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[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
杨锦 靳鹏 刘芃 羊健 王洋 戴良英 陈剑平
【目的】中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus, CWMV)是引起小麦黄花叶病的重要病原之一。获得表达CWMV外壳蛋白(coat protein, CP)的转基因烟草Nicotiana benthamiana(OECP)并分析其抗病性,为培育小麦抗病材料奠定工作基础。【方法】利用体外重组DNA技术构建含有CWMV外壳蛋白基因的表达载体,并通过农杆菌介导的转化方法,获得OECP。进一步利用Western Blot和PCR检测明确CWMV的外壳蛋白在OECP中能够正常的表达。【结果】部分转基因阳性植株出现矮化表型。此外,OECP阳性植株接种CWMV后7 d的定量分析表明,OECP中CWMV运动蛋白的表达量显著受到抑制。【结论】在烟草中表达CWMV的CP蛋白基因可显著增强烟草对CWMV的抗病性。图3表1参17
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢训 方琦 尹跃艳 秦西云 丁铭
用RT-PCR从感染烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的烟草样品中克隆该病毒的外壳蛋白基因,病毒外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,构建成重组原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导、Ni+NTA亲和柱纯化获重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备TMV外壳蛋白多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了更简便、经济、特异性更强的DOT-ELISA检测法。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王芳 鄢波 王玲仙 方琦 黄兴奇
从云南弥勒县采集典型病株接种蔓陀萝植斑分离，经免疫电镜（ＩＥＭ）鉴定为ＴＭＶ；在烤烟品种红花大金元上以ＴＭＶ普通株作对照进行致病率测定，确定为强毒株系。以烟草花叶病毒（ＴＭＶ）云南强毒株系ＲＮＡ为模板，根据国外研究结果，自行设计、合成寡核苷酸为引物，通过ＰＴ－ＰＣＲ体外扩增，得到约５００ｂｐ的ＤＮＡ片段，将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α上，并进行了序列分析。分析表明，该其因含４７７个核苷酸，编码１５９个氨基酸，与国外发表的Ｕ１株系比较，核苷酸同源率为９８．１％，氨基酸同源率为９７．５％。获得了云南烟草ＴＭＶ外壳蛋白全基因片段。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张正坤 吴祖建 沈建国 谢联辉 林奇英
从烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)感染的发病烟草叶片中提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到其运动蛋白基因,将扩增产物克隆到pMD18-T载体上.DNA序列分析表明,所得运动蛋白基因全长为807 bp,与已报道的TMV-U1株系核苷酸和氨基酸同源性均为100%.将目的基因亚克隆到原核表达载体pET-29a上,并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导4 h后蛋白表达量达到最大,超声波显示所得融合蛋白以不可溶形式存在.SDS-PAGA检测蛋白表达情况,表达产物与目的蛋白大小一致,割胶免疫注射家兔得到抗体,ELISA测定效价为25600,Western-blot...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
黄晓璪 陈青 薛朝阳 周雪平
从提纯病毒抽提基因组RNA ,并通过RT PCR扩增番茄花叶病毒 (ToMV)移动蛋白 (MP)基因。经克隆测序后插入植物表达载体PBI12 1的 35S启动子下游 ,通过PCR及酶切筛选分别获取正、反向插入的克隆 ,通过三亲交配导入农杆菌 ,叶盘转化法转化普通烟草。卡那霉素筛选获得一系列抗性小苗 ,对其进行PCR检测 ,Southern、Northern点杂交 ,Western blot检测 ,获得能正义、反义表达ToMVMP基因的转基因植株。
关键词：
番茄花叶病毒 移动蛋白 转基因 表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
张宗江 周钟信 刘艳军 江倩云 尤明 刘国民 米景九
借助二元Ｔｉ载体系统，用农杆菌（Ａ．ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）与子叶外植体共培养，进行黄瓜花叶病毒壳蛋白（ＣＭＶｃｐ）基因转化三个辣椒品种的工作。经过抗卡那霉素的筛选和再生培养，得到转基因株。转基因株叶的切片在含卡那霉素的培养基上表现明显的抗性。经过对后代植株的ＤＮＡ和ＲＮＡ分子杂交以及蛋白质ＥＬＩＳＡ检测表明转基因株后代染色体上带有ＣＭＶｃｐ基因，后者在叶片中表达出ＣＭＶｃｐ。经过对表达植株叶面接种ＣＭＶ病毒，表现出明显的抗ＣＭＶ病毒的性能。
关键词：
辣椒,CMV_(cp),基因转化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
乔艳艳 杨翠云 于翠 曹洁 马青 张丽莉
根据烟草环斑病毒外壳蛋白(TRSV-CP)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,获得烟草环斑病毒基因组中编码外壳蛋白部分基因片段,将其插入原核表达载体pET28a中,获得重组表达质粒pET-CP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导蛋白大量表达。重组蛋白经过Ni+-NTA纯化后,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,TRSV-CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子质量约为34 ku,并具有免疫学活性。以纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,多抗血清效价达1∶409 600,可以与重组蛋白发生抗原抗体反应。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张建军 李祥 侯明生
研究了小麦抗病品种SK-4、SN7859和感病品种8201-69、81-5对梭条斑花叶病毒病的抗病性与其抗病毒(WSSMV)和抗传毒介体禾谷多粘菌(Polymyxa graminis Led.)的能力之间的关系。结果表明:小麦品种的抗病性与它们抗病毒的能力一致;与它们抗传毒介体的能力有一定的相关性,但不尽一致。具体表现为抗病品种SK-4抗病毒和抗介体能力均强,SN7859抗病毒能力强,但抗介体能力较弱;感病品种81-5抗病毒能力弱,但抗介体能力较强,而8201-69则抗病毒和抗介体的能力均弱。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王秀敏 吴云锋 成巨龙 张建新 杨栋 罗朝鹏
根据烟草蚀纹病毒(TEV)CP序列设计合成上下游引物,利用RT-PCR方法获得了TEV CP基因,大小为789 bp。将TEV CP基因克隆到pM D 18-T S im p le V ector,经E coRⅠ/S acⅠ双酶切得到目的片段,并将其定向插入到pET 30a载体中构建了原核表达载体pET 30-TEV CP,重组质粒经E coRⅠ和S acⅠ双酶切鉴定及基因测序验证正确后,转化大肠杆菌BL 21,用IPTG进行诱导表达。结果表明,TEV CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,分子量约为37 ku。以表达产物为抗原免疫家兔,制备了特异性抗血清,其效价为1/1 204。W ester...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
牛陆 赵倩倩 杨静 邢国杰 张伟 贺红利 杨向东
【目的】大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)病是中国大豆产区最主要的病害之一,严重影响大豆产量和籽粒品质。核糖核酸酶PAC1能够识别和降解植物RNA病毒或类病毒复制过程中产生的ds RNAs,从而有效抑制病毒在寄主中的复制与积累。PAC1的这一特点为广谱抗RNA病毒及类病毒转基因作物的创制和培育提供了有效的靶标基因。本研究利用转基因技术,将来源于粟酒裂殖酵母菌(Schizosaccharomyces pombe)的PAC1导入栽培大豆,研究过表达PAC1对大豆SMV抗性的影响,
[期刊] 华北农学报
[作者]
许宗宏 郝青南 陈李淼 孙佃臣 田星星 单志慧
大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)是马铃薯Y病毒组(Potyvirus)成员之一,大豆花叶病毒病可造成大豆10%~30%的产量损失,并严重影响大豆的品质。不同株系间致病力差异源于它们在碱基序列上的差异。采用传统的抗病育种技术育成的抗病品种抗谱窄,品种抗性可因病毒株系的变异而丢失。依靠RNA引发的基因沉默改善植物的抗病毒能力是基于RNA i(RNA inference)原理建立的植物抗病毒新策略,本研究对来源于武汉SMV分离物的CP基因和Nib基因进行了克隆,通过对保守区域的扩增,采用Gateway技术构建了大豆抗花叶病毒的RNA干扰载体。为防治大豆花叶病毒新技术的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐润东 盛世英 杨秀芬 刘勇
【目的】激发子可以诱导寄主植物的系统获得抗病性，具有有效性、持久性和广谱性的特点。研究旨在明确新型激发子寡糖·链蛋白（ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｎｓ·ｐｌａｎｔ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ）对小麦黄花叶病毒（Ｗｈｅａｔ ｙｅｌｌｏＷ ｍｏｓａｉｃ ｖｉｒｕｓ，Ｗｙｍｖ）的免疫诱抗作用，为该激发子的研究和大面积推广应用提供技术支撑。【方法】选用小麦黄花叶病感病品种‘矮抗５８’，在室内将消毒的小麦种子播种于自感病田带回的病土中，在（２７±２）℃下培养。５叶期叶面喷施稀释１ ０００倍的６％寡糖·链蛋白。喷施７ ｄ后，将麦苗置于（１２±１）℃培养箱中接种培养。３０ ｄ后取出麦苗，分别测量小麦株．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
董家红 于嘉林 韩成贵 方守国 刘仪
通过RT PCR,获得了小麦黄花叶病毒罗田分离物28kD蛋白基因的cDNA克隆pUW28 10。序列分析结果表明,小麦黄花叶病毒不同分离物的28kD蛋白基因的核苷酸序列存在一定的差异:湖北罗田和河南潢川分离物在第326,327和336位较四川雅安、江苏扬州及日本分离物缺少3个核苷酸(nt),前两者核苷酸长度为762nt,后三者为765nt;不同分离物核苷酸序列同源性从92 1%到96 9%,相应的氨基酸序列同源性从89 8%到97 3%。
[期刊] 华北农学报
[作者]
田兆丰 裘季燕 丁翠珍 刘伟成 魏蕾 刘德文
在北京延庆的番茄上分离到1株黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物CMV-YQ,该分离物在番茄上造成严重的蕨叶、矮化,在烟草上表现花叶、矮化和畸形,表现出很强的致病性。根据黄瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR技术对其CP基因片段进行了扩增并克隆,获得了含该基因全长657 bp的cDNA片段。序列测定与比较分析结果表明,北京地区造成番茄蕨叶的CMV分离物CP基因片段核酸序列与GenBank上CMV亚组Ⅰ其他分离物同源性高达90%～99%,属于CMV亚组Ⅰ。该分离物与分离于我国芭蕉的另一亚组Ⅰ分离物GB同源...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周国辉 陈晓琴 周洁浪 唐添华 冯盛祥 郭丽晶
根据已报道的建兰花叶病毒 (Cymbidiummosaicvirus,CyMV)基因组序列设计PCR引物 ,采集广东省顺德等地墨兰 (Cymbidiumsinensevar.margicoloratum)和文心兰 (Oncidiumsp .)表现病毒病症状的兰株 ,抽提病叶组织总RNA ,经RT PCR反应在约 70 %的样品中获得预期大小的DNA扩增产物 ,并对其中来自不同品种的 3个扩增产物进行克隆和序列分析。结果表明所获得的核苷酸序列与世界各地已报道的CyMV外壳蛋白 (CP)基因序列高度同源 ,据此将RT PCR反应呈阳性的病样病原鉴定为CyMV。通过对CyMVCP基因序列进行进化树分...
关键词：
兰花 建兰花叶病毒 外壳蛋白基因
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