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[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 陈赞谋  戚晓鸿  张豪  吴珍芳  刘德武  
用实时荧光定量PCR方法研究了蓝塘猪和长白猪1、27、90、150和180日龄阶段脂肪组织中leptin基因mRNA和下丘脑中leptin受体基因mRNA的变化,并对2个品种不同生长阶段血液中leptin含量的变化规律进行了探讨。结果表明:(1)蓝塘猪180日龄时皮下脂肪中leptin基因表达量显著高于其它各阶段,而与长白猪相比,蓝塘猪除1日龄低于长白猪外,其它各个阶段均高于长白猪,180日龄两者差异极显著;长白猪各阶段间差异不显著;(2)蓝塘猪180日龄时下丘脑中leptin受体基因的表达量显著高于其它各阶段,长白猪180日龄时最高,且显著高于1日龄和27日龄,蓝塘猪与长白猪1日龄时差异显著...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 许月园  齐晓龙  候晔  赵云霞  栾宇  周焕焕  赵书红  李新云  
【目的】通过分析蓝塘猪和长白猪生长发育过程中品种间骨骼肌组织差异表达基因及顺式天然反义转录本(cis-natural antisense transcripts,cis-NATs),并以此为基础进行整合分析,探索cis-NATs调控猪骨骼肌生长发育的分子机理。【方法】使用差异表达分析鉴定蓝塘猪和长白猪胚胎期35 d至出生后180 d共10个时间点品种间差异表达基因及cis-NATs(|log2FC|≥1且FDR<0.01);然后通过功能富集分析注释出差异表达基因及cis-NATs对应的正义基因主要参与的GO生物学过程(P<0.01)及KEGG通路(P
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 李发弟  夏东  陈杰  赵茹茜  
随机选取0、3、20、30、90、120和180日龄二花脸公猪和大白公猪各4头,用相对定量RT-PCR法研究睾丸组织中生长激素受体(GHR)基因表达的发育性变化。结果表明,二花脸猪与大白猪睾丸GHR mRNA表达的发育模式不同,二花脸猪GHR mRNA相对表达量从0到30日龄逐渐上升,在90和120日龄呈阶段性降低(P
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 赵鸿昊  李学华  曾聪  王卫民  董在杰  高泽霞  
应用荧光定量PCR方法检测团头鲂lePtin及其相关基因—瘦素受体(lePtin ReCePtoR,lePtin-R)和瘦素受体重叠转录产物类似物1基因(lePtin ReCePtoR oveRlaPPing tRansCRiPt like-1,lePRotl-1)在胚胎发育早期及成鱼各组织的表达量。结果显示,3个基因在团头鲂成鱼所有检测组织中均有所表达,表明3个基因在团头鲂机体中具有多重生理功能。早期发育过程中的表达量结果显示lePtin-R和lePRotl-1基因在胚胎阶段的表达水平变化趋势一致,而lePtin在破膜后5d前一直处于较低并呈波动性变化;出膜后12d时lePtin-R和leP...
[期刊] 水产学报  [作者] 张雅星  王滨  柳学周  徐永江  史宝  姜燕  崔爱君  张正荣  孙冉冉  
根据半滑舌鳎lepa和lepb编码氨基酸序列合成开放阅读框ORF肽段。利用原核表达载体pEQ30成功构建了半滑舌鳎lepa/pQE30和lepb/pQE30重组质粒,分别转化至大肠杆菌M15后,经IPTG诱导获得了N端含6个组氨酸的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。获得的重组蛋白大小均为16 ku,37°C下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h后目的蛋白表达量最高,主要以包涵体形式存在。检测半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白浓度分别为0.3和0.25 mg/mL。Western blot免疫印迹和质谱分析表明,获得的LepA和LepB重组蛋白均具有免疫活性且序列正确。Ni2+-NTA亲和层析柱纯化可获得高纯度的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白。离体孵育实验表明,获得的半滑舌鳎LepA和LepB重组蛋白能显著抑制半滑舌鳎下丘脑lepa、lepb和gnrh3 mRNA的表达水平,表明获得的重组蛋白具有明显的生物活性。研究结果可为探究leptin在半滑舌鳎生长发育中的调控机制提供重要参考。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 邵康  周杰  吴小雪  盛晟  殷宗俊  舒宝屏  罗联辉  
为探讨皖南花猪卵巢组织脂联素受体mRNA与雌二醇(E2)合成相关因子mRNA表达的发育性变化及其相关性,用ELISA法测定0、30、45、90和180日龄(n=5)皖南花猪雌性仔猪血液脂联素(Adp)和E2水平,荧光实时定量PCR法检测卵巢组织脂联素受体1、2(adiponectin receptor 1,2;AdpR1,AdpR2)和卵泡刺激素受体(FSHR)、芳香化酶P450(aromatase P450arom)基因CYP19 mRNA的表达水平。试验结果显示:雌性仔猪血液E2质量浓度、卵巢组织AdpR1、AdpR2和FSHR mRNA表达均有显著或极显著的发育性变化(P<0.05或P<...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 王继英  王彦平  郭建凤  王怀中  林松  张印  武英  
【目的】中国地方猪种在抗病性和免疫力方面优于国外猪种,但是对中外猪种抗病力差异的遗传基础和免疫机理却了解甚少。有推测不同品种猪对疾病的抵抗力不同可能在细胞因子和受体的表达水平上有所反映。本研究以抗病力强的大蒲莲和抗病力相对较弱的长白猪的断奶仔猪为研究对象,对6个具有重要功能的细胞因子(促炎症细胞因子(IL8和TNFα),抗炎症细胞因子(IL10),干扰素调节因子(IRF3)和干扰素(IFNA和IFNG))和1个最具代表性的模式识别受体(TLR4)基因在大蒲莲和长白仔猪群体外周血液中的基因表达量进行检测,并对各基因进行品种和母猪效应分析,为了解中外不同猪种的免疫水平奠定基础。【方法】采集大蒲莲(...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 樊明欣  雷治海  李庆梅  王红星  
用原位杂交与免疫组织化学相结合的方法研究了 5头三元杂交仔猪前脑内leptin长型受体mRNA与神经肽Y(NPY)免疫反应阳性物质的共存关系。实验结果表明 ,leptin长型受体mRNA和NPY免疫反应阳性神经元分布于下丘脑漏斗核和前室周核、海马、杏仁核及大脑皮质。上述结构内一些表达leptin长型受体mRNA的神经元也含有NPY免疫反应阳性物质 ,即leptin长型受体与NPY共存于同一神经元内。提示leptin可能通过下丘脑漏斗核和室周核以及边缘系统的海马和杏仁核 ,甚至大脑皮质中表达leptin长型受体mRNA的NPY免疫反应阳性神经元调节动物的摄食、能量代谢、生长和繁殖等活动。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 王配  李罗刚  张霞  王淑燕  霍海龙  曾日彬  刘民  王雪飞  霍金龙  
为探讨猪雄激素受体(Androgen receptor,AR)基因的序列、结构、表达和功能,以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)睾丸组织为材料,用RT-PCR技术获得猪AR基因cDNA序列,进行生物信息学分析,应用荧光定量技术明确其mRNA的多组织表达特征。结果表明:BMI AR基因cDNA长3 257bp(GenBank登录号:KU705631),包含2 688bp的全长编码区,位于猪X染色体,含有9个外显子和8个内含子;推导出的BMI AR蛋白含有1个核定
[期刊] 华北农学报  [作者] 张志远  张继希  徐红运  刘肖萍  卢晓艳  段二珍  夏平安  崔保安  
应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8 000。Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。...
[期刊] 华北农学报  [作者] 杨国伟  吴赛辉  马红  刘娣  
采用RT-PCR方法对大白猪的RXRβ基因在1,90,180,270和360日龄的心、肝、胃、脾、肾、肺、大肠、小肠、肌肉、子宫、卵巢共11个组织的表达情况进行了研究。结果表明,RXRβmRNA在大白猪的脾脏、子宫和卵巢中持续表达,1日龄时表达的组织最多且表达水平较高,但该基因在所检的11个组织中存在明显的时间和空间变化。
[期刊] 华北农学报  [作者] 张玉杨  张改平  乔松林  郭成留  
利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR及双酶切鉴定:扩增出901 bp的PCR产物;KpnI/EcoR I双酶切,切出5 376和901bp DNA片段,表明重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ构建成功。然后脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRII配体亲和特性。
[期刊] 水产学报  [作者] 李勇  王宝杰  郭振宇  王雷  
Leptin is a new obese gene (ob) product in animal, which related with feed intake, energy balance, lipid metabolism, reproduction and so on. The advances were summarized on structure, secretion and function of leptin. The effects and regulation of energy nutrient on the expression level of leptin we...
[期刊] 中国农业科学  [作者] 陈磊  王金勇  李学伟  刘良  
【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B(cathepsin B,CTSB)和半胱氨酸蛋白酶抑制素B(cystatin B,CSTB)在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0~5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 刘华珍  彭克美  
leptin是肥胖基因 (obesegene ,OB基因 )的蛋白产物 ,具有广泛的生物学功能。据现有研究发现 ,leptin具有参与调节摄食、能量代谢、激素分泌、生长、生殖和免疫等过程的功能。leptin通过其受体发挥调节作用。笔者综述了leptin的受体、生物学功能、调控动物体重的作用机理及leptin抵抗。
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