以薤白鳞茎基部组织为外植体,运用二次回归通用旋转组合设计不同植物外源生长物质培养基,进行愈伤组织诱导.结果表明,培养基中添加的2,4-D(x1),NAA(x2)和6-BA(x3)3种植物生长调节剂,2,4-D起决定作用,愈伤组织诱导率与三者之间的回归方程为:y=23.727+3.482 x1-2.195 x2+2.322 x3+2.706 x12+1.344 x22-1.272 x32-7.438 x1 x2-11.962 x1 x3-1.187 x2 x3.经计算机模拟推测,薤白愈伤组织最佳诱导培养基为:MS+2,4-D(2.212～2.317)mg/L+NAA(0.842～1.002)mg...

【目的】以烟草(NC-82)为试验对象,运用组织培养方法,通过对苯磺隆对烟草愈伤组织抗性发展的影响、对愈伤组织生长的影响、对愈伤组织分化率的影响、对愈伤组织乙酰乳酸合成酶活性的影响和抗性筛选再生烟草苗抗性潜势进行较系统的研究,以期对ALS抑制剂类除草剂的抗性研究和科学合理使用以延缓抗药性的发生,以及对作物的抗性育种提供一定的理论依据。【方法】将烟草诱导产生的胚性愈伤组织在含有不同剂量磺酰脲类除草剂苯磺隆的MS培养基上继代培养进行抗性诱导,并对愈伤组织的生长情况及其ALS对苯磺隆敏感性进行跟踪检测;对抗性筛选再生烟草苗进行抗性检测。【结果】随着培养代数的增加,愈伤组织对苯磺隆的抗药性逐渐增强,经...

以6个小麦品种(郑麦9023、郑麦366、周麦18、矮抗58、花培5号、花培8号)幼胚为外植体,研究了不同基因型间幼胚愈伤组织诱导、分化成苗以及对草甘膦敏感性的差异。结果表明,品种间出愈时间和初始分化时间有明显差异,花培5号和花培8号的出愈和初始分化时间最短,成苗率较高,可作为优良的受体材料。设置0,1,2,3,4 mmol/L5种草甘膦浓度研究不同小麦品种对草甘膦的敏感性,结果显示,小麦幼胚愈伤分化期与诱导筛选阶段相比,褐化死亡较明显,是理想的筛选时期。草甘膦浓度为3 mmol/L时,郑麦9023、周麦18、郑麦366的分化率与对照相比呈现显著差异,而与4 mmol/L时这3个品种的分化率无...

对福建龙眼的主要栽培品种、地方品种及特异株系共51份种质的幼胚进行培养,诱导胚性愈伤组织作为种质资源离体保存的材料,并进行限制生长保存试验.结果表明:MS+2 mg.L-12,4-D培养基适用于绝大部分品种的不同直径的龙眼幼胚胚性愈伤组织的诱导,平均诱导率为48.3%;直径2-4 mm的幼胚最适宜于胚性愈伤组织诱导.在添加1 mg.L-1活性炭的培养基上进行为期7-10 d的过渡培养,能减少直径6 mm的幼胚因褐变导致的死亡,从而提高愈伤组织诱导率.龙眼胚性愈伤组织在常规继代培养中的周期为20 d左右,且品种间的差异较大.在MS+1 mg.L-12,4-D培养基中附加20 g...

目的沙田柚(Citrusgrandis[L.]Osbeckcv.Shatian)是中国的特有品种,其愈伤组织难以诱导。为进一步进行细胞工程研究,本研究通过与其它品种杂交的方法获得杂种胚性愈伤组织。方法以沙田柚为母本,用体细胞杂种橘柚+无酸甜橙([C.reticulataBlanco×C.paradisiMacf.]cv.Nova+C.sinensis[L.]Osbeckcv.Succari)为父本进行杂交,90d后将幼胚取出,在MT+ME(麦芽提取物,500mg·L-1)和MT+GA3(1mg·L-1)两种固体培养基上培养。结果幼胚培养约5个月左右,在两种培养基上从胚状体和幼小植株的下胚轴处都...

以F2代甘蓝品种P 192和P 194为材料,研究了激素、温度、光照、活性炭及取材部位对甘蓝花药愈伤组织诱导培养的影响。结果表明,2,4-D在甘蓝花药诱导培养中具有重要作用,各激素组合中以2.0 m g/L 2,4-D+2.0 m g/L KT处理的诱导率最高,达到41.67%;在甘蓝花药培养前对花蕾同时进行低温预处理3 d、高温预培养3 d和初期暗培养处理3 d的效果较任何一种单独处理效果好,其诱导率为25.00%;添加活性炭的诱导率较不添加活性炭略低;同一生长时期同一植株的不同部位的材料对甘蓝花药诱导培养无显著影响。

以湖南野生假俭草Eremochloa ophiuroides为材料,采用幼嫩的茎段为外植体诱导愈伤组织。结果表明:附加2.0 mg/L 2,4—D+0.4 mg/L 6—BA的MS培养基上,假俭草愈伤组织诱导率最高,达64.6%;最佳分化培养基为MS+0.08 mg/L NAA+0.8 mg/L 6—BA+500 mg/L CH,假俭草愈伤组织分化率达95.0%;1/2 MS+NAA0.1mg/L+IBA0.5 mg/L诱导丛生芽的生根效果最佳。

研究了卡那霉素、潮霉素对浙江红山茶、大花红花油茶愈伤组织的生长及对攸县油茶幼苗叶片诱导愈伤的影响,确定作为选择压力的卡那霉素质量浓度为50～60mg·L-1,潮霉素为25～30mg·L-1。在3种抑菌性抗生素中,羧苄青霉素促进愈伤组织诱导,对愈伤组织的生长没有影响,头孢霉素则有抑制作用,而羟氨苄青霉素轻微抑制愈伤组织的生长,但对愈伤组织的诱导影响不大。考虑到抑菌效果,适于在转基因研究中使用的羧苄青霉素的抑菌质量浓度为250mg·L-1,羟氨苄青霉素为125mg·L-1。

由于不同植物不同外植体对抗生素的反应不同,在进行国槐农杆菌介导的遗传转化研究之前,必须对新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)有抗性的抗生素种类及其使用浓度进行探讨.结果表明,卡那霉素在浓度达到150mgL时仍然没有完全抑制国槐叶片和茎段的生长;而遗传霉素在低浓度下对国槐愈伤组织的诱导和生长的抑制作用较卡那霉素明显.随着遗传霉素浓度的增加,愈伤组织形成的频率降低,外植体的死亡率上升.当遗传霉素的浓度超过10mgL时,叶片和茎段愈伤组织的诱导和生长已完全受到抑制.另外,研究发现不同外植体对遗传霉素的敏感程度不同,茎段较强,叶片稍弱茎段的抗生素致死浓度在8～10mgL之间,叶片的抗生素致死浓度8mgL左...

【目的】比较不同抗褐化剂减轻福建柏组织培养过程中褐化现象的效果,以提高福建柏愈伤组织培养的增殖分化能力。【方法】以福建柏鳞叶和茎段为外植体,通过单因素试验,研究0.0～2.5 mg/L NAA和2,4-D及0.0～3.0 mg/L IBA对愈伤组织诱导率与生长状态的影响;以福建柏茎段为外植体,采用单因素和多因素组合试验,研究100～2 000 mg/L聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、100～1 000 mg/L活性炭(AC)和V_C以及不同质量浓度V_C与AC组合,对愈伤组织污染率、死亡或褐化率及诱导率的影响;以诱导的愈伤组织为材料,采用单因素试验,研究100～1 000 mg/L PVPP、100～300 mg/L V_C、200～1 000 mg/L AC、30～100 mg/L V_B对愈伤组织增殖生长量、增殖率、褐化率及PPO、POD活性的影响。【结果】(1)不同质量浓度NAA、2,4-D和IBA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率总体高于茎段,各生长素对福建柏鳞叶和茎段愈伤组织的诱导率均表现为NAA>IBA>2,4-D,所有处理中以1.0 mg/L NAA对福建柏鳞叶愈伤组织的诱导率最高,为83.33%;以0.5 mg/L NAA对茎段愈伤组织的诱导率最高,为61.11%;愈伤组织生长状态和抗褐化效果优劣依次为NAA、2,4-D、IBA。(2)仅100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理的愈伤组织污染率低于不添加抗褐化剂的对照;死亡或褐化率仅500 mg/L PVPP处理与对照相同,均为0.00%,其余处理均高于对照;诱导率则以不同质量浓度PVPP、1 000 mg/L V_C、100 mg/L V_C+200 mg/L AC处理与对照相当或高于对照,其余处理均低于对照;愈伤组织生长状态总体以PVPP处理表现最优。(3)仅300 mg/L PVPP、200和400 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率高于对照,增殖生长量仅100和200 mg/L PVPP、100 mg/L V_C、200 mg/L AC处理高于对照;所有处理中以200 mg/L AC处理的愈伤组织增殖率和增殖生长量最高,分别为70.00%和10.07 g;各抗褐化剂对福建柏愈伤组织增殖效果的优劣依次为PVPP、AC、V_C、V_B。(4)不同抗褐化剂处理的愈伤组织褐变率均呈先增加后趋于稳定的变化趋势,但变化幅度存在显著差异;各抗褐化剂的抗褐化效果优劣依次为AC、PVPP、V_C、V_B。(5)不同质量浓度PVPP、V_C、AC处理对福建柏愈伤组织PPO和POD活性的影响具有显著差异,但各处理PPO活性均与对照无显著差异,POD活性以500 mg/L AC处理显著高于其他处理。【结论】在福建柏愈伤组织诱导阶段,愈伤组织的褐化与生长素种类有关,生长素NAA、2,4-D适用于福建柏愈伤组织的诱导,IBA诱导的愈伤组织容易褐化,添加适量抗褐化剂能减少愈伤组织的褐化情况。在愈伤组织增殖培养阶段,适宜质量浓度的PVPP、AC作为抗褐化剂能有效减缓福建柏愈伤组织的褐化进程,保持愈伤组织的正常增殖生长,但高质量浓度的抗褐化剂会抑制愈伤组织的生长。

通过不同外植体、基本培养基、暗培养、激素对小红参愈伤组织诱导和分化的试验研究,结果表明诱导小红参愈伤组织产生的最佳条件为:以真叶和顶芽(或侧芽)为外植体,在MS+BA 0.2 mg/L+NAA 3.0mg/L培养基上,进行暗培养,愈伤诱导率达95%。芽形成的愈伤组织组织在MS+BA 5.0+NAA 1.5~2.0中均能分化出幼苗,分化率达100%,但叶形成的愈伤组织未能分化出苗。

　采用杜仲优树的幼叶、嫩茎及种子无菌苗的下胚轴、子叶、真叶、根为外植体,以B5和MS为基本培养基,添加1.0mg/LNAA和0.3mg/LBA,进行了不同外植体种类、外植体大小、试验接种方式、外植体采样时间、光照条件、培养基pH值共6种因素对杜仲愈伤组织诱导的影响试验。结果表明,在杜仲愈伤组织诱导中,田间材料幼叶取样时间以3月中旬为好,幼茎的取材时间以4月中旬以前最佳;无菌苗以下胚轴、子叶、真叶诱导效果较好;诱导愈伤组织的培养基pH值以6.3较适宜;培养室的光照条件以12h光照、12h暗培养较有利于愈伤组织诱导;茎段的大小和接种方式以0.7cm长度横放方式诱导效果较好。

为了探究3种激素不同配比对甜荞愈伤组织诱导的影响,筛选出高效诱导甜荞愈伤组织的最佳激素配方,以甜荞幼嫩茎段为外植体,运用正交试验研究2,4-D,6-BA和KT 3种激素对其茎段愈伤组织诱导的影响。结果表明,3种激素均能促进甜荞愈伤组织的产生,其中以生长素2,4-D对甜荞茎段愈伤组织的诱导影响最为显著,诱导甜荞茎段愈伤组织的最佳培养基配方为MS+2,4-D2.0 mg/L+6-BA1.0 mg/L+KT0.5 mg/L。

冬青属植物种子由于坚硬的种皮和未成熟合子胚的双重休眠,具有隔年发芽的特性,为了克服远缘杂交不亲和性,获得远缘杂交品种,打破种子休眠,缩短其育种周期,采用组织培养技术进行直立冬青种苗的快速繁殖。为了建立直立冬青愈伤组织诱导及分化体系,以直立冬青幼胚为外植体材料,采用单因素试验,通过对愈伤组织诱导培养基、不同植物生长调节剂种类及质量浓度、不同采种时间,研究影响直立冬青愈伤组织诱导和分化的条件因素。结果表明:1)基本培养基并不影响直立冬青未成熟合子胚的愈伤组织诱导,而果实的采种时间以及植物生长调节剂对直立冬青未成熟合子胚愈伤组织的诱导起着重要作用;2)当在基本诱导培养基1/4 MS+3%蔗糖+0.65%琼脂上添加生长素2,4-D 0.5～2.0 mg/L或者NAA 1.0 mg/L和2.0 mg/L时,最有利于未成熟合子胚愈伤组织的诱导,而细胞分裂素单独使用时,对未成熟合子胚愈伤组织的诱导不能起到积极作用;3)在培养基为1/4MS+3%蔗糖+0.65%琼脂+0.5 mg/L 2,4-D上时未成熟合子胚的分化率最高,达70.37%;在添加2.0 mg/L ZT的培养基上,其分化率最高,达到58.15%。

以成熟合子胚为外植体,用完全随机、正交设计等试验方法加之组培技术来研究影响华北落叶松(Larix princi-pis-rupprechtii)胚性愈伤组织诱导的几种主要因子。结果表明:诱导胚性愈伤组织过程中的最佳灭菌方式为2%Na-ClO灭菌30 min,剥皮、去胚乳处理。其中污染率和NaClO的灭菌时间呈负相关:NaClO灭菌时间越长,污染率越低。诱导胚性愈伤组织的最佳琼脂浓度为4 g·L-1,且过高和过低的琼脂浓度不仅降低了其诱导率,提高了愈伤组织的褐化水平,也影响了外植体的发育形态。外源激素的正交试验结果表明:2,4-D是主要影响因子,对诱导率的影响显著,其次是KT,最后是6-BA。最...