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[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡敏 徐凌飞 张军科 仇宗浩 丁勤 张静
【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDS-PAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1h,选用长17cm、pH 4～7的IPG胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100V30min、180V 6h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。
关键词：
梨 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈香玲 任惠 黄章保 苏伟强 刘业强 李果果 刘要鑫 王小媚
为建立一套适用于鉴别＂四季芒＂成花蛋白表达差异的双向电泳方法，摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以＂四季芒＂芒果叶片为材料，采用ＴＣＡ－丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等３种芒果叶片蛋白提取方法，进行ＳＤＳＰＡＧＥ和双向电泳，比较这些方法的提取效果。结果表明，改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高ＴＣＡ－丙酮法蛋白提取质量。提取液Ｐ Ｈ能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、２－ＤＥ凝胶蛋白点数量和分布。Ｐ Ｈ ８．５提取液所提蛋白获得最多的２－ＤＥ蛋白点，但在小分子区域蛋白分辨率比Ｐ Ｈ９．０提取液所提蛋白低．．．
关键词：
芒果 蛋白提取 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林梓浩 李玉红 董从娟 陈鹏
【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系,为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种"长春密刺"幼苗叶片为材料,比较2种不同提取介质(CaCl2和LiCl溶液)对细胞壁蛋白的提取效果,对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0.2mol/L CaCl2和3mol/L LiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白,选用17cm pH 3~10NL IPG胶条和裂解液Ⅱ(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、40g/L CHAPS、10g/L DTT和1mmol/L PMSF),上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
马松亚 蒋维昕 屈林丰 曹雪宁 谭玲 杨梅
为了建立适用于桉树叶片蛋白质组研究的双向电泳体系，以尾叶桉Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｕｒｏｐｈｙｌｌａｓ广林４号无性系作为试验材料，对蛋白质样品获取方法、双向电泳等电聚焦胶条ｐ ｈ范围、蛋白质上样量、胶条平衡条件以及染色方法进行了优化。结果表明：提取液＋酚抽提法最适合桉树叶蛋白质的提取，电泳图谱可检测到８５０个蛋白质点。７ ｍｏｌ／ｌ尿素＋２ ｍｏｌ／ｌ硫脲＋４％ｃｈａｐｓ＋６０ ｍｍｏｌ Ｄｔｔ １０μｌ的蛋白质干粉裂解液，裂解效果较好；使用５０ ｍｇ蛋白质干粉和６００μｌ裂解液所获得的蛋白质浓度较高，为３．９７μｇ／μｌ。使用ｐ ｈ４～７、２４ ｃｍ Ｉｐｇ胶条，蛋白质上样量为１ ２００μｇ，．．．
关键词：
桉树 叶片 蛋白质组 无性系 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苏源 余萍 孔垂思 蔡翌阳 杨静 刘林 李成云
利用改进的三氯乙酸/丙酮法对5叶期玉米根、茎、叶的总蛋白质进行双向电泳获得了高分辨率的电泳图谱。在等电点4～7范围内,根、茎、叶电泳图谱上的蛋白质点数分别为1100±89、1275±72和1327±98个。3个器官蛋白质点的分布在分子量25～75 kD和等电点5～6的范围内相对集中。通过优化样品的清洗程序结合对蛋白质在丙酮水化液中的2次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于玉米幼苗的根、茎、叶总蛋白质双向电泳的试验研究。
关键词：
玉米 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
范吉星 邓用川 黄惜 林栖凤 罗越华
分别采用TCA-丙酮沉淀法、酚法、尿素法、周涵韬法和笔者建立的酚改良法,提取红海榄根部总蛋白质,并进行了SDS-PAGE分析和双向电泳体系的优化.结果表明,酚改良法提取红海榄根部总蛋白质的纯度最高,质量最好,为建立双向电泳分析体系提供了较为理想的蛋白样品,获得了良好的双向电泳图谱.该结果为盐生植物,尤其是盐生木本植物,建立了一套可靠的蛋白提取和双向电泳方法.
关键词：
红海榄 蛋白质 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
王曼 刘连涛 孙红春 张永江 宋世佳 陈静 成国鹏 李存东
对棉花根系蛋白的双向电泳提取技术进行改良，以获得更好的分离效果，为棉花根系蛋白质组学研究奠定基础。以鲁棉研２８为材料，分别采用ＴＣＡ／丙酮法、改良ＴＣＡ／丙酮／ＳＤＳ法、饱和酚－甲醇醋酸铵法这３种根系蛋白质提取方法，提取棉花幼苗根系总蛋白，并进行双向电泳进行蛋白质分离。在蛋白质含量、蛋白纯度和电泳图谱等方面对３种方法进行比较。利用饱和酚－甲醇醋酸铵提取法提取的棉花根系蛋白，其蛋白样品纯度高，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳图谱清晰，蛋白点数量最多为６０１个点；ＴＣＡ／丙酮法提取得到的蛋白总量最高约为７．５３ ｍＧ／Ｇ，但样品纯度低，ＳＤＳＰＡＧＥ电泳图谱模糊，蛋白点数量最少为４１７个点。采用考马斯亮蓝染色．．．
[期刊] 林业科学研究
[作者]
索慧英 郑密 卢晗 曲冠证 李莹
[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4～7内,选用24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。
关键词：
小黑杨 蛋白质 双向电泳 优化
[期刊] 经济问题探索
[作者]
章玉婷 周德群 周晓罡 苏源
以马铃薯宁蒗182叶片为试验材料,研究其叶片蛋白质提取方法及不同的蛋白质样品电泳上样量和IPG胶条pI范围对双向电泳图谱的影响。结果表明:采用改进的三氯乙酸(TCA)/丙酮法,上样量为600μg,采用pI 4-7、24 cm的IPG胶条可获得高分辨率的电泳图谱。在等电点4-7范围内,马铃薯宁蒗182叶片电泳图谱上的蛋白质点数为1055±95个。叶片蛋白质点的分布在分子量25-75 kD和等电点5-6的范围内相对集中。通过加强对样品的清洗结合丙酮对蛋白质在水化液中的二次沉淀能够较好地除去样品中的杂质而保证电泳质量。优化后的方法可用于马铃薯叶片总蛋白质双向电泳的试验研究,并为进一步利用基因工程技术...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
范海延 陈捷 张春宇 郭海 林英
为建立适于黄瓜叶片蛋白质组分析的双向电泳方法,对黄瓜叶片蛋白提取方法、裂解缓冲液、等电聚焦(IEF)参数进行研究。结果表明:丙酮法或三氯乙酸/丙酮法提取黄瓜蛋白质较好,2-DE图谱中蛋白点较多;裂解缓冲液为9.5mol·L-1尿素,2mol·L-1硫脲,1%二硫苏糖醇(DTT),2mmol·L-1三丁基磷(TBP),4%3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐(CHAPS),0.2%两性电解质,0.002%溴酚蓝,0.25%吐温20,10%异丙醇,5%甘油,10mmol.L-1苯甲基磺酰氟(PMSF)时,电泳图谱效果最好;IEF等电聚焦条件为25000Vh时,2-DE图谱蛋白点多且清晰。
关键词：
蛋白质组 双向电泳 黄瓜
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李佳 陆秀君 梅梅 孙晓梅 张晓林
［目的］探索一套适用于银杏种胚蛋白的双向电泳体系，为研究银杏种胚在不同发育阶段的表达差异蛋白提供基础。［方法］分别从蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ法、Ｔｒｉｚｏｌ提取法和ＴＣＡ－丙酮－酚法）、裂解液中的尿素浓度（６ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、７ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、８ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、９ ｍｏｌ·ｌ～（－１））蛋白上样量（１ ５００μｇ、１ ６５０μｇ、１ ８００μｇ）和分离胶浓度（１０％、１２．５％、１５％）四个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行分析，筛选出适宜双向电泳的条件。［结果］采用ＴＣＡ－丙酮－酚法提取银杏种胚蛋白，在裂解液中尿素浓度为８ ｍｏｌ·ｌ～（－１．．．
关键词：
银杏 种胚 蛋白质 双向电泳
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈慧洁 郭朦朦 冯丽贞 林燕萍 许诺 邹霖湘
对桉树(Eucalyptus spp.)叶片蛋白质的提取方法、溶解方法、溶解条件和上样量进行了优化.结果表明,TCA/丙酮沉淀/苯酚抽提法是桉树叶片蛋白质样品制备的最优方法;裂解缓冲液Ⅰ(7 mol·L-1尿素+2 mol·L-1硫脲+0.04 g·m L-1CHAPS+60 mmol·L-1DTT+0.5%(体积分数)IPG Buffer)可保证蛋白质样品的溶解,较适用于桉树叶片蛋白裂解;对于18 cm、p H 4-7的线性胶条,当每根胶条上样量为50μg时,采用银染可得到质量较高的2-DE图谱.
关键词：
桉树 叶片 双向电泳 优化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐湛宁 李福贵 陈杰 蒋霞云 邹曙明
为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景
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