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[期刊] 水产学报  [作者] 秦真东  杨敏璇  卢志杰  施斐  李亚男  詹凡玢  万全元  李军  林蠡  
为系统研究草鱼血红蛋白对草鱼肾细胞(Ctenopharyngodonidelluskidney CIK)细胞的损伤机制,实验探究了血红蛋白和血红素刺激CIK细胞后细胞的生长情况,结果显示,血红蛋白和血红素明显抑制了CIK细胞的正常生长。其次,检测了血红蛋白和血红素刺激对CIK细胞内铁代谢相关基因的表达情况,结果表明,血红蛋白和血红素的刺激不同程度的上调了铁代谢相关基因的表达。通过检测被血红蛋白和血红素刺激后的CIK细胞其细胞炎症和抗氧化酶相关基因的表达情况,结果表明,血红蛋白和血红素可以通过NF-κB途径激活下游炎症因子的表达,如促炎因子TNF-α,IL-1β和IL-6,抑炎因子IL-10以及趋化因子IL-4和IL-8等,也同时激活了超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)3种抗氧化酶基因的表达水平。为进一步检测血红蛋白对CIK细胞的毒性作用,实验也检测了血红蛋白刺激CIK细胞后,细胞内铁离子和ROS的变化情况,结果显示,血红蛋白的刺激显著增加了细胞内铁离子和ROS的含量。最后,实验检测了CIK细胞受血红蛋白和血红素刺激后,胞凋亡相关基因的表达情况,结果显示,血红蛋白和血红素都在不同程度上显著激活了CIK细胞凋亡相关基因的表达水平。总之,本研究结果表明,高氧化活性的血红蛋白可以激活细胞内铁代谢和炎症因子相关基因的表达,同时增加细胞内铁离子和ROS水平导致CIK细胞凋亡基因的高表达。本研究结果将丰富鱼类血液免疫基础理论,同时也为水产健康养殖提供新的参考。
[期刊] 水产学报  [作者] 秦真东  詹凡玢  李亚男  施斐  杨敏璇  卢志杰  李军  林蠡  
为了探究鱼类体内过量游离血红蛋白对鱼体影响,本研究以草鱼为研究对象,通过体内注射血红蛋白模拟体内出血,探究血红蛋白对组织和组织中巨噬细胞的免疫调控作用。体内注射血红蛋白研究结果显示,血红蛋白的刺激导致头肾和中肾组织中明显的血红蛋白沉淀,同时提高了鱼体血清中的抗氧化相关酶活水平,促进了头肾组织中炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-10的mRNA表达水平。普鲁士蓝和间接免疫荧光实验显示,头肾巨噬细胞对血红蛋白表现出了吞噬活性。荧光定量PCR检测结果显示,血红蛋白的刺激显著激活了头肾巨噬细胞中CD68、CD86、CSF和MHC-Ⅱ的mRNA表达水平。进一步的细胞因子检测结果显示,血红蛋白刺激12 h后,头肾巨噬细胞中的炎症因子(TNF-α、IL-1β和IL-4)、趋化因子(CCL20和CCL4)、IFN-α和TLR4的mRNA表达水平被显著上调表达。综上所述,本研究结果表明草鱼头肾巨噬细胞对血红蛋白具有吞噬能力,同时血红蛋白也激活了巨噬细胞中多种细胞因子的表达水平。本研究结果首次阐述了草鱼血红蛋白与巨噬细胞的相互作用关系,丰富了鱼类血液基础免疫学理论,同时也为鱼类健康养殖提供新的参考。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 左振华  唐建州  张钊  唐春华  陈韬  张东裔  
利用快速扩增cDNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)技术获得草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因全长cDNA序列为2093bp,含有1个1944bp的开放阅读框,5′非编码区长25bp,3′非编码区长124bp,可编码647个氨基酸.生物信息学分析表明,在IAP的N端无氨基酸残基组成的信号肽;与斑马鱼的同源性最好,其次是斑猫鲿;在系统进化上,与斑马鱼、斑猫鲿共聚为1支.用半定量RT-PCR分析正常及细菌诱导下草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因在不同组织中的表达分布,正常情况下,凋亡抑制蛋白基因在所取的7种组织中均有表达,其中脑、肠和肾表达最高,肝和心脏次之,鳃和肌肉最低,但...
[期刊] 海洋水产研究  [作者] 董晓煜  张秀梅  张沛东  
20±0.4℃及循环水条件下,研究了溶解氧与养殖密度对褐牙鲆幼鱼(全长11.84±0.45cm)血细胞数量及血红蛋白含量的影响。溶解氧含量和养殖密度设置为两种模式:5.5±0.5mg/L(空气充氧)对应养殖密度为100、200、300和400ind/m2与14±2mg/L(纯氧充氧)对应养殖密度为200、400、600和800ind/m2。实验历时30d,存活率均达到94%以上。结果表明,(1)空气充氧条件下,红细胞数目(RBC)、白细胞数目(WBC)、血红蛋白(Hb)含量均有随养殖密度增大而增加的趋势,但各处理之间差异不显著(P>0.05);(2)纯氧充氧条件下,3项指标也有随养殖密度增大而...
[期刊] 华北农学报  [作者] 赵洁  梁爱华  付月君  
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同...
[期刊] 华北农学报  [作者] 赵洁  梁爱华  付月君  
为了研究Bm K IT提高Ac mNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac mNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac mNPV-Bm K IT(IE1)、Ac mNPV-Bm K IT(P10)、Ac mNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac mNPV-Bm K IT(P10)-VcATH(PH),通过四唑盐比色法(mTT)和蛋白质印迹法(WEsTErN BloT)分析了Bm K IT在Ac mNPV的3个启动子调控下对sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 H Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 史荣仙  赖松家  郑维明  左福元  周江宁  
采用醋酸纤维薄膜电泳法首次系统分析了中国12个水牛地方类群1071头水牛的血红蛋白多态性。结果表明,中国水牛血红蛋白(Hb)受Hb ̄A、Hb ̄B、Hb ̄C3个等位基因控制,其频率分别为0.0761,0.8852和0.0387,Hb ̄C基因系首次命名。聚类分析表明,中国水牛各地方类群间亲缘关系较近。
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 付彩霞  赵思明  熊善柏  
以静脉采集的抗凝梅花鹿血为材料,考察了蛋白酶种类、酶解条件对鹿血中血红蛋白水解度、氮收率和血红素含量的影响,优化了碱性蛋白酶(Alcalase)和风味蛋白酶(Flavorzyme)的分步酶解工艺,以获得具有良好感官品质和富含血红素的鹿血酶解产品。结果表明:蛋白酶种类和酶解方式对鹿血血红蛋白水解效果有明显影响,采用Alcalase和Flavorzyme分步水解的效果最好。Alcalase和Flavorzyme的最适酶解温度分别为55℃和50℃,最适酶解起始pH值分别为8.0和6.5,2种酶的适宜底物浓度为8%(m/m),适宜加酶量为6 000U/g。采用分步酶解工艺时,在底物浓度8%、酶解温度5...
[期刊] 华北农学报  [作者] 杨迪   黄玲巍   杨雅雯   乔自林   王家敏  
表皮生长因子受体(EGFR)在许多实体肿瘤中过度表达,建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株,有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体,与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞中,48 h后提取上清液经纯化获得EGFR基因过表达慢病毒液。将其转染至MDCK细胞中,经嘌呤霉素筛选和单细胞克隆后观察感染效率,RT-qPCR和Western Blot、间接免疫荧光分别检测基因及蛋白的表达,建立EGFR蛋白过表达MDCK细胞株。使用流式细胞仪分别检测过表达及对照细胞株的细胞凋亡和细胞周期。犬EGFR基因位于18号染色体,由编码跨膜糖蛋白的30个外显子组成。经反应体系,PCR产物交换入线性化表达载体,获得了阳性转化子8个,大小为738 bp。所获EGFR基因过表达慢病毒滴度为3.5×108 TU/mL。转染MDCK细胞后在荧光显微镜下观察荧光效果显著,经检测EGFR基因及其蛋白在细胞中的表达量显著升高。间接免疫荧光试验显示,EGFR在细胞中表达明显增强。过表达细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率显著上升,且在G2/M期发生阻滞。成功建立一株稳定的犬EGFR过表达MDCK细胞株,犬EGFR的过表达催化了细胞分裂,使DNA复制加快,同时刺激了细胞凋亡。
[期刊] 渔业科学进展  [作者] 赵庆  吴彪  刘志鸿  孙秀俊  周丽青  杨爱国  张高伟  
血红蛋白是红细胞的主要组成成分,在高等动物中分布广泛,具有运载氧气等多种重要功能。然而,软体动物血红蛋白的相关研究较少。魁蚶(Scapharca broughtonii)作为重要的大型经济蚶类,其血淋巴因含有红细胞而不同于其他多数双壳贝类。为明确魁蚶血红蛋白基因的结构特征、组织分布以及发生、免疫活性等特点,本研究以从魁蚶转录组数据库中获得的部分序列为基础,通过cDNA末端快速扩增(rapid amplication of cDNA ends,RACE)技术克隆获得了一种魁蚶血红蛋白基因cDNA全长序列(命
[期刊] 世界农业  [作者] 马三梅  王永飞  陈义烘  
[期刊] 淡水渔业  [作者] 吕富  胡毅  黄金田  王爱民  
以血红蛋白含量和肌肉蛋白含量为指标,研究了养殖异育银鲫(Carassius auratus gibeliovar.E′erqisi)对水环境盐度的适宜性。结果显示:1.5‰和3‰的水环境盐度可以显著提高异育银鲫血红蛋白含量(P0.05);而6‰、9‰和12‰的水环境盐度则会使异育银鲫血红蛋白含量显著下降(P0.05),而9‰和12‰盐度则会引起异育银鲫肌肉...
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 邓勇  沈群  李道娥  郭佩玉  
探讨了叶蛋白强化膳食对大学生血红蛋白水平的影响。结果表明:膳食中补充一定量的叶蛋白,可以提高血液中血红蛋白的水平,缓解由于蛋白质摄入不足而引起的贫血。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 潘敏慧  陈默  黄淑静  于子舒  成传刚  鲁成  
【目的】细胞色素C是线粒体凋亡路径上的关键因子,通过家蚕细胞色素C基因的克隆和其蛋白在家蚕凋亡细胞中的释放研究,为家蚕细胞凋亡的研究奠定基础。【方法】利用生物信息学和分子生物学方法克隆家蚕细胞色素C基因,通过紫外线照射诱导家蚕细胞凋亡,应用流式细胞仪和Western-blotting检测家蚕凋亡细胞的线粒体膜电位变化和细胞色素C的释放。【结果】在家蚕中克隆了一个含有细胞色素C保守结构域的同源基因,该基因cDNA长570bp,有3个外显子,开放阅读框(open reading frame,ORF)长324bp,编码108个氨基酸,存在参与细胞凋亡时与下游凋亡蛋白酶激活因子(Apaf-1)相互作用...
[期刊] 华北农学报  [作者] 王宪军  向华  张旭梅  任玉鹏  朱江江  
旨在探究羊口疮病毒ORFV118蛋白对山羊睾丸支持细胞周期、凋亡以及诱导机体免疫应答相关的4种细胞因子(IL-1β、IL-6、IFN-γ和TNF-α)表达水平的影响。在ORFV118基因克隆基础上,成功构建真核表达载体pEGFP-ORFV118;将pEGFP-ORFV118转染山羊睾丸支持细胞,Western Blot鉴定ORFV118蛋白表达的正确性;流式细胞仪检测ORFV118基因对细胞周期及凋亡的影响;RT-qPCR检测细胞周期相关基因CDK2和P21、凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase3、Caspase7、P53和BCL2L11的mRNA的表达水平,并利用RT-qPCR和ELISA方法检测免疫相关的细胞因子表达的变化。结果显示,成功扩增ORFV118基因,全长为309 bp。ORFV118蛋白的表达阻滞了细胞的DNA合成期(S期),促进了DNA合成后期(G2/M期)且下调基因CDK2的mRNA表达水平;可抑制细胞的凋亡作用,且下调促凋亡基因Caspase3、Caspase7、SOCS2的mRNA表达水平;对细胞因子IL-1β和IFN-γ呈不同程度的抑制作用,而对IL-6和TNF-α呈促进作用。
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