- 年份
- 2024(2913)
- 2023(4148)
- 2022(3457)
- 2021(3144)
- 2020(2849)
- 2019(6302)
- 2018(6216)
- 2017(11243)
- 2016(6685)
- 2015(7501)
- 2014(7255)
- 2013(7321)
- 2012(7021)
- 2011(6471)
- 2010(6418)
- 2009(5739)
- 2008(5691)
- 2007(5205)
- 2006(4662)
- 2005(4321)
- 学科
- 济(22635)
- 经济(22602)
- 管理(14869)
- 业(13770)
- 方法(11051)
- 企(10941)
- 企业(10941)
- 学(9846)
- 数学(9746)
- 数学方法(9605)
- 财(6848)
- 中国(6700)
- 农(5798)
- 制(5286)
- 业经(4349)
- 地方(4189)
- 贸(4130)
- 贸易(4127)
- 易(4021)
- 银(4019)
- 融(3973)
- 金融(3969)
- 农业(3956)
- 银行(3955)
- 环境(3928)
- 体(3789)
- 行(3749)
- 及其(3688)
- 务(3611)
- 财务(3607)
- 机构
- 大学(98167)
- 学院(94882)
- 研究(43045)
- 农(33951)
- 科学(33637)
- 济(31954)
- 经济(31225)
- 中国(30367)
- 农业(27751)
- 管理(26515)
- 所(26147)
- 研究所(24270)
- 业大(24143)
- 京(22983)
- 理学(22470)
- 理学院(22023)
- 管理学(21168)
- 管理学院(21030)
- 中心(18657)
- 室(17784)
- 农业大学(17711)
- 省(17637)
- 实验(16390)
- 江(16156)
- 实验室(15849)
- 业(15838)
- 院(15466)
- 财(15395)
- 重点(14996)
- 科学院(14782)
- 基金
- 项目(70018)
- 科学(51813)
- 基金(50377)
- 家(49907)
- 国家(49571)
- 科学基金(38879)
- 研究(38685)
- 自然(30003)
- 自然科(29297)
- 自然科学(29281)
- 自然科学基金(28764)
- 省(28457)
- 基金项目(25870)
- 划(25459)
- 资助(21857)
- 社会(21852)
- 社会科(20606)
- 社会科学(20597)
- 计划(18787)
- 科技(18141)
- 教育(17814)
- 重点(17179)
- 发(15108)
- 科研(15046)
- 专项(14425)
- 部(14198)
- 创(14137)
- 业(13985)
- 农(13836)
- 创新(13486)
共检索到151160条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘新琼 颜华 王德彬
为建立表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株,将笔者所在实验室构建的表达含前S基因乙肝病毒表面抗原(HBsAg)的真核表达质粒共转染CHO/dhfr-细胞,通过筛选,获得可表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的重组CHO细胞,然后进行亚克隆,用氨甲喋呤(MTX)加压选择,以ELISA法检测目的蛋白表达量,筛选获得稳定表达目的蛋白的细胞株,并对其进行特性鉴定。最终获得了C10和A10两株稳定高表达含前S基因乙肝病毒表面抗原的细胞株。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
马英 林顺权 高毅 张军 吕柳新 夏宁邵
将乙肝病毒表面抗原 (HBs Ag)基因与 Ca MV3 5 s启动子及 nos终止子构建植物表达载体 p1 3 0 1 HBs,直接法转入根癌农杆菌 EHA1 0 5 (Agrobacterium tumefaciens) ,以该菌株介导叶盘法转化番茄 ,得到抗潮霉素的再生植株 .抗性苗总 DNA经 PCR、Southern斑点杂交证实目的基因已整合到番茄基因组中 ,EILSA检测证明在番茄中正确表达了乙肝表面抗原蛋白 .
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 杜念兴 李光地 汪垣
将生长抑素(ss)与乙肝表面抗原(HBsAg)融合基因(ss/HBs)克隆到痘苗病毒表达质粒pGJP-5中,通过与痘苗病毒天坛株体内重组和蚀斑挑选技术获得融合基因的重组病毒,它保持痘苗病毒原有的感染性,并能表达出 ss 和 HBsAg 产物.表达产物呈表面带 ss 决定簇的 HBsAg 杂合颗粒,并分泌到感染细胞之培养液中.杂合颗粒的大小和密度与报道的 HBsAg 颗粒相似。本文还对该重组痘苗病毒可能作为 ss 活载体苗的前景进行了讨论。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 杜念兴 李光地 汪垣
为了将生长抑索(Somatostatin,ss)基因融合到乙肝表面抗原(HBsAg 或 HBs)基因 C 末端 Acc Ⅰ 位点(aa223位置),先将质粒 pWR13-HBs/4的多接头区 Sal Ⅰ位点消除,因为它也可被 AccⅠ酶切。在AccⅠ位点加入 Bgl Ⅱ接头,用 Sac Ⅰ和 Bg Ⅱ切下 HBs 基因片段(700bp),并将其插入到 pUC12-ss/2中 ss 基因N 末端 Sac Ⅰ和 BamH Ⅰ位置.获得基因融合体质粒 pUC12-ss/HBs。经 DNA 序列分析,两基因融合处的阅读框架正确,且 HBs 基因的起始密码 ATG 和 ss 基因全序列都得以证实.
关键词：
生长抑素 乙肝表面抗原 基因融合
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
凌雯 龚晓明 杨震 杜念兴
应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对畜型和禽型两个融合基因ＨＢｓＡｇ／ＬＨＲＨ的５′端分别作了改造，切去了融合基因起始密码ＡＴＧ前一段非编码序列６１个碱基，将改造后的融合基因插入ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｅ１１ＫＳ＋质粒中。琼脂糖凝胶电泳以及序列分析均表明改造和克隆成功。将改造后的融合基因克隆到含Ｔ７Ｐｒｏｍｏｔｅｒ强启动子的表达载体ｐＥＴ１５ｂ中，经异丙基硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）诱导，在Ｅ．ｃｏｌｉＤＥ３中表达，表达量占菌体总蛋白的１０％，以兔抗ＬＨＲＨ抗体进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，出现阳性反应带。用抗ＨＢｓＡｇ抗体作ＥＬＩＳＡ检测，结果稀释１×１０－６时仍为阳性反应。
[期刊] 水产学报
[作者]
乌日琴 张培军 徐芃 李军 徐永立
To observe the surface microstructure features by using scanning electron microscope,and study the surface antigen on lymphocytes of Paralichthys oliveaceus by form rosette with sheep red bloods cells and the cross-reactivity by using monoclonal antibody against human CD.Under scanning microscope ...
[期刊] 中国劳动
[作者]
(劳社部发[2007]16号)各省、自治区、直辖市劳动和社会保障厅(局),卫生厅(局):当前,由于公众对乙型病毒性肝炎(以下简称“乙肝”)存在认识上的误区,造成侵害乙肝表面抗原携带者就业
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
谢勇平 李宇翔 张文连 申爱丽 李清禄
将楮头红醇提取物用正丁醇萃取，萃取物经硅胶柱层析和制备型高效液相色谱（ＰＨＰＬＣ）纯化得一纯净物，通过ＩＲ、ＥＳＩ－ＭＳ和１３Ｃ ＮＭＲ谱等分析，鉴定为呋甾烷型甾体皂苷，命名为楮头红皂苷Ａ（ＳＷＳＡ），系首次从楮头红中提取得到．抑菌试验结果表明：ＳＷＳＡ对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、耶尔森氏菌和嗜水气单胞菌均有较好的抑制效果，其最小抑菌浓度分别为２．８、３．３、２．５和２．２ Ｍｇ·Ｍ Ｌ－１；对大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌的抑制效果不明显．通过３－（４，５－二甲基噻唑－２）－２，５－二苯基四氮唑溴盐（ＭＴＴ）试验检测ＳＷＳＡ对ＨＥＰ ｇ２．２．１５细胞的毒性，采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
常向博 廖玉才 李和平
为了建立利用小麦生产禽流感口服疫苗的方法,选择禽流感病毒H5N1亚型表面抗原HA基因,与谷类作物启动子构建小麦表达载体,经基因枪法转入我国小麦栽培品种郑9023幼胚,在含5 mg/L草铵膦愈伤诱导培养基和分化培养基及含4 mg/L草铵膦生根培养基上筛选后,PCR鉴定获得转HA基因植株,Southern杂交分析转基因T1代植株证实,外源HA基因确已整合到小麦基因组中。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张顺川 向骏 程安春 汪铭书 李丽娟 李鑫
【目的】通过选取DEV-UL53基因主要抗原域与进行DEV-UL53截段基因B细胞表位多参数预测相结合的策略,高效表达DEV-UL53截段基因,并通过Westernblot分析重组蛋白的免疫原性。【方法】通过生物信息学软件DNAStarProtean模块对UL53基因编码的gK蛋白进行主要抗原域预测,选取主要抗原域对应的UL53截段基因进行二级结构、蛋白质骨架柔性区域、表面可及性区域预测和在线预测该蛋白的亲水性及跨膜区,并对UL53截段基因进行克隆、亚克隆、原核表达与抗原性分析。【结果】UL53截段基因编码蛋白gK的B细胞表位最可能分布于Ala20—Leu25、Ser40—Met47、Leu6...
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
龚红菲 庞富华 芮莹 韦欧 韦京辰
比较3种抗HBV核苷(酸)类似物(拉米夫定、恩替卡韦、替诺福韦)对HepG 2.2.15细胞的毒性作用和对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA表达的抑制效果。用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测药物的细胞毒性;酶联免疫(ELISA)法检测HBsAg和HBeAg表达水平;PCR-荧光探针法定量检测HBV-DNA含量。结果:在最高浓度200 mg/L时,拉米夫定组存活率为74.72%,恩替卡韦组存活率仅为36.74%,替诺福韦组存活率为95.22%;拉米夫定和替诺福韦对HBsAg、HBeAg表达无明显抑制,恩替卡韦对HBsAg、HBeAg表达有抑制并与其细胞毒性相一致。在第9天,3种药物对HBV-DNA抑制作用明显,在6.25 mg/L浓度时,抑制率均高于90%;3种药物在相同药物浓度下,恩替卡韦对HepG 2.2.15细胞毒性最大,替诺福韦几乎没有细胞毒性,拉米夫定有一定毒性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王彦彬 崔保安 陈红英 王亚宾 张红英 魏战勇
【目的】为获得重组猪干扰素α。【方法】本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码成熟猪干扰素α基因插入供体质粒pFastBacⅠ多克隆位点,置于pH启动子控制下,昆虫可识别的蜂素信号肽(honeybeemelittinsignalpeptide,HBM)取代猪干扰素α原有信号肽以实现分泌型表达,并在C端融合6个组氨酸标签以利于纯化。将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,经抗性和蓝白斑筛选,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒。【结果】重组蛋白通过间接免疫荧光、Western-blot证明重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李润成 余兴龙 白霞 侯强红 罗维 刘忠华 向卫军
通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢冰霞 李斌 秦毅斌 赵武 梁家幸 韦超文 何颖 苏乾莲 梁保忠 李莹莹 姜佳佳 杨盛斌 黄伟坚
对广西猪JEV FC792株的E基因主要抗原域Ⅰ、Ⅱ基因(Ea基因)进行原核表达及抗原性鉴定,为猪流行性乙型脑炎病毒(JEV)诊断抗原和基因工程疫苗的研制奠定基础。结果:成功构建广西猪JEV FC792株Ea基因的克隆重组质粒pMD18-T-Ea及表达重组质粒pET32a-Ea,经SDS-PAGE及Western blot鉴定表明,JEV FC792株Ea蛋白在Rosetta(DE3)菌中成功进行融合表达,表达出约58 KDa的融合蛋白;经抗原性鉴定表明,表达的融合蛋白Ea能与猪JEV阳性血清抗体发生特异性反应,融合蛋白Ea具有良好的JEV抗原性。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
闫瑞杰 张云飞 刘玲玲 张红垒 王亚宾 胡慧
【目的】制备猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白及其多克隆抗体,建立检测PDCoV N蛋白抗体的间接ELISA方法。【方法】从PDCoV CH-01毒株中扩增N全基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-PDCoV-N,转入BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组N蛋白,并对该蛋白的反应原性进行鉴定。诱导表达的N蛋白经镍柱纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。同时用镍柱纯化后的N蛋白作为包被抗原,建立PDCoV的间接ELISA检测方法,对该方法的特异性、重复性和稳定性进行检测,并利用该方法对河南部分地区猪场送检的165份临床猪血清样本进行PDCoV抗体检测。【结果】成功克隆了1 026 bp的N基因,构建了重组表达载体pET-28a-PDCoV-N,经诱导表达后获得了重组N蛋白,其相对分子质量约42.9 ku,Western blot分析表明所表达的蛋白可与抗PDCoV全病毒猪阳性血清发生反应。制备的PDCoV N蛋白多克隆抗体经Western blot检测表明,该抗体具有特异性;间接免疫荧光试验测定该多克隆抗体在ST细胞上的最佳使用稀释度为1∶200。以N蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法,确定最佳的反应条件如下:抗原2μg/mL在4℃过夜包被,10 g/L BSA在37℃下封闭2 h,血清(1∶80稀释)37℃孵育1 h,酶标二抗(1∶6 000稀释)37℃孵育1 h,TMB在37℃下显色15 min;待检血清OD_(450)值≥0.272判定为阳性。特异性试验结果显示,该包被抗原与其他猪常见病毒的阳性血清均无交叉反应,批内和批间重复试验变异系数均小于5%。用间接ELISA法对来自河南不同地区的165份血清样本进行检测,结果表明各地样本PDCoV抗体阳性率平均为53.94%。【结论】成功表达了PDCoV N蛋白,制备了其多克隆抗体,建立了PDCoV间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,可用于临床猪血清中PDCoV抗体的检测。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
NS1基因主要抗原区的可溶性表达及其Dot-ELISA检测方法的建立
表达鸡白细胞介素18重组禽痘病毒的构建及其表达产物生物学活性的检测
PRRSV N与GP5蛋白抗原表位的串联表达及其间接ELISA检测方法的建立
猪瘟病毒石门株E2基因4个抗原结构域的原核表达
FMDV OA/58病毒株VP1蛋白结构构建与B细胞抗原表位的预测
烟草花叶病毒原核表达外壳蛋白抗体制备及快速检测方法建立
猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
禽戊型肝炎病毒中国分离株ORF3蛋白的真核表达与抗原性分析
传染性胰腺坏死病病毒分离株VP2基因抗原表位区融合表达及免疫特性的分析
FMDV Asia1/HeB病毒株结构蛋白基因的克隆测序及B细胞抗原表位预测
