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[期刊] 西南农业学报
[作者]
王英明 梅寒 王志敏 徐珑洋 徐亚欧
【目的】为研究垂体GH基因对藏鸡屠宰性能的影响。【方法】以藏鸡为研究对象,利用RT-PCR技术克隆藏鸡GH基因,并进行生物信息学分析,利用荧光定量PCR检测GH基因在藏鸡不同发育阶段脑垂体中的表达谱,并与119日龄藏鸡屠宰性能进行关联分析。【结果】藏鸡GH基因长1029 bp,开放阅读框651 bp,编码216个氨基酸。与原鸡比较,核苷酸同源性为99%,存在7个核苷酸突变位点,不存在氨基酸变异;与火鸡比较,核苷酸同源性为94%,存在25个核苷酸突变位点,有7个氨基酸的差异,且在物种间进化上具有较高的保守性。GH基因在藏鸡81、119、154、210 d 4个发育时期的脑垂体中均存在表达,在81 d时表达量最高,极显著高于其他发育时期(P
关键词：
藏鸡 垂体GH基因 时序表达 屠宰性能
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵强 马友记 李菁华
为了探讨PRLH及其受体基因在绵羊性腺轴中的表达,以绵羊下丘脑-垂体-性腺轴系为研究对象,克隆了PRLH及其受体基因PRLHR,构建了系统进化树,并利用qRT-PCR技术对PRLH及其受体基因在绵羊性腺轴中不同组织的表达差异做了研究。结果表明,绵羊PRLH和PRLHR mRNA核苷酸序列分别为113,237 bp,PRLH基因核苷酸序列与山羊、牛、人、小鼠的同源性分别为96.8%,93.3%,80.3%,74.6%,PRLHR基因与藏羚羊、山羊、牛、人和小鼠的同源性分别为100%,99.3%,97.3%,90.4%,84.4%;PRLH及其受体基因在绵羊的下丘脑、垂体、子宫和卵巢中均有一定量的...
[期刊] 华北农学报
[作者]
许晴 林森 徐亚欧 朱江江 王永 林亚秋
旨在获得藏鸡GEM基因序列,阐明其组织表达和时序表达谱,同时分析基因表达与肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)沉积的关系,为进一步研究藏鸡肉质和脂肪沉积奠定基础。选取1,81,119,154,210日龄健康藏鸡为试验材料,屠宰后分别采集心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腿肌和皮下脂肪组织,提取组织总RNA,利用RT-PCR技术克隆藏鸡GEM基因序列,利用实时荧光定量PCR技术检测该基因在藏鸡不同组织以及不同发育时期胸肌和腿肌的表达情况。结果表明,克隆获得藏鸡GEM基因序列940 bp(Gen Bank登录号:KY747399),其中,CDS为894 bp,5’UTR 24 bp和3’UTR22 bp,编码297个氨基酸,与原鸡、绿头鸭、人和小鼠GEM氨基酸序列相似性较高(83.50%~98.32%);组织表达结果显示,GEM在藏鸡肺组织中的表达水平最高,极显著高于其他组织(P<0.05)。结果表明,GEM基因可能在藏鸡脂质代谢中起重要调控作用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙伟 王鹏 丁家桐 马月辉 关伟军 储明星 李碧春 吴文忠 陈玲
【目的】探讨湖羊肌肉生长抑制素(myostain,MSTN)和生肌调节因子(myogenin,MyoG)基因表达的发育性变化及其与屠宰性状的相关性以及这两个基因表达水平的关联性。【方法】利用RT-PCR分析MSTN和MyoG基因在湖羊早期生长背最长肌肉组织中的mRNA的发育性变化。【结果】湖羊MSTN基因在肌肉中的表达在2日龄时表达水平最低,并随着日龄增加而增加直到60日龄为止,而后随着年龄增加而下降。湖羊MyoG基因在2日龄时表达最低,在30日龄之前随着日龄的增加而增加,然后在30日龄后下降,公羊直到120日龄、母羊直到90日龄为止,然后随着日龄的增加而又增加。MSTN和MyoG基因在湖羊各...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
强巴央宗 张浩 商鹏 纪素玲 王强
为研究藏鸡的肉用开发价值,测定了150日龄藏鸡的产肉性能、肉质指标、氨基酸和肌苷酸含量。结果表明,藏鸡公、母屠体率分别为88.95%和88.74%,半净膛率分别为75.55%和74.65%,全净膛率分别为56.30%和55.34%,胸肌率分别为15.00%和15.97%,腿肌率分别为23.69%和23.09%,胸肌滴水损失分别为2.68%和2.62%,肉色分别为3.52和3.74,剪切力值分别为2.95和3.08 kg,熟肉率分别为72.03%和71.12%,氨基酸质量分数分别为20.67%和19.78%,肌苷酸分别为2.32和2.50 mg/g。与我国其他地方鸡种比较,藏鸡屠宰性能低,但胸肌...
关键词：
藏鸡 产肉性能 肉质 氨基酸 肌苷酸
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
章世元 俞路 王雅倩 刘波 李治学 周联高 严桂芹 汪益峰 林显华
采集200日龄产蛋期新扬州鸡甲状旁腺组织,提取RNA并进行反转录聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物进行T-A克隆、测序。序列测定结果表明:PTH cDNA核苷酸长度为360bp。与GenBank上发表的鸡序列比较,核苷酸同源性为99.6%,在第159位处存在C→A的有意义突变。与从GenBank下载读取的牛、马、人、狗、猫、食蟹猴PTH基因序列进行比较分析,同源性分别为51.4%、50.8%、50.6%、50.3%、50.3%和46.9%。将该基因片段克隆到真核表达载体pCEP4,构建重组质粒pCEP4-PTH,所获重组质粒经过酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确,为利用pC...
关键词：
鸡 PTH 基因克隆 表达载体
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郑尧 陈家长 梁宏伟 王在照
对雌核发育彭泽鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｖａｒ．Ｐｅｎｇｚｅ，Ｐｅｎｇｚｅ ＣｒｕＣｉａｎ ＣａｒＰ，ＰＣＣ）中的ＰＣＣ－ｈｉｒａ进行了克隆，序列分析，并对雌鱼９种组织和１１个发育阶段中的表达进行了研究。结果显示，ＰＣＣ－ｈｉｒａ ＣＤｓ全长３０２８ ｂＰ，编码１００９个氨基酸残基，具有７个典型ＷＤ４０结构域，ＰＣＣ－ｈｉｒａ与鲫ｈｉｒａ具有９９％的同源性，跟其他鲫属鱼具有较高的亲缘关系。ＰＣＣ－ｈｉｒａ分别在孵化后３６和４４ Ｄ达到最高值和最低值，且在雌鱼脑中的含量极显著高于其他８种组织。
[期刊] 华北农学报
[作者]
贾会丽 郭继承 吴欣明 王运琦 刘建宁 方志红 石永红 董宽虎
钙依赖蛋白激酶作为一个关键的信号传导器,通过调控和参与植物体内的代谢途径等方式在植物抵御逆境胁迫过程中发挥着重要作用。为了探索柠条锦鸡儿相关基因的功能,本研究利用同源克隆的方法,从柠条锦鸡儿中克隆了1个CDPK类基因的CDS,命名为CkCDPK。通过测序和生物信息学分析,结果显示,该基因包含1 710 bp的开放阅读框,编码570个氨基酸,分子质量为64.03 ku,蛋白质等电点(PI)为9.12。结构分析显示,CkCDPK含有N端可变区、蛋白激酶区、4个EF手型结构和类似钙调素等结构域。利用实时荧光定量PCR检测了CkCDPK基因在不同逆境胁迫下的表达量,结果显示,NaCl胁迫和干旱胁迫下该基因的表达量呈现出单峰趋势,其中,盐胁迫6 h、干旱胁迫4 h表达量最高,外源ABA诱导下该基因的表达量基本呈逐渐上升趋势。表明该基因可能参与了柠条锦鸡儿的抗逆性调控。构建植物超表达载体pCAMBIA3301-CkCDPK,可为进一步研究CkCDPK基因在柠条锦鸡儿抗逆性调控中的作用奠定基础。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
徐珑洋 梅寒 王英明 王志敏 杨磊 徐亚欧
【目的】为研究POU1F1基因3种剪切体在藏鸡不同的阶段中对藏鸡生长的影响。【方法】以藏鸡为研究对象,采用荧光定量技术,对POU1F1 3种剪接体在藏鸡的4个时期(81、119、154、210 d)垂体、腿肌和胸肌中的表达量进行检测,并与其生长性能进行关联分析。【结果】POU1F1基因的3个剪接体在4个时期中均于119日龄时有一较高值,之后随日龄增加而降低;且表达水平POU1F1-β>POU1F1-α>POU1F1-ω;在垂体、胸肌和腿肌中,垂体中表达远高于其他2个组织;在垂体中,雌性的表达量高于雄性。藏
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙培明 吴晓东 赵永刚 刘雨田 王志亮 鲍恩东
【目的】制备高特异性的肉鸡热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)单克隆抗体,研究肉鸡HSP70与热应激损伤的关系。【方法】利用RT-PCR方法扩增肉鸡HSP70mRNA,将其扩增产物克隆到PGEM-T Easy载体和原核表达载体pET-28a(+)上,进一步转化至大肠杆菌BL-21中,用IPTG诱导表达重组肉鸡HSP70。以纯化的重组肉鸡HSP70制备多克隆抗体,免疫印迹分析说明重组肉鸡HSP70具有很好的免疫原性。以纯化的重组肉鸡HSP70免疫Balb/c小鼠,通过淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体。【结果】获得2株分泌肉鸡HSP70单克隆抗体的杂交瘤细胞株,进...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
朱文旭 张宏叶 王涛 王丹 张红燕 尹绍武 陈树桥 周国勤
生长激素/胰岛素样生长因子-轴(growth hormone/insulin-like growth-axis,GH/IGF-轴)是调控鱼类生长的主要内分泌轴线。为探讨生长相关基因GHR、IGF-2对河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)生长发育的调控机制,采用cDNA末端快速扩增(RACE)和实时荧光定量PCR等技术,对河川沙塘鳢的GHR、IGF-2基因进行了克隆和表达模式分析。研究结果显示:河川沙塘鳢GHR基因的cDNA全长序列为2 179 bp,开放阅读框为1 830 bp,共编码609个氨基酸,IGF-2基因的cDNA全长序列为1 586 bp,开放阅读框642 bp,共编码213个氨基酸。采用qRT-PCR方法检测了GHR、IGF-2基因在9个不同组织(脑、肝、心、肌肉、脾、肠、性腺、鳃、肾)和8个胚胎不同发育时期(受精卵期、桑椹胚期、原肠胚期、神经胚期、体节期、口裂期、出膜后1 d、出膜后3 d)的表达情况。结果表明:IGF-2和GHR基因在所检测的9种组织中均有表达,其中以肝脏、肌肉、性腺、脑中的表达量较高,在胚胎发育阶段GHR和IGF-2基因表达呈先上升后下降的趋势,在原肠胚期表达量较高,表明其在胚胎发育过程中发挥重要作用。qRT-PCR进一步比较了雌、雄河川沙塘鳢GHR和IGF-2基因在不同生长发育阶段(90、150、210、270、330 d)脑、肝、肌肉mRNA的表达量,结果表明:各时期雄鱼GHR和IGF-2基因在肝组织中表达量均显著高于雌鱼,肌肉和脑GHR基因mRNA的表达量则无显著差异。而IGF-2基因则仅在雌、雄鱼210 d的脑和150、210 d的肌肉存在显著性差异,推测肝GHR和IGF-2基因mRNA表达的雌雄差异是河川沙塘鳢雌雄生长差异的主要原因之一。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
付连军 刘磊 张磊 贺元欣 莫索 王会岩
【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭亚格 刘佳隆 齐志颖 何雷 贾艳艳 陈建 陈松彪 廖成水 丁轲 余祖华
【目的】克隆鸡纤维蛋白原样蛋白2(fibrinogen-like protein 2,FGL2)基因,并进行生物信息学分析和原核表达,为鸡FGL2蛋白的功能研究奠定基础。【方法】采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)技术扩增鸡FGL2基因,克隆至pMD19-T载体,测序后对鸡FGL2基因及其编码的蛋白进行生物信息学分析。构建原核表达质粒pET-32a-FGL2,将其转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析。【结果】成功克隆了鸡FGL2基因的CDS区,序列全长为1 320 bp,编码439个氨基酸。生物信息学分析显示,鸡FGL2氨基酸与火鸡、雉鸡、珍珠鸡、鹌鹑等禽类的同源性高,达96%以上;与哺乳类动物的同源性较低,其中与犬的同源性仅有64.8%。FGL2蛋白由439个氨基酸组成,理论分子质量为50.24 ku,分子式为C_(2 221)H_(3 451)N_(615)O_(673)S_(22),理论等电点(pI)为8.63,为不稳定的亲水性分泌型蛋白,无跨膜区。成功构建了原核表达质粒pET-32a-FGL2,其在大肠杆菌BL21(DE3)可表达以包涵体形式为主的FGL2融合蛋白,分子质量约为70 ku。【结论】成功克隆出了1 320 bp的鸡FGL2基因,明确了其编码蛋白的生物学信息,经诱导表达后获得FGL2重组蛋白。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
汪阳东 李春秀 齐力旺 张守攻
以我国重要的生物能源灌木——中间锦鸡儿枝叶和种子为材料,根据GenBank中已经发表fad2基因的同源序列,利用PCR技术克隆得到基因片段。在GenBank中Blast(GenBank登录号AY957393)所得基因片段和同属豆科的Glycine max Gmfad2-2a同源性高达88%,位于fad2基因编码区中部。将所得片段经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI121,构建了反义表达载体pBI121fad2,并利用农杆菌介导法转入烟草叶片,获得了抗卡那霉素和氨苄青霉素的再生烟草植株。初步分析结果表明:与对照烟草相比,转基因烟草种子脂肪酸含量没有明显差异,而亚油酸则减少10.3%...
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴茵茵 温思怡 韩卓然 孙敬锋
为了分析半滑舌鳎突触体相关蛋白29基因(SNAP29)的分子生物学特征、组织分布特点以及感染海藻希瓦氏菌后的时序表达规律，通过RT-PCR、生物信息学网站、qRT-PCR技术对半滑舌鳎SNAP29基因进行了扩增、生信分析和表达特征研究。结果表明，半滑舌鳎SNAP29基因CDS区长度为789 bp,编码262个氨基酸，理论等电点(pI)为5.39,分子质量为29.717 81 ku,有2个典型的SNARE结构域；二级结构主要由α-螺旋和无规卷曲组成，二级结构和三级结构基本一致；多序列比对结果显示，半滑舌鳎与欧洲鲈鱼SNAP29基因相似性最高；SNAP29基因在健康半滑舌鳎所测的各组织中均有表达，在鳃组织中表达最高，在脑组织中表达量最低；利用海藻希瓦氏菌人工感染半滑舌鳎后，SNAP29基因在肠道组织、心脏组织和脑组织中表达量主要呈现上调趋势，在肝脏、头肾、脾脏组织中主要呈现下调表达，SNAP29基因在健康半滑舌鳎组织中均有表达；海藻希瓦氏菌感染半滑舌鳎的肠道、脑、心脏、肝脏、头肾、脾脏组织中SNAP29基因呈现差异表达。综上，SNAP29可能参与机体免疫应答过程或病理生理过程。
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