和核酸）流行率为9.8%(95%CI:7.8,11.9)，其中BVDV抗原流行率为3.1%(95%CI:2.1,4.4),BVDV核酸流行率为19.5%(95%CI:16.0,23.3)。各省间比较发现，青海省流行率最高，为22.6%(95%CI:12.1,35.3)，其次是福建省和广西壮族自治区。进一步开展亚组分析和Meta回归分析的结果显示，品种（牦牛对比奶牛：比值比（odds ratio,OR）=1.37,95%CI:1.05～1.79）、饲养模式（散养对比规模化：OR=1.41,95%CI:1.08～1.85）、诊断方法（RT-PCR vs ELISA:OR=1.64,95%CI:1.38～1.94）、牛体健康状况（有临床症状对比无临床症状：OR=1.42,95%CI:1.20～1.68）、高山高原气候（OR=1.54,95%CI:1.20～1.97）和高海拔（>3000 m;OR=1.64,95%CI:1.21～2.21）等都是BVDV感染流行的风险因子。以上结果表明，BVDV在我国奶牛、肉牛和牦牛群体中广泛流行，有必要持续监测BVDV感染的流行情况。此外，根据本研究揭示风险因子，制定相应的防控方案，防止BVDV在我国牛群中传播。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郝宝成 武凡琳 邢小勇 项海涛 温峰琴 王学红 权晓弟 胡永浩 梁剑平
【目的】疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等,在冬季牧草严重缺乏的时节,牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降,甚至死亡,每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元,是危害最严重的毒草。目前,我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛,资源丰富,如何改善草地生态,合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来,随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果,还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马鹏 李林杰 常秋燕 王悦萦 马晓霞 马忠仁
【目的】本研究旨在对来源于白牦牛的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) GSTZ株的E0基因进行分析,并利用E0基因对GSTZ进行基因分型。【方法】通过提取牛病毒性腹泻病毒(BVDV) RNA,使用RT-PCR技术扩增BVDV E0基因,将其插入到pET-28a中,构建pET-28a-E0原核表达载体,转化BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆,鉴定及测序。IPTG诱导后使用BVDV阳性血清作一抗,经western blot鉴定。根据E0基因的序列进行同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树。利用DNAstar预测E0蛋白的抗原表位。【结果】本研究表达的E0蛋白大小与预期结果相符且该蛋白具有良好的抗原性。通过对E0基因序列的同源性分析以及构建E0基因系统发育进化树,说明牛病毒性腹泻病毒GSTZ株基因型可能属于牛病毒性腹泻病毒-1a亚型,也可能是其他基因亚型发生较大突变产生变异。通过预测E0蛋白B细胞的抗原表位主要位于:7-12、22-26、62-63、94-97、101-105、115-119、127-128、138-140、185-187、215-219位氨基酸残基; T细胞潜在优势抗原区域主要位于:10-14、19-31、36-43、52-58、77-86、96-98、137-140、148-150、167-191、209-211位氨基酸残基。【结论】E0蛋白具有良好的抗原性,通过对抗原表位预测以及对GSTZ进行基因分型,为后续基因工程疫苗和BVDV检测试剂盒的开发提供了理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨宁宁 徐明国 张江伟 易继海 陈创夫
为了探讨牛病毒性腹泻病毒(BVDV)非结构蛋白NS3(P80),并获得具有较高免疫原性的NS3重组蛋白，利用生物信息学研究方法对NS3蛋白氨基酸进行序列分析；经PCR技术扩增NS3基因序列；通过无缝克隆技术构建pET-22b(+)-NS3重组表达质粒，将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，诱导其表达NS3重组蛋白并提纯；通过Western Blotting方法检测其反应原性；将获得的较高纯度的NS3重组蛋白免疫BABL/c小鼠，收集血清，ELISA方法分别检测血清中IgG、IgG1和IgG2a抗体水平；最后通过病毒中和试验检测其中和病毒的能力。结果表明：NS3蛋白氨基酸序列中无信号肽和跨膜区，二级结构主要以无规则卷曲为主，且NS3氨基酸序列中含有优势抗原表位；利用PCR和无缝克隆技术成功构建了pET-22b(+)-NS3重组表达载体，经诱导表达获得了较高纯度的NS3重组蛋白，大小约为75 ku,与理论大小相符；Western Blotting结果表明，NS3重组蛋白具有较高的反应原性；ELISA检测NS3重组蛋白免疫后的小鼠能够产生高水平的IgG、IgG1和IgG2a抗体，结果显示，免疫组小鼠产生的抗体水平极显著高于PBS阴性对照组(P<0.01);血清中和抗体水平也极显著高于PBS阴性对照组(P<0.01)。总之，成功获得了纯度高且具有免疫原性的NS3重组蛋白。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
董世娟 朱于敏 于瑞嵩 司伏生 石明明 张源淑 李震
从浙江地区分离的2株代表性样品与全国范围内流行的参考毒株进行比对和遗传进化分析,结果分为4个组,代表性样品与大部分国内的毒株落入G4-2组,与国内早期CH-S毒株核苷酸(氨基酸)同源性为98.4%~98.5%(99.1%~99.6%);以华南地区为主的2011-2012年分离的毒株自成一组,与中国其他地区的毒株的同源性为95.0%~97.2%,与其余3组比较有9个核苷酸的变异。遗传进化分析表明所分离毒株与大部分中国的流行毒株属于一个基因型;以2011-2012年中国华南地区为主的毒株成为PEDV的一个新的基因型;提示2011-2012年中国流行着2种PEDV的基因型。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
孔梓安 宋想胜 程如楠 甄思慧 吴竹青 吴清民 王真
为筛选牛病毒性腹泻-黏膜病病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）gP48蛋白的单链抗体，本研究利用噬菌体展示技术构建了gP48蛋白单链抗体克隆文库，通过微孔筛选法对抗体库进行3轮富集淘筛，利用ELISA技术测定单链抗体的亲和力，对亲和力较高的克隆进行基因测序分析和结合活性测定，旨在获得gP48蛋白的单链抗体。结果表明：1）成功构建了库容量为4.3×107的噬菌体单链抗体库，其重组率为83.3%，经三轮筛选对噬菌体抗体库进行富集，富集倍数为1.43×104;2）优化了间接ELISA方法，筛选到3株与BVDV gP48蛋白具有高亲和力的单链抗体以及其基因序列，通过IgBLAST分析显示，3株单链抗体均为鼠源IgG。综上，从gP48蛋白的单链抗体库中筛选获得3个具有高亲和力的单链抗体，可用于后续BVDV检测方法的建立。
[期刊] 世界农业
[作者]
猪流行性腹泻病毒已经成为猪肉产业最近需要面对的一个主要问题。加拿大的Doug MacDougald博士已经开始研究该病毒的预防。根据2014年Banff猪肉研讨会上一名加拿大兽医的发言,美国母猪30%~40%已经感染猪流行性腹泻病毒(PED)。在这名兽医发言后,加拿大报道了在安大略省一个母猪存栏500头的育肥猪场中发现
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高君恺 刘浩飞 杨倩
猪流行性腹泻是一种急性、接触性、高度传染性消化道疾病,近年来给我国养猪业带来巨大经济损失。本文就近年来国内外对猪流行性腹泻病毒的研究进展(包括猪流行性腹泻病毒的结构蛋白和非结构蛋白、病毒的细胞培养特点、病毒感染的宿主受体、遗传变异和疫苗的开发等)进行综述,以期为猪流行性腹泻的预防和控制提供帮助。
[期刊] 世界农业
[作者]
葛林 杨莉 孙研
牛病毒性腹泻严重危害养殖业生产安全。相对于其他很多动物传染病,该病更加难防难治。欧洲国家已成功净化了该病,研究和借鉴其成功经验,有利于中国更好地开展牛病毒性腹泻等动物疫病的防治工作。
关键词：
欧洲 动物疫病防治 牛病毒性腹泻
[期刊] 世界农业
[作者]
葛林 杨莉 孙研
牛病毒性腹泻严重危害养殖业生产安全。相对于其他很多动物传染病,该病更加难防难治。欧洲国家已成功净化了该病,研究和借鉴其成功经验,有利于中国更好地开展牛病毒性腹泻等动物疫病的防治工作。
关键词：
欧洲 动物疫病防治 牛病毒性腹泻
[期刊] 华北农学报
[作者]
于晓明 陈瑾 侯立婷 吴楠 侯继波 郑其升
２０１１年江苏泰兴某些猪场相继发生了以腹泻为主要症状的疾病，造成大量哺乳仔猪甚至育肥猪发生死亡。对采集腹泻病料进行病毒的分离鉴定及毒力分析。首先用特异性引物对采集的病料样品进行常见猪病的ＰＣＲ或ＲＴ－ＰＣＲ检测，并处理病料组织进行电镜观察；腹泻病毒经１日龄未吃初乳的仔猪进行猪体复归试验，再次收取病料并进行病毒纯净性检测；最后测定了腹泻组织毒对５，１５，２５日龄仔猪的致病性，及对２５日龄仔猪的半数致死量。结果表明：ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ鉴定结果腹泻猪为猪流行性腹泻病毒感染所致，在组织中没有其他常见猪传染病病原的存在；电镜观察呈典型的ＰＥＤＶ冠状形态；以特异性引物扩增Ｓ１基因，分析测序结果并进行基因．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
施标 董世娟 朱于敏 于瑞嵩 李震
2010—2011年中国境内的猪流行性腹泻(PED)大流行给养猪业造成重大经济损失。因疫苗免疫无法控制疫病流行,因此学者普遍认为猪流行性腹泻病毒(PEDV)出现了新的变种。论文综合分析了这个时期国内学者PEDV分子流行病学的研究结果,又对国内新近分离的PEDV的11个毒株的全基因序列进行遗传进化分析,进一步确定了国内暴发流行的PEDV毒株已远离中国86年分离的毒株和欧洲毒株CV777,成为了一个新的基因型。毒株基因变异应该是造成免疫失败和仔猪死亡率高的主要原因。进一步分析发现分离毒株的全长基因序列和棘突蛋白(S)基因序列长度有差异,其他基因长度保守性强。S基因的变异率高于其他基因,特别是短期内...
关键词：
猪流行性腹泻 病毒 分子流行病学
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴美洲 陈芳洲 李中华 万胜锋 叶十一 何启盖
为研究猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）变异株特性，通过细胞培养、细胞病变（ＣＰＥ）观察、ＲＴ－ＰＣＲ、间接免疫荧光实验和透射电镜观察分离鉴定１株ＰＥＤＶ变异株（ＣＨ／ＹＮＫＭ－８／２０１３株）并分析了全基因组序列。运用基因组分段扩增方法，测得该毒株的全基因组序列（ＧＥＮＢａＮＫ登录号为ＫＦ７６１６７５．１）。该毒株Ｓ基因Ｎ端比ＣＶ７７７毒株Ｓ基因的Ｎ端长９ＢＰ，包括１５ＢＰ的插入和６ＢＰ的缺失，表明ＣＨ／ＹＮＫＭ－８／２０１３为变异毒株。同源性分析显示，该毒株的基因组序列与我国广东２０１１年分离毒株ＬＣ的同源关系最近，相似性为９９．６％，与韩国毒株ＫＮＵ－１３０５和美国毒株ＵＳａ／ＭｉＮＮＥＳｏＴ．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘梦茜 李春燕 陈仕怡 袁晓琴 星东 王全溪
本试验设计了M基因的特异性引物,扩增了M基因,成功构建了重组质粒,并转化至Escherichia coli BL21(DE3)感受态细胞中,优化了异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达条件.结果表明,重组表达的融合蛋白Pet-32a-M大小约为43 ku,与预期大小相符.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表明,M蛋白为包涵体蛋白,且在IPTG浓度为0.8 mmol·L-1,温度为37℃,诱导时间为8 h的条件下,蛋白表达效果最佳.蛋白免疫印迹检测结果进一步显示,重组蛋白Pe
关键词：
猪流行性腹泻病毒 M蛋白 原核表达
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