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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
阚飞 孙捷 田路旸 李超 徐明旭 房云 代陈胜 张克云
以中国药用昆虫白星花金龟(Protaetia brevitarsis)幼虫(蛴螬)为研究对象,通过匀浆、乙醇沉淀、Sevag法去除蛋白,得到蛴螬总多糖,其得率为57%。用苯酚硫酸法进行多糖浓度测定。经MTT法检测表明,终质量浓度为5和20μg.mL-1的总多糖对小鼠脾细胞的生长增殖率分别为48.8%和62.2%,对巨噬细胞生长增殖率分别为240%和516%。用DEAE-Sephadex A-25、LPLC-Sephadex G-75层析法分离纯化总多糖,得到5种蛴螬多糖,其中相对分子质量分别为42 000和26 000的2种蛴螬多糖对脾细胞生长增殖率较高,终质量浓度为5μg.mL-1的该2种多...
关键词：
蛴螬 多糖 免疫细胞增殖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
索丽娟 胡建宏 王鹏 洪洁赟 王春伟 李青旺 史怀平
【目的】探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和白血病抑制因子(LIF)对小鼠精原干细胞(SSCs)体外增殖的影响,为后续SSCs的诱导分化、转基因动物生产、基因治疗等研究奠定基础。【方法】收集6～8日龄小鼠睾丸,采用机械法和2步酶消化法获得细胞悬液。通过多次差异贴壁法分离纯化SSCs和支持细胞,采用碱性磷酸酶(AP)染色和RT-PCR检测Ngn3和Oct4基因2种方法对SSCs进行鉴定。采用单独添加GDNF(添加量为0,10,20,40ng/mL)或LIF(添加量为0,500,1 000,1 500U/mL)的无血清DMEM/F12培养基培养SSCs,于培养第3,5,7天取样,同时用添加G...
[期刊] 水产学报
[作者]
曹丽萍 丁炜东 张柳 Galina Jeney 徐跑 殷国俊
为了探讨香菇和黄芪多糖对鲤免疫细胞的免疫活性作用,采用Percoll密度离心等技术,对鲤的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养,从细胞和分子水平上研究了香菇和黄芪多糖的免疫调节作用。巨噬细胞和外周血白细胞分别体外暴露不同浓度的黄芪多糖和香菇多糖后,采用MTT法测定它们对鲤外周血白细胞增殖的影响;NBT还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响;实时定量PCR法测定头肾巨噬细胞细胞因子IL-1β诱导表达的影响。结果显示,黄芪和香菇多糖作用头肾巨噬细胞24h后,香菇多糖浓度为1,10,100μg·mL-1时能显著诱导巨噬细胞的氧爆发活性,黄芪多糖则没有显著的诱导...
关键词：
鲤 多糖 巨噬细胞 IL-1β
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
张龙涛 王舒宁 龚晖 沈恒胜 林锋强 缪伏荣
采用MTT法依次用热水、冷碱、热碱浸提姬松茸菌丝体,研究得到的3种水溶性多糖及胞外多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响.结果表明:4种多糖在不同质量浓度下可单独或协同Con A刺激淋巴细胞增殖;以0.5-0.25μg.mL-1冷碱提取的水溶性多糖,可促进LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖(P>0.05).
关键词：
姬松茸 多糖 脾淋巴细胞 MTT法
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
特列克·阿依恒别克 赛福丁·阿不拉 萨比热·热夏提 况玲 德力拜尔·木拉提 阿得力江·吾斯曼
[目的]探讨骆驼刺酸性多糖 (Acidic Alhagi sparsifolia shap polysaccharide， aASP) 对小鼠脾淋巴细胞的免疫增强作用。[方法]本试验采用醇沉法提取骆驼刺多糖，采用柱层析法对骆驼刺多糖进行分离及纯化，采用苯酚硫酸法、硫酸-咔唑法和BCA微孔酶标仪法，检测糖含量、糖醛酸和蛋白含量，采用红外光谱法鉴别多糖性质。采用MTT法确定aASP对小鼠脾脏淋巴细胞的安全浓度，在安全浓度范围内500 μg·mL~(-1)、125 μg·mL~(-1)和31.25 μg·mL~(-1)三个浓度下检测单独、协同LPS和PHA对脾淋巴细胞的增殖效果；流式细胞术检测aASP对淋巴细胞亚群分化的影响；ELISA法检测aASP对淋巴细胞细胞因子分泌的影响。[结果]骆驼刺多糖提取物中多糖含量为81.8%±1.2%，糖醛酸含量为17.34%±0.75%，蛋白含量为0.54%±0.08%；红外光谱显示aASP在1746.53 cm~(-1)处有较强的吸收峰，结合糖醛酸含量判定aASP为酸性多糖。高、中、低浓度的aASP均可促进脾脏淋巴细胞增殖，协同LPS和PHA能够更显著促进B细胞和T淋巴细胞的增殖(P<0.05)。流式细胞术和ELISA检测结果显示aASP能够促进CD4~(+)T和CD8a~(+)T细胞的分化，并促进脾淋巴细胞分泌IFN-γ、TNF-α、IL-6和IL-4。[结论]aASP可以增强小鼠脾脏淋巴细胞的增殖，诱导小鼠脾脏T淋巴细胞产生Th1及Th2混合型免疫应答，免疫细胞偏向CD4~(+)T细胞分化。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范云鹏 王德云 胡元亮 刘家国 赵晓娟 袁菊 高焕 王远垒
为了观察黄芪多糖(APS)被制备成黄芪多糖脂质体后是否能够提高其生物活性,用MTT法测定了其对鸡T、B淋巴细胞增殖的影响,以APS溶液和空白脂质体作为对照。结果显示:APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同植物血凝素(PHA)作用均能显著促进鸡T淋巴细胞的增殖,并且在125～31.25μg.mL-1时,效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05);APS脂质体在125～15.625μg.mL-1时无论是单独作用还是协同脂多糖(LPS)作用均能显著促进鸡B淋巴细胞的增殖,并且在31.25μg.mL-1的效果显著优于APS溶液和空白脂质体(P<0.05)。表明...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王晶 商旋 张晓敬 常世民 马爽
研究不同浓度的氯化镉对体外培养的小鼠皮肤细胞存活影响。采用组织块法启动小鼠皮肤细胞的原代培养，胰酶消化法传代培养，利用光镜观察、ＭＴＴ细胞毒性分析、荧光染色和ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳等方法研究镉对小鼠皮肤细胞的毒性作用。结果显示，在３７℃，含２０％胎牛血清的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养条件下，小鼠皮肤组织原代启动第２天即有细胞迁出，为成纤维样细胞形态，生长分裂旺盛，第６天即可长成汇合的细胞单层，并能稳定连续传代。２０～１６０μＭｏｌ／ｌ氯化镉可显著降低体外培养的小鼠皮肤细胞的存活率，具有浓度和时间的依赖性。处理２４和４８ ｈ对肝细胞的半致死率浓度分别为３９．８１和２２．３９μＭｏｌ／ｌ。ＣＤ Ｃｌ２处理导．．．
关键词：
镉 皮肤细胞 细胞培养 细胞凋亡
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王希春 周凡 冯士彬 孟庆娟 李玉 刘芳芳 吴金节
【目的】研究中草药单味及复方提取物对原代培养的小鼠乳腺上皮细胞增殖的影响,旨在为探明中草药治疗奶牛乳腺疾病机制提供试验依据。【方法】采用组织块种植法培养3月龄、分娩后3~5 d的昆明种远交系小白鼠的乳腺组织,采用胰蛋白酶消化法获得相对纯化的小鼠乳腺上皮细胞,并运用SDS-PAGE法进行鉴定。制备5味中草药(重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲、泽兰叶)及治疗奶牛乳房炎用中草药复方提取物,分别作用于对数生长期的乳腺上皮细胞5 d,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)分析细胞活力。【结果】将通过组织块种植法与胰蛋白酶消化法相结合,可得到纯化的有酪蛋白分泌功能的乳腺上皮细胞;中草药重楼、紫花地丁、木芙蓉、半枝莲...
关键词：
中草药 小鼠乳腺上皮细胞 细胞培养 增殖
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李海军 靳木子 张睿彪 杜晨光 刘东军 仓明
【目的】探讨卵丘-卵母细胞复合体(COCs)形态、卵丘细胞凋亡与增殖状态和卵母细胞发育能力之间的相关性。【方法】根据卵胞质均匀程度和卵丘细胞层数等形态指标,对所挑选的未成熟COCs进行分组,随后利用体外受精技术和TUNEL技术,并结合流式细胞仪,评价各组COCs的体外发育能力及其卵丘细胞凋亡和细胞周期差异。【结果】与包被5层以上致密卵丘且卵胞质均质的COCs相比,具有2—5层轻度扩散卵丘与颗粒化卵质特征的COCs显示较好的后续胚胎发育潜力、较高的卵丘细胞凋亡程度和较低的G2-M期细胞比率。【结论】卵丘细胞凋亡程度与未成熟卵母细胞发育潜能呈正相关;COCs形态、卵丘细胞凋亡或者G2-M期细胞比率...
关键词：
牛 胚胎发育 卵丘细胞 凋亡 增殖
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田垒 陈栋炜 季业伟 刘玺 张明徽 陈德坤
【目的】探讨细胞毒性T细胞(CTL)表位肽SIINFEKL浓度和树突状细胞(DC)数量对CD8+T细胞活化和增殖的影响。【方法】用小鼠重组粒细胞集落刺激性生物因子(GM-CSF)和IL-4诱导骨髓细胞来源的DC增殖和分化,将所得成熟树突状细胞(maDC)和SIINFEKL抗原肽,与免疫磁珠法分离的OT-I小鼠CD8+T细胞共培养。用不同质量浓度的SIINFEKL(100,10,1,0.1,0.01和0.001 ng/mL)或不同数量的DC(DC/T比例分别为1/20和1/5)与CD8+T细胞共培养,刺激CD8+T细胞增殖分化。于共培养不同时间收集细胞,流式细胞术测定CD8+T细胞的数量、分裂速...
关键词：
抗原浓度 树突状细胞 CD8+T细胞
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
纪红军 胡进 肖成 牛亚茹 徐银学
[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
汤帅 杨淇 张宇航 唐午阳 郑晓峰 李丕顺
利用短发夹RNA(shRNA)介导的RNA干扰技术构建3种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)亚型基因(Akt1、Akt2、Akt3)敲低的小鼠胚胎干细胞(mESC)系，通过CCK–8法检测细胞活力；反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT–PCR)检测分化相关基因的表达；蛋白质印迹法(WB)检测多能性和分化相关蛋白的表达，研究Akt亚型基因敲低对mESC更新及分化的影响。结果表明：Akt1和Akt2的基因敲低不影响mESC的增殖和分化，但会抑制拟胚体(EB)内胚层和中胚层的形成；Akt2的基因敲低促进EB中后期外胚层的形成；Akt3的基因敲低会减缓mESC的增殖，但不影响多能性蛋白的表达，促进拟胚体中胚层和外胚层的形成。
关键词：
Akt 小鼠胚胎干细胞 增殖 分化
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
汤帅 杨淇 张宇航 唐午阳 郑晓峰 李丕顺
利用短发夹RNA(shRNA)介导的RNA干扰技术构建3种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)亚型基因(Akt1、Akt2、Akt3)敲低的小鼠胚胎干细胞(mESC)系，通过CCK–8法检测细胞活力；反转录荧光定量聚合酶链式反应(qRT–PCR)检测分化相关基因的表达；蛋白质印迹法(WB)检测多能性和分化相关蛋白的表达，研究Akt亚型基因敲低对mESC更新及分化的影响。结果表明：Akt1和Akt2的基因敲低不影响mESC的增殖和分化，但会抑制拟胚体(EB)内胚层和中胚层的形成；Akt2的基因敲低促进EB中后期外胚层的形成；Akt3的基因敲低会减缓mESC的增殖，但不影响多能性蛋白的表达，促进拟胚体中胚层和外胚层的形成。
关键词：
Akt 小鼠胚胎干细胞 增殖 分化
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
易丹 曾申明 呙于明
为研究富含n-3或n-6多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,PUFA)日粮对小鼠卵母细胞体外发育和线粒体功能的影响,把90只14g左右昆明雌鼠随机分为3组,分别饲喂40g/kg豆油日粮,40g/kg鱼油日粮或40g/kg共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)日粮30d;注射雌激素诱导小鼠超数排卵后,检测卵母细胞活性线粒体分布、线粒体钙浓度、膜电位以及脂肪滴分布;利用体外受精技术,评价卵母细胞体外发育能力。结果表明:相对于每个活性线粒体的分布,饲喂鱼油日粮的小鼠卵母细胞内层钙的分布比豆油日粮组有所升高(P<0.05),但是各组卵母...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
高珍珍 张超 景丽荣 胡元亮
[目的] 本试验旨在筛选出增强免疫活性最强的硒化多糖，为研制硒多糖类免疫增强剂提供理论依据。[方法] 体外试验：首先测定7种硒化多糖，硒化当归多糖sCAPS、硒化山药多糖sDOP、硒化党参多糖sCPPS、硒化淫羊藿多糖sEPS、硒化大蒜多糖sGPS、硒化百合多糖sLP、硒化白术多糖sAMP和修饰试剂亚硒酸钠Na_(2)SeO_(3)对小鼠脾脏淋巴细胞的安全浓度，取安全范围内5种浓度的各硒化多糖和Na_(2)SeO_(3)单独或与PHA、LPS同时加入到小鼠脾脏的淋巴细胞培养体系中，测定淋巴细胞增殖率，筛选出增强免疫效果较好的3种硒化多糖sCAPS、sCPPS和sGPS。体内试验：各组小鼠免疫OVA时分别灌服150、100、50 μg·mL~(-1)浓度的sCAPS、sCPPS和sGPS，10 μg·mL~(-1)的Na_(2)SeO_(3) 0.4 mL，免疫对照组和空白对照组灌胃等量生理盐水，每天1次，连续3 d，分别于首免后7、21和35 d每组随机抽取8只摘眼球采血，分离血清，用ELISA试剂盒测定血清IgG、IgM、IL-2、IL-4和IFN-γ含量，HE染色后比较各组小鼠脾脏的组织学变化。[结果] 在体外，单独加入或与PHA、LPS同时加入时，sCAPS、sCPPS和sGPS组的淋巴细胞增殖率均高于或显著高于其他各组(P
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