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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王建华 赵学慧
４种蛋白酶对黑曲霉、米曲霉原生质体稳定性、再生及融合的研究结果表明：蛋白酶用于原生质体灭活前或后保温均显著降低原生质体数量、同时提高原生质体再生率及灭活原生质体融合指数。蛋白酶安全、无毒可以替代常规促融合剂聚乙二醇
关键词：
曲霉 蛋白酶 原生质体 再生 融合
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张琇 孙谧 王清印 李国保
以海洋低温蛋白酶生产菌株YS-9412-130为研究对象,从传代、菌龄、溶菌酶浓度与酶解时间、甘氨酸与EDTA预处理以及稳定剂对该菌原生质体形成与再生的影响进行研究。结果表明,在相同条件下,第一代菌至第五代菌原生质体的形成率分别为86.9%、70.3%、66.8%、63.4%、60.2%,再生率分别为10.5%、18.6%、17.9%、18.2%、17.8%;取该菌对数生长前期、对数生长中后期、稳定期部分菌液制备原生质体,原生质体的形成率分别为72.1%、70.4%、60.5%,再生率为13.4%、18.9%、10.4%;溶菌酶浓度为2.5 mg/mL5、mg/mL1、0 mg/mL、20 m...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王建华 赵学慧
原生质体制备与融合是重要的细胞工程技术,有利于实现远缘遗传物质的直接交换,促进遗传资源创新。本试验用Olympus BHS显微镜观察了曲霉原生质体融合全过程;采用淀粉-麸皮-硫铵培养基、淀粉-麸皮-豆粕培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基(PDA)等研究曲霉融合子及亲株产淀粉酶能力的特点;比较分析了亲株和融合子产淀粉酶性能与温度稳定性;比较研究了曲霉亲株和融合子淀粉酶的淀粉-聚丙烯酰胺非变性垂直平板凝胶电泳特征和各菌株可溶性蛋白质的淀粉-聚丙烯酰胺凝胶电泳特征。结果表明:曲霉原生质体融合过程很快,整个融合过程在5 min之内完成;融合子及亲株产淀粉酶随培养基、培养时间不同而变化;F05融合子在淀粉-麸...
关键词：
曲霉 原生质体融合 淀粉酶 电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
艾云灿 赵学慧 汪履绥
黑曲霉(Aspergillus niger)AMS11和里氏木霉(Trichoderma reesei)QM9414两菌株原生质体形成的缓冲系统均以0.05 mol/L(pH5.8)柠檬酸缓冲溶液为好,渗透压稳定剂则分别以0.4 mol/L MgCl_2和0.6 mol/L NaCl为最佳。产量可达3.1×10~7个/ml。再生稳定荆均以0.6 mol/L蔗糖为最好,再生率可达40%以上。对两菌株形成和再生的3种酶较合适的配比组合(纤维素酶:蜗牛酶:溶茵酶)(mg/ml)分别是(5～10:2.5～5:2.0～2.5)和(3～8:1.5～4:1.5～2)。两者原生质体大小相当,约为5～10μm。...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
甘志波 赵学慧
用PEG促融剂使经硫酸二乙酯灭活的黑曲霉(Aspergillus niger)AMS-11的原生质体与细胞分裂中期的啤酒酵母(Sacchuromyces cerevisiae)RasseⅫ原生质体融合,在选择性培养基上获得了能利用羧甲纤维素作唯一碳源的杂种酵母菌株FASS_1及FASC_1,经测定其DNA量、蛋白质电泳谱带、生长曲线和碳源同化等项目,它们均具有双亲菌株的特征性状。
关键词：
黑曲霉 啤酒酵母 原生质体融合
[期刊] 西南农业学报
[作者]
雷开荣 U.Ryschka E.Klocke
用酶法分离甘蓝下胚轴原生质体和萝卜叶肉原生质体, 对供体原生质体(萝卜) 进行融合前单因素(酶EcoRI) 或双因素复合处理(酶EcoRI+ UV0.035-0.105J/cm 2), 用PEG法诱导甘蓝与萝卜属间非对称性原生质体融合。结果表明,(1)不同处理方法对植株再生率有明显影响,对称性融合植株再生率为8.5% ,非对称性融合植株再生率低3个百分点; 单因素处理植株再生率达11% , 双因素复合处理植株再生率只有2.3% 。在双因素复合处理中,尽管各处理间植株再生率有显著差异, 但紫外线强度与植株再生率间无明显的规律变化; (2) 双因素复合处理再生植株具有较低的相对DNA含量,通道数为...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
龙建友 唐世荣 吴文君
【目的】对No.24菌株及其诱变株Ms-24菌株的原生质体的制备、融合、再生条件及融合子的生物活性进行了研究,探索了秦岭霉素的产量提高与融合条件的关系。【方法】采用荧光染色技术对融合子进行了标记,秦岭霉素含量的测定采用了HPLC法进行。【结果】融合后得到的3株高产秦岭霉素的融合子即为pf77,pf126和pf138菌株,其发酵产物的杀菌活性比原始No.24菌株分别提高了43.48%,60.87%和65.22%。HPLC检测发现,融合子pf77,pf126,pf138菌株发酵产物中秦岭霉素的含量与No.24菌株相比分别提高了36.59%,74.39%和91.46%。【结论】进行原生质体再生时,添...
关键词：
秦岭霉素 原生质体融合 融合子
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
孙玉强
根据增加棉花基因库多样性的迫切需要,棉花改良计划正在转向于多种分子育种技术的应用和资源的利用。丰富的棉花野生种(Gossypiumspp.)是栽培棉遗传改良重要的种质资源和更新资源,并成为宝贵的遗传资源库,野生棉研究利用对栽培棉的遗传改良有着重大的现实和理论意义及潜在的应用
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张伦 刘盈盈 杨玲 洪江 张高
为寻找新型的、高活性的胰蛋白酶抑制剂,将紫花芸豆磨碎乙醚脱脂后制成花豆粉,用pH4.0的稀酸溶液抽提,并在70℃对抽提液热变性15min,然后进行40%～70%饱和度的硫酸铵分级沉淀。对花豆胰蛋白酶抑制剂的粗提条件进行了优化,并探索了不同温度处理对PVTI抑制活性的影响。结果表明:100℃处理60min后,活性丧失约30%,PVTI具有良好的热稳定性。
关键词：
紫花芸豆 胰蛋白酶抑制剂 分离和纯化
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张修军 周启
报道了农抗５１０２产生菌同源菌株９０－１１、ＦＲ－００８及ＷＨ－１相互之间融合研究的前期结果。３菌株原生质体制备的适宜酶解温度和时间均为３２℃和１．０～１．５ｈ，但所需溶菌酶量则有异：９０－１１为２～４ｍｇ／ｍｌ，ＦＲ－００８为６ｍｇ／ｍｌ，ＷＨ－１为２ｍｇ／ｍｌ。将各菌株的原生质体在－２０℃下冻存１个月内的相对再生率可维持在７０％以上，２个月以内仍可达６０％以上。以５０％ＰＥＧ１０００诱导融合各组合的融合频率是，９０－１１×ＷＨ－１为１０－２，ＦＲ－００８×－９０－１１以及ＦＲ－００８×ＷＨ－１均为１０－３。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郝勃 阎淳泰 陈华癸
在相差显微镜下详细地观察了２株黑曲霉在最适条件下形成原生质体及其再生的过程。结果表明，黑曲霉的原生质体均能从菌丝体的顶端及其它部位释放出来。释放的原生质体呈球形，大小不一。大多数原生质体内均能清晰地看见含有１个巨大的液泡。原生质体再生同时存在２种形式：一是先从原生质体产生１个突出物，随后突出物逐渐增大并延伸成１条旋绕的无隔菌丝，继续发展成有隔的正常菌丝；第二种方式是由酵母状细胞短链发育成正常菌丝。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王建华 赵学慧
研究了光照和黑暗条件下，钙离子浓度、处理时间对曲霉原生质体的保护和促再生效应。结果表明：黑暗下钙处理使原生质体数量比对照高，９ｈ处理比对照原生质体数量高达１．４３倍（黑曲霉）和１．６７倍（米曲霉）；而光照下，钙处理反而使原生质体数量比对照低。黑暗下，不同浓度钙处理使黑曲霉原生质体再生率提高１．４７倍到３．４０倍，使米曲霉提高１．０８倍到２．５８倍，二菌株钙促再生的最佳处理时间分别为２ｈ和４ｈ，最大再生率分别为２８．８９％和２９．３７％，比各自对照分别高出２．４０倍和５８．２１％。光照的钙促再生效应比黑暗的为低。
关键词：
曲霉 钙离子 原生质体再生
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
艾云灿 赵学慧 汪履绥
用正交试验比较了菌龄、酶种类及浓度配比、酶解温度和酶解时间４个主要因素，对黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）ＡＭＳ１１和里氏木霉（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａｒｅｅｓｅｉ）ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的影响。结果表明，ＡＭＳ１１和ＱＭ９４１４两菌株原生质体形成与再生的４个因素的合理参数分别是：菌龄１４～１６小时和１８～２０小时；三种酶配比（纤维素酶：蜗牛酶：溶菌酶）（ｍｇ／ｍｌ）为（８：４：２）和（５：２．５：２．５）；酶解温度均为３２℃；酶解时间均为２～３小时。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯潇 张帆 陈颖 成佳欣 岑凯悦 汤晓智
【目的】基于藜麦蛋白Pickering乳液的冻融稳定性，探究其加入到鱼糜蛋白凝胶中提高鱼肉蛋白凝胶冻融稳定性的可行性，拟解决运输存储中温度波动造成鱼糜蛋白凝胶产品质量受损的问题。【方法】制备藜麦蛋白Pickering乳液，分散于鱼糜中并加热制备成蛋白凝胶，然后对鱼糜蛋白凝胶进行3次冻融循环，分别测量冻融前后鱼糜蛋白凝胶的质构、色度和水分分布，测定3次冻融后的汁液流失以及凝胶中的冰晶分布。【结果】藜麦蛋白Pickering乳液添加在提高鱼糜凝胶亮度和白度的同时，抑制了冻融循环引起的色度变化，并且延缓了凝胶在冻融中硬度和咀嚼度的变化速率。藜麦蛋白Pickering乳液的添加对于冻融前鱼糜凝胶的水分分布没有影响，但是显著增加了冻融循环后鱼糜凝胶中不易流动水的比例，减少了自由水的比例，从而减少了鱼糜凝胶冻融后的汁液流失。冰晶结果显示，乳液的添加可以显著降低冰晶的直径，从而减少冰晶对肌肉组织造成的损害以及自由水的生成。【结论】藜麦蛋白Pickering乳液的添加削弱了冻融对凝胶颜色及质构的影响，保持了凝胶的网络结构，提高了鱼糜凝胶的冻融稳定性，保持了冷冻鱼糜产品的品质及营养价值。藜麦蛋白Pickering乳液有望成为新型的抗冻剂应用于冷冻食品中。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李蒙 李铮 李欣 杜曼婷 宋璇 张德权
【目的】肌红蛋白是影响肉色最主要的色素物质,主要存在于肌浆中,其绝对含量和3种肌红蛋白(氧合肌红蛋白、脱氧肌红蛋白、高铁肌红蛋白)间的相对含量决定了肉色。已有研究表明蛋白质的磷酸化可能会通过对糖酵解代谢途径以及肌红蛋白的调控进而负向调控肉色的稳定性,本研究旨在探究磷酸化对肌红蛋白稳定性的影响,进而为通过调控磷酸化水平提高肉色稳定性提供理论依据。【方法】用连二亚硫酸钠还原骨骼肌肌红蛋白纯品,再经超滤除去连二亚硫酸钠。随后采用碱性磷酸酶(AP)体外孵育催化肌红蛋白的去磷酸化反应,采用SDS-PAGE凝胶电泳和
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