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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郝凤奇 李景梅 杨洲红
【目的】制备抗肠致病性大肠杆菌(EPEC)的重组嗜酸乳酸杆菌,并初步探索其免疫效果。【方法】采用DNAStar软件选取EPEC E2348/69的eae全基因中抗原性较高的984bp片段(编码328个氨基酸残基,命名为eae Int328)为目标序列,以EPEC E2348/69基因组为模板,PCR扩增eae Int328基因,构建重组表达载体pSIP409-eae Int328,电转化法获得相应的重组嗜酸乳酸杆菌,采用SppIP诱导重组菌表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白。以BALB/c雌性小鼠为受试动物,灌胃重组嗜酸乳酸杆菌15d后,再灌胃EPEC,第21天...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
谢应国 吴秀芳 武素琴 王希良 何维明
扩增了炭疽芽孢杆菌PA基因,构建了原核表达质粒pET-28a-PA,并对其进行了诱导表达,对表达产物免疫原性和免疫保护效果进行了研究。结果表明,PA基因的长度约为2 205 bp,PA蛋白的相对分子质量为83 ku;rPA蛋白具有良好的免疫原性,初免后10 d即可检测到特异性抗体,第3次免疫后抗体水平明显升高,可达1∶12 800;rPA蛋白刺激小鼠产生的特异性抗体亚型以IgG 1为主;rPA蛋白在体外对小鼠脾脏细胞有促进生长和增殖作用。rPA免疫组小鼠脾脏中CD4+细胞显著增加,免疫应答趋向T h2型反应,说明rPA介导的免疫反应以体液免疫为主。rPA具有一定的免疫保护作用,保护率达到50%...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨凤娟 曾祥芳 谯仕彦
目的罗伊氏乳酸杆菌是普遍存在于人和动物肠道的有益乳酸杆菌,研究表明,口服罗伊氏乳酸杆菌能显著降低腹泻的发病率和严重程度。研究罗伊氏乳酸杆菌I5007(Lactobacillus reuteri I5007)对新生仔猪肠绒毛发育和肠黏膜屏障功能的影响。方法试验选取9窝1日龄的杜×长×大初生仔猪,每窝挑选8头体重相近、出生状况良好的仔猪,按体重分为3组,每组3窝仔猪。即:对照组(灌服0.1%无菌蛋白胨溶液),前4日龄灌服组(1-4 d,每日每头灌服活菌总数为1.2×1010 CFU的L.reuteri I5007)和隔4日龄灌服组(1、5、9、13、17和21 d灌服,灌服剂量同前4日龄灌服组)。...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢乐新 李淼 宋帅 岳磊 杨冬霞 李春玲
为获得副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的分段表达产物,并对各片段的免疫学性质进行鉴定。采用生物信息学软件分析Omp P5全长基因,设计3对分段引物,PCR分别从HPS汕头分离株(H0801)Omp P5中扩增出P5F1、P5F2和P5F3基因片段,构建于pET-32a(+)原核表达载体上,并将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE分析蛋白表达情况。将蛋白纯化后,利用ELISA及Western Blot分别鉴定其免疫原性及抗原性。结果表明,扩增得到的Omp P5的3个基因片段与预期大小相符合,基因测序结果与GenBank公布的序列一致,经SDS-PAGE分析,3...
关键词：
副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P5 抗原性分析
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张欣萍 王金洛 秦泽荣 陈键 宋维平 赖平安
本文对肉鸡饲喂嗜酸乳酸杆菌时,鸡的体重及免疫器官及功能的影响进行了研究。结果表明:饲喂嗜酸乳酸杆菌可以提高鸡的体重,增加胸腺、法氏囊、脾脏的重量及淋巴细胞的 E-玫瑰花环率。
关键词：
嗜酸性乳酸杆菌 免疫功能 肉鸡
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘朋 徐宏军 王麒文 王永恒 董婷婷 杨倩
[目的]通过给母猪口服表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组枯草芽胞杆菌以评估其产生的乳源性免疫力,从而为仔猪提供相应的保护。[方法]分别给母猪口服2 mL重组枯草芽胞杆菌(1×10~9 CFU·mL~(-1))和肌肉注射2 mL灭活PEDV疫苗(1×10~7 TCID_(50)·mL~(-1)),产后1 d收集相应的样品。首先检测了乳汁中特异性SIgA及乳汁细胞中特异性IgA,然后对口腔和鼻腔分泌物中特异性SIgA和细胞因子(INF-γ和TGF-α)的水平进行了检测;最后评估乳汁中的中和抗体滴度。[结果]口服重组枯草芽胞杆菌后乳汁中SIgA及其乳汁细胞中IgA特异性抗体水平显著提高(P<0.05,P<0.01),同时乳汁及其乳汁细胞中INF-γ和TGF-α的水平也显著提高(P<0.05,P<0.01);鼻腔和口腔分泌物中特异性SIgA显著增加(P<0.05,P
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈立圳 王全溪 向思琳 高玉云 许丽惠 王长康
对乳酸菌素plnJ-K基因序列进行优化,利用基因串联表达技术构建重组串联表达载体pET-32a-pln-J-K,并将pET-32a-pln-J-K转化到大肠杆菌BL21中;对温度、时间、IPTG浓度等诱导条件进行优化,并与优化前的表达量进行对比.SDS-PAGE检测结果表明,在IPTG浓度为0.6 mmol·L~(-1),温度为37℃,时间为12 h的诱导条件下,目的蛋白的表达量最多.蛋白质印迹法鉴定结果表明,目的蛋白被正确表达.
关键词：
乳酸菌 乳酸菌素 重组串联表达
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
杨大伟 周裔彬 刘云国 雷质文 陈俊芳 王建广 李正义
采用多聚酶链式反应结合变性高效液相色谱技术建立了发酵乳酸杆菌的快速检测方法。以编码发酵乳酸杆菌Lactobacillus fermentum延伸因子(EF-Tu)基因为靶基因设计引物,优化PCR体系,以加氏乳酸杆菌等26株试验菌株做特异性检测;并将标准菌株稀释成不同梯度,做灵敏度检测。试验结果表明,该方法有很好的特异性,且灵敏度高,检测限可达到100CFU/ml。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
沈雪娇 易丹 倪学勤 曾东 雷明霞 卞正容
为研究乳酸杆菌和囊素三肽对肉鸡生产性能、血清生化指标及免疫功能的影响,采用日粮中添加乳酸杆菌和肌肉注射囊素三肽的方法,将156只1日龄肉鸡随机分为4个组,Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为囊素三肽组,Ⅲ组为乳酸杆菌组,Ⅳ组为囊素三肽+乳酸杆菌组,试验期为42d。结果显示:1)21日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著增加了肉鸡平均日增重,降低了料重比(P<0.05);2)42日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著降低了血清甘油三酯浓度(P<0.05);3)42日龄,乳酸杆菌和囊素三肽显著促进外周血T淋巴细胞增值转化(P<0.05),囊素三肽的注射显著提高了饲喂添加乳酸杆菌日粮的肉鸡血清总免疫球蛋白G含量(P<0.05)。综上所...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
石径 许倩 罗永康
通过测定６株不同乳酸杆菌菌种的产蛋白酶特性，筛选酶活力较高的菌株。利用乳酸杆菌粗提酶液３７℃下对脱脂乳进行酶解，并采用间接竞争酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）法测定酶解脱脂乳中α－乳白蛋白（α－ＬＡ）、β－乳球蛋白（β－ＬＧ）、α－酪蛋白（α－ＣＮ）和β－酪蛋白（β－ＣＮ）４种乳蛋白的抗原性与过敏原性，从而探讨乳酸杆菌所产酶液对脱脂乳的酶解作用以及对乳蛋白抗原性及过敏原性的影响。结果表明：副干酪乳杆菌Ｈ９和植物乳杆菌Ｐ８菌株的蛋白酶活力较高，２株菌种所产酶液在对脱脂乳进行酶解的过程中，水解度逐渐增大，乳蛋白的抗原性及过敏原性在酶解过程中都缓慢降低，α－ＬＡ和β－ＬＧ抗原性在酶解后期略有上升，不同．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马世杰 李坤 付朋飞 郭晓庆 高晓云 崔保安 陈红英
【目的】构建能够稳定表达猪α-干扰素(IFN-α)成熟蛋白的重组干酪乳酸杆菌(Lactobacillus casei CECT5276),为将其作为口服疫苗来提高动物机体免疫力奠定基础。【方法】从质粒pMD18-IFN-α扩增出猪IFN-α成熟蛋白基因,再将其定向克隆到干酪乳酸杆菌整合型表达载体pMJ67的lac启动子下游,得到重组质粒pMJ67-IFN-α,电穿孔转化干酪乳酸杆菌。抽提干酪乳酸杆菌基因组DNA,进行PCR扩增及测序鉴定。采用半定量RTPCR检测猪IFN-αmRNA在干酪乳酸杆菌中的转录水平;采用Western blot对重组干酪乳酸杆菌菌体进行分析,检测其表达产物的活性;用双...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘韬 陈德芳 段靖 王二龙 王亚军 汪开毓
为检测斑点叉尾鮰源海豚链球菌兼职蛋白(fructose-1,6-bisphosphate aldolases,FBA)的抗原性和潜在的疫苗价值,本实验克隆得到斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09(基因组登陆号LXQF01)的fba基因序列(基因登录号A7N10_RS06935),对克隆序列进行生物信息学分析,并通过原核表达得到重组FBA蛋白(r FBA),制备了兔抗r FBA血清用于FBA蛋白抗原性检测,同时通过免疫保护实验评估重组蛋白的免疫保护效果。结果显示,海豚链球菌DX09 fba基因有1个882 bp的开放阅读框(ORF),编码293个氨基酸。生物信息学分析显示,其分子式为C_(1378)H_(2172)N_(368)O_(422)S_8,分子质量为30.9 ku,理论等电点为5.01,不具有信号肽和跨膜区域;具有保守的裂解酶结构域,且与其他来源的FBA蛋白同源性达100%;具有较高的抗原指数,表明其可形成多个抗原表位。SDS-PAGE检测发现,诱导表达的重组蛋白以包涵体的形式出现在沉淀中,大小约为47 ku。Western blot分析表明,兔抗r FBA血清能特异性结合菌体蛋白。同时免疫保护实验显示,重组蛋白对斑点叉尾鮰的相对保护率可达55%,免疫后鱼体抗体水平相对对照组显著升高。本研究表明,原核表达的斑点叉尾鮰源海豚链球菌DX09 rFBA具备较好的抗原性和免疫保护作用,具有研发斑点叉尾鮰海豚链球菌亚单位疫苗的潜在价值。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘佳琪 高帅 段可馨 郭梦婷 杜航 康海燕 张英 唐立杰 李一经 刘敏
为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗粒饲料,口服免疫虹鳟幼鱼。免疫程序分为连续免疫组、免疫1 d后间隔1 d再免疫1 d组、连续免疫4 d后32 d加强免疫1次组和间隔免疫后32 d加强免疫1次组。免疫后进行尾动脉采血,间接ELISA方法检测各组血清抗体效价,免疫接种66 d后,腹腔注射IP
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高雪 朱立麒 栗云云 吴海琴 朱怡蕾 庾庆华
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郝凤奇 李景梅 李成玉 杨桂连
【目的】比较嗜酸乳酸杆菌(Lactobacillus acidophilus)和植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum)肠道黏膜免疫调节作用的差异。【方法】以C57BL/6小鼠为受试动物,分别灌胃嗜酸乳酸杆菌和植物乳酸杆菌7d后取材,采用流式细胞术、ELISA等方法,对脾脏和肠系膜淋巴结中T细胞亚群、结肠PP结中TLR2+和TLR4+细胞、结肠组织中IFN-γ和IL-4水平及小肠sIgA水平进行检测,明确2种乳酸杆菌对肠道黏膜的免疫调节作用。【结果】2种乳酸杆菌对小鼠体质量无显著影响。2种乳酸杆菌均可显著提高小鼠肠系膜淋巴结中CD3+CD4+和CD3+CD8+T细胞比例,...
关键词：
嗜酸乳酸杆菌 植物乳酸杆菌 肠道黏膜免疫
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