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[期刊] 西南农业学报  [作者] 和志娇  谭宏伟  徐中志  和加卫  程在全  和根强  董霞  
在总结多种蜜蜂DNA提取方法的基础上,以酒精浸泡保存的东方蜜蜂为试材,发展了一种提取蜜蜂DNA的方法。用此方法提取蜜蜂DNA的OD260/280值显示产物纯度较高,能够被限制性内切酶完全酶切,取材少,时间短。用ISSR分子标记技术对其PCR扩增,可得到清晰的条带。用这种蜜蜂基因组DNA提取的改良方法所获的DNA数量和质量都很高,可用于各种分子生物学实验。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 薛运波  李兴安  葛凤晨  蒋滢  历延芳  李志勇  王志  
【目的】比较和揭示12个长白山中蜂(长白山地方采样点中华蜜蜂)基因组多态性的分布规律。【方法】采用RAPD-PCR技术选择性扩增基因组RAPD位点分子,以NTsys-PC方法建立基因组分子标记系统树状结构和计算基因组分子标记相似系数。【结果】1104号等6个蜂基因组分子标记多态性图谱同时具有240、400、700、和1 500 bp等4个条带,其系统树状结构在相似系数值为0.568时呈现相对独立的一个分支;1083号等6个蜂基因组分子标记多态性图谱同时具有240、400、600和1 200 bp等4个条带,其系统树状结构在相似系数值为0.586时呈现相对独立的另一个分支;相似系数值二维矩阵与系...
[期刊] 西南农业学报  [作者] 杜金子  陈丽梅  黄荣韶  黎桦  黄棉  
以7种石韦为试材,采用不同SDS提取液浓度(0.5%、1.5%、2.5%)、不同温浴时间(0.5、1、1.5、2 h)对石韦基因组DNA进行提取,并测定基因组DNA的纯度和浓度。结果表明,改良SDS法完全适用于石韦基因组DNA的提取,而且1.5%为改良SDS法提取石韦基因组DNA的适宜提取液浓度,1~1.5 h为提取的最佳时间。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 熊翠玲  王海朋  郑燕珍  付中民  徐国钧  童新宇  赵红霞  陈大福  郭睿  
利用前期获得的中华蜜蜂(Apis cerana cerana)幼虫肠道转录组数据对东方蜜蜂(Apis cerana)基因组的已注释基因进行结构优化、对未注释的新基因进行预测、分析和鉴定:利用Cufflink软件对reads进行转录本重构,通过与参考转录本序列进行比较,共对3 366个东方蜜蜂的基因结构进行了优化;利用Cuffcompare软件将重构转录本与参考基因组进行比对,共预测出527个东方蜜蜂的新基因,其中234个新基因在Nr数据库中存在注释信息;随机选取12个新基因进行PCR鉴定,有11个能够扩增出符合预期的目的片段,表明多数预测出的新基因真实存在;GO分类和KEGG代谢通路分析结果显示上述新基因可能在东方蜜蜂的生长发育、物质代谢、遗传信息传递等方面具有重要功能。本研究结果丰富和完善了东方蜜蜂基因组的基因结构与功能注释信息,也为新基因的功能研究打下基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 黄建安  黄意欢  罗军武  王坤波  周李华  
为了从富含多酚和多糖等多种次生代谢物质的茶树叶片中分离出高质量的基因组 DNA,对 4种植物 DNA提取方法进行改良后 ,以茶树春梢为材料 ,对提取效果进行了比较 ,并首次采用 CTAB区室法提取茶树基因组DNA.结果表明 ,用该 4种方法提取的 DNA,其 OD2 6 0 / OD2 80 都在 1.8以上 ,相对分子质量均大于 2 1kb,能完全被Eco R 酶切消化 ,也能获得清晰的 PCR扩增图谱 .因此 ,只要操作合理 ,4种方法均能提取出高质量的 DNA.
[期刊] 华北农学报  [作者] 刘遵春  包东娥  廖明安  
通过添加Vc对传统的CTAB法进行改进,结果表明:在磨样时,1 g鲜样中添加0.10 g的Vc提取的DNA质量最高;最佳提取材料是嫩芽,其次是新梢和成熟叶片。
[期刊] 浙江林学院学报  [作者] 谢一青  李志真  黄儒珠  肖祥希  王志洁  
为从富含次生代谢物的光皮桦Betula luminifera嫩叶中获得高质量DNA,设计了5种先提核再提DNA的CTAB法Ⅰ,CTAB法Ⅱ,CTAB法Ⅲ,CTAB法Ⅳ及改进的SDS法,并以常规CTAB法为对照。用不同的方法就光皮桦基因组DNA进行了提取,采用琼脂糖凝胶电泳检测、A260/A280值测定、限制性内切酶处理和PCR扩增等方法对所提的DNA进行了比较分析。结果表明:实验设计的5种改进方法提取的DNA质量要比常规法的好,但提取的效果差异较大。其中改进的CTAB法Ⅰ是提取光皮桦基因组DNA的最佳方法;PCR扩增结果表明,不同的DNA提取方法会影响PCR带型的变化。图3表1参13
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 梁玉琴  李芳东  傅建敏  乌云塔娜  吴硕  
针对柿属植物叶片富含单宁,常规CTAB法提取DNA质量低等问题,为了获得符合柿属植物SSR-PCR扩增要求的DNA,分别采用改良CTAB法和植物基因组DNA提取试剂盒两种方法,提取柿属植物DNA,结果显示:两种方法均可得到满足SSR-PCR扩增要求的DNA;试剂盒较改良CTAB法提取的DNA质量高、杂质少,DNA得率略低,但其操作步骤简单,耗时短,毒害小,因其费用较改良CTAB法高,各实验室可根据自身条件选择适宜方法提取柿属植物DNA。
[期刊] 实验技术与管理  [作者] 张杰  张晓鹏  李鹏高  赵志强  
分别将研磨、水煮两种预处理方法和改良CTAB法、试剂盒法两种提取方法进行组合,比较提取小鼠粪便细菌基因组DNA的效果。结果发现,研磨预处理过的样品提取到的细菌基因组DNA的浓度和纯度均高于水煮预处理过的样品,研磨结合改良CTAB法提取到的DNA完整性好于其他方法,研磨结合改良CTAB法是一种提取粪便细菌基因组DNA较为实用可靠的方法。
[期刊] 淡水渔业  [作者] 吴旭东  张奇  侯玉霞  张文吉  
从鲶肌肉、肝、肾、血中提取基因组DNA。经过0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,DNA带型整齐。紫外分光光度仪测定基因组DNA的D260 nm/D280 nm达1.77~1.82,证明所提取基因组DNA质量较好,可用作聚合酶链式反应(PCR)的模板所需。
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 田晔林  张党权  宋志丹  王文和  谷振军  
干苔藓植物标本、多年保存苔藓植物标本等的基因组DNA提取是制约苔藓分子生物学研究的难题。本论文采用常规CTAB、高盐CTAB、改良CTAB、试剂盒、SDS法和快速提取法这6种方法来提取保存多年的苔藓标本干样的基因组DNA。结果表明,改良CTAB法是适于提取苔藓干样基因组DNA的最佳方法,提取的基因组DNA总量较多且杂质较少。进一步的ISSR分子标记实验结果表明,基于改良CTAB法所提取的苔藓标本基因组DNA能有效用于ISSR分子遗传学研究。
[期刊] 北京林业大学学报  [作者] 常虹  郝德君  杨晓军  肖荣堂  刘勇  钱路  安榆林  
为探讨小蠹科昆虫基因组DNA的提取方法,分别以单头削尾材小蠹、削尾材小蠹足部肌肉组织以及多年75%酒精浸渍标本为研究对象,采用经典的酚仿抽提法、改良的CTAB法、SDS法及动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒(即磁珠法)4种方法提取小蠹基因组DNA,对提取的基因组DNA进行分光光度值的测定以及COⅠ基因扩增。结果表明:4种方法均可从单头标本中提取总DNA;对于75%酒精浸渍2年的标本,4种方法均适用,大于2年的浸渍标本,仅磁珠法适用,且磁珠法适合微量组织总DNA的提取。
[期刊] 中南林业科技大学学报  [作者] 周诗捷  曹福祥  
在传统CTAB方法的基础上进行改良,建立了适用于华南五针松成熟针叶DNA提取的CTAB法,该方法具有稳定、操作简单、可靠等特点。使用该方法对不同地理分布的华南五针松成熟针叶进行基因组DNA的提取,经紫外分光光度计检测其A260/A280在1.60~1.78之间,OD260/OD230比值介于2.0~2.3之间,无降解现象,RNA去除干净。经ISSR-PCR分析,条带清晰,完全能够达到分子标记的操作要求。
[期刊] 华北农学报  [作者] 张鲁杰  夏秀英  徐娜  贺建华  徐品三  
为从越橘成熟组织中提取高质量DNA,对CTAB法进行改良,并与常规CTAB法及快速CTAB法的提取效果进行比较。结果表明:改良方法提取获得的DNA产量大、纯度高,DNA产量平均为192μg/g,OD260/OD280在1.75~1.85之间,所得DNA能被限制性内切酶完全消化,以其为模板进行SRAP-PCR扩增,能得到清晰、稳定的条带,证明改良方法适于越橘成熟组织DNA的提取。
[期刊] 上海海洋大学学报  [作者] 顾铭悦  许强华  
由于南极鱼的体内存在抗冻蛋白,不同于一般鱼类,常规基因组DNA的提取较为困难。为建立南极鱼基因组DNA提取的有效方法,利用贝氏肩孔南极鱼(Trematomus bernacchii)为材料,采用改进的酚-氯仿法提取基因组DNA,与传统酚-氯仿法和快速试剂盒抽提法作对比,并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定、以及PCR扩增等手段进行基因组DNA质量的检测。结果表明:利用改进的基因组DNA提取方法,从贝氏肩孔南极鱼获得的基因组DNA,电泳条带整齐明亮,A260/A280值接近1.80,适合后续的PCR扩增实验,可满足基于PCR技术的相关分子生物学实验需要。
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