粗枝云杉(Picea asperata Mast.)体细胞胚胎发生技术为解决其无性繁殖和品种选育的问题提供了新途径,但目前仍存在胚性组织诱导率低、增殖后期胚性组织的高胚性难以维持、胚性组织分化能力低等问题。本研究以2015年粗枝云杉3个基因型的未成熟胚为试材,在已有体胚发生技术体系的基础上,在胚性组织诱导时,培养基中添加不同浓度EBR,提高了胚性组织的诱导率,优化了体胚发生的诱导体系,并进一步探讨EBR对同一增殖周期第0 d和第10 d时胚性组织中生理生化的变化,以及对体细胞胚分化的影响。结果表明:粗枝云

[目的]探究干化对云杉体胚解剖结构的影响，挖掘导致解剖结构改变的关键基因，初步明确干化促进体胚萌发的原因。[方法]以高胚性粗枝云杉细胞系为研究材料诱导体胚发生，干化处理不同时间后进行体胚表型观察及萌发率的测定。利用超景深显微镜、扫描电镜和透射电镜从不同层次观察干化体胚与未干化体胚的组织和细胞结构差异，并结合转录组测序分析干化前后体胚的基因表达变化。[结果]干化显著改变了粗枝云杉体胚形态，干化后体胚胚根呈红色，子叶呈绿色。显微观察发现干化后体胚的细胞呈现皱缩且分布不规则的状态，高倍视野下细胞壁不再具有刚性，表现出松弛扭曲状。转录组分析发现参与细胞壁重塑和影响细胞壁机械性能的多个XTHs、EXPAs和PMEs转录本在干化和未干化体胚中差异表达，且多上调表达，与显微观察发现干化体胚细胞壁形态变化的结果相符，这几类基因可能协同调控该过程，影响体胚萌发。[结论]干化过程中细胞壁重塑基因差异表达导致体胚细胞壁松弛，刚性结构消失，解除细胞分化和生长的限制，是干化促进体胚萌发的潜在原因。

以玉米自交系黄早4、综31、金黄96B、GY237、478及海921为材料,通过改良培养基上附加成分的组成及浓 度,对影响玉米胚性愈伤组织的诱导及分化等几个关键因素进行了研究。结果表明,基因型对玉米胚性愈伤诱导的影响 是显著的,而且基因型和基本培养基之间存在互作;在培养基上附加水解酪蛋白(casein hydrolysate,CH)、L-脯氨酸(L- proline)对于玉米胚性愈伤组织的诱导分化是必要的,而附加L-谷氨酰氨、甘露醇、AgNO3对提高胚性愈伤组织的诱导作 用不显著;结果还发现胚性愈伤组织诱导培养基和胚性愈伤组织分化培养基的组合对成苗率有明显的影响作用。

花药接种前麦穗置- 20 °C、10 m in 预处理有利于出愈和绿苗分化。花药接种后37 °C、8 h 培养使出愈率由8.2%(对照) 提高到29.0% 。在诱导培养基上附加2 m g/L的水杨酸 (SA) 对愈伤组织分化有促进作用, 而不影响出愈和绿苗分化。诱导培养基上附加0.02 m g/L表-油菜素内酯 (epi-BR) 能使绿苗分化率由25.7% (对照) 提高到47.2% , 白苗分化率由31.4% 降低到24.3% , 当epi-BR浓度提高到0.2 m g/L时, 却对绿苗和白苗分化均表现抑制作用。

以10个小白菜杂交种为试材,采用游离小孢子培养方法,研究影响小孢子胚状体形成因素的结果表明,不同品种胚状体的诱导率不同;NLN培养基中大量元素减半有利于小孢子胚诱导,其诱导率达到100%;培养基中添加0.05 mg/L的6-BA和0.2 mg/L的NAA可以提高胚状体诱导率;活性炭和琼脂糖对诱导胚状体发生和发育有促进作用,可使子叶胚的比例达90%以上;花蕾经4℃低温预处理24 h后的成胚率显著提高。

【目的】研究油菜素内酯对常见鲜食及酿酒葡萄果实品质形成及香气物质积累的影响,为精准调控不同香型葡萄果实品质提供理论依据。【方法】选择户太8号、巨玫瑰和赤霞珠为试材,以体积分数0.1%乙醇+体积分数0.1%吐温-80水溶液为对照(CK),于转色初期对果穗喷施外源0.1,0.4和1.6 mg/L 24-表油菜素内酯(EBR),采集成熟期果实测定总酸、还原糖、总酚、总花色苷、总类黄酮、单宁、总黄烷-3-醇等含量,并采用顶空固相微萃取-气质联用技术(SPME-GC-MS)进行香气成分分析,全面综合评价不同质量浓度EBR对不同品种葡萄果实品质的影响。【结果】适宜质量浓度的外源EBR处理能够提高户太8号、巨玫瑰和赤霞珠的葡萄果实成熟度及酚类物质含量。对于鲜食葡萄户太8号而言,1.6 mg/L EBR处理效果较好,与CK相比,其还原糖、总酚、总花色苷、总类黄酮和总黄烷-3-醇含量分别增加了9.28%,28.06%,37.92%,37.93%和14.86%;户太8号属于酯香型品种,1.6 mg/L EBR处理后其酯类香气物质总量相较CK提高了23.38%。对于鲜食葡萄巨玫瑰而言,0.1 mg/L EBR处理效果较好,与CK相比,其还原糖、总酚、总花色苷、总类黄酮和总黄烷-3-醇含量分别增加了10.52%,15.62%,35.17%,18.65%和9.74%;巨玫瑰属于玫瑰香型品种,0.1 mg/L EBR处理后其萜烯类香气物质总量相较于CK提高了46.26%。对于酿酒葡萄赤霞珠而言,0.1 mg/L EBR对其还原糖、总酚及总花色苷含量的促进效果较好,相较于CK分别增加了14.80%,17.08%和18.63%;1.6 mg/L EBR对其总类黄酮、单宁和总黄烷-3-醇含量的促进效果较好,相较于CK分别增加了25.35%,42.14%,9.22%。赤霞珠属于非芳香型葡萄品种,不同质量浓度EBR处理后其脂肪酸类香气物质含量无显著变化,但酯类、醛酮类、高级醇类、萜烯类及苯类衍生物含量均显著升高。【结论】适宜质量浓度的外源EBR处理能够提高户太8号、巨玫瑰和赤霞珠葡萄果实的成熟度及酚类物质含量,有助于增加不同香型葡萄品种的特征香气类物质含量。

以11个甘蓝型油菜基因型为材料,采用NLN培养基进行游离小孢子培养,对如何提高可培养的基因型范围和产胚率进行了研究。结果表明,11个油菜基因型中有10个基因型可以诱导出胚,培养成功率达90.9%,表明采用NLN培养基进行游离小孢子培养油菜基因型范围比较宽,但各基因型间小孢子胚产量差别很大,每花蕾产胚量为0.08~3.53个,TR4和TR9两个基因型每花蕾产胚可达3.23,3.53个。以TR4和TR9两个基因型为试材,进一步改进培养基和培养方法,采用NLN培养基中添加激素和活性炭方法,可大大提高产胚率,产胚量分别达到7.11和10.05个/蕾;接种后,小孢子经33℃高温预处理可显著影响产胚量。子...

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最...

为了诱导冰糖橙的愈伤组织和建立胚性细胞系,以冰糖橙成熟果实中未发育胚珠为外植体,将乙烯合成抑制剂AgNO3应用于冰糖橙胚性细胞系的建立,AgNO3设有5,10,12mg/L等3个处理,以未加AgNO3的MT培养基为对照.结果表明,在诱导培养基中添加AgNO3不能促进胚性愈伤组织的形成,反而抑制了胚状体的发生.然而在继代培养基中添加5mg/L的AgNO3有利于小而弱的胚状体基部形成胚性愈伤组织,胚性愈伤组织发生率达28%.经过5次继代处理建立了冰糖橙的胚性细胞系.

以3个小麦品种为材料,研究了幼胚发育时间和禾谷镰刀菌粗毒素对小麦幼胚培养特性的影响。结果表明,胚发育时间对小麦幼胚离体培养有较大影响,花后10~13 d的小麦幼胚诱导产生的愈伤组织质量较好,胚性愈伤组织诱导率较高,是适宜的取材时间;禾谷镰刀菌粗毒素对不同小麦品种幼胚愈伤组织、胚性愈伤组织和苗分化的影响趋势相同,粗毒素为6.0 g/L时,对小麦幼胚愈伤组织诱导有明显抑制,低于6.0 g/L时有一定的促进作用;粗毒素在0~6.0 g/L对胚性愈伤组织形成及苗分化的影响随浓度增高抑制作用增强,在6.0 g/L时胚性愈伤组织的形成能力较低或丧失;适宜的粗毒素筛选浓度为1.5~4.5 g/L。

为了探讨外源２４－表油菜素内酯（２４－ｅｐｉ ＢＬ）对不同温度下龙须菜生长及琼胶含量的影响，并揭示琼胶含量与葡萄糖磷酸变位酶基因（ｐｇｍ）和甘露糖磷酸变位酶基因（ｐｍｍ）表达量之间的关系，研究了不同浓度２４－ｅｐｉ ＢＬ对３种温度培养条件下龙须菜的生长、琼胶含量及２种琼胶合成相关基因表达的影响。结果显示在１５和３１℃培养时，添加０．１ ｍｇ／Ｌ的２４－ｅｐｉ ＢＬ时龙须菜相对生长速率最高，分别为９．２２％／ｄ和１１．７３％／ｄ；而在２５℃培养时，０．５ ｍｇ／Ｌ的２４－ｅｐｉ ＢＬ对龙须菜生长促进作用最强，相对生长速率为１４．９８％／ｄ；在１５℃培养时，０．５ ｍｇ／Ｌ的２４－ｅｐｉ ＢＬ添加．．．

【目的】探索银杉成熟胚愈伤组织诱导植株再生影响因素，为进一步阐明影响诱导银杉愈伤组织、不定芽等的影响机理提供帮助。【方法】以广西金秀和广西桂林两个种源的银杉成熟种胚为试验材料，利用1/2 MS、DCR、P6培养基，分别添加0.5、1.0、1.5 mg·L^-1的6-BA，0.2、0.4、0.6 mg·L^-1的NAA及0.5、1.0、1.5 mg·L^-1的IBA，诱导银杉愈伤组织、不定芽和不定根，以得到银杉再生植株。分析了银杉种源、培养基、植物生长调节剂等对银杉愈伤组织、不定芽、不定根诱导率和增殖壮芽率的影响。【结果】桂林种源银杉的愈伤组织诱导率、不定根诱导率和增殖壮苗率显著最大，分别为66.48%，21.43%和55.00%。金秀银杉种源不定芽的诱导率显著最大，为73.33%。适合银杉愈伤组织诱导植株再生的培养基和植物生长调节剂为，愈伤组织诱导：DCR+0.5 mg·L^-1 6-BA，不定芽诱导：DCR+1.5 mg·L^-1 6-BA，不定根诱导：1/2 MS+0.2 mg·L^-1 NAA+0.5 mg·L^-1 IBA，增殖壮芽：DCR+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.4 mg·L^-1 NAA。【结论】广西桂林种源银杉整体诱导率和增殖率比广西金秀种源的较高。DCR培养基对银杉愈伤组织和不定芽诱导有显著促进效果，1/2 MS培养基对不定根诱导促进效果显著。6-BA既可以诱导银杉愈伤组织和又可以诱导不定芽，NAA和IBA组合可以诱导出银杉不定根，6-BA和NAA组合可以对银杉不定芽进行增殖壮芽。该研究为进一步研究银杉愈伤组织诱导植株再生影响因素的调控机理提供了参考。

The germination capacity of Pinus tabulaeformis seeds was obviously improved after the seeds were soaked with the different concentrations of natural brassinolide. The germination rate and germination energy of the seeds were increased by 23 1% and 14 94% respectively, and the mean germinatio...

【目的】明确油菜素内酯对Ca2+分布的影响,分析油菜素内酯对影响钙稳态的编码Ca2+通道和Ca2+-ATPase相关基因表达量的变化,明确油菜素内酯对钙稳态的影响。【方法】采用焦锑酸钙沉淀法对油菜素内酯(brassinosteroid,BR)处理后Ca2+的分布进行细胞化学定位;利用real-time PCR技术对调控细胞内Ca2+水平的位于细胞质膜、液泡膜和内质网上的编码Ca2+-ATPase的基因及位于细胞质膜、液泡膜和溶酶体上的编码Ca2+通道基因的表达量进行分析。【结果】在未经BR处理的拟南芥细胞中,Ca2+主要分布在细胞壁、细胞间隙和液泡中,细胞质和叶绿体中仅有少量Ca2+的分布;在...

在采用液体漂浮分步培养方法进行甘蓝型油菜花药培养诱导胚状体的过程中，在不同时期，加入适量的多效唑，对胚状体的形成具有促进作用，其中在预处理中加入１ｍｇ／Ｌ和在第一、第二培养基中各加入０．５ｍｇ／Ｌ的多效唑，效果最好，其诱导率可从７１．５％提高到４１１．１％。