- 年份
- 2024(4153)
- 2023(5714)
- 2022(4812)
- 2021(4287)
- 2020(3686)
- 2019(8297)
- 2018(8321)
- 2017(14619)
- 2016(8612)
- 2015(9870)
- 2014(9836)
- 2013(9432)
- 2012(9121)
- 2011(8191)
- 2010(8150)
- 2009(7407)
- 2008(7320)
- 2007(6750)
- 2006(5962)
- 2005(5384)
- 学科
- 济(25984)
- 经济(25936)
- 管理(20058)
- 业(16451)
- 企(13091)
- 企业(13091)
- 学(12161)
- 方法(10464)
- 数学(8756)
- 数学方法(8597)
- 中国(8415)
- 农(8136)
- 制(7693)
- 财(7688)
- 体(6707)
- 理论(5887)
- 贸(5690)
- 贸易(5686)
- 业经(5639)
- 易(5548)
- 银(5517)
- 融(5476)
- 金融(5469)
- 银行(5462)
- 地方(5396)
- 行(5262)
- 农业(5114)
- 教育(4628)
- 和(4413)
- 环境(4360)
- 机构
- 大学(121662)
- 学院(120797)
- 研究(52259)
- 科学(39367)
- 农(39323)
- 济(38482)
- 中国(37587)
- 经济(37384)
- 管理(34992)
- 农业(32079)
- 所(30810)
- 理学(29268)
- 理学院(28756)
- 京(28605)
- 研究所(28534)
- 业大(28038)
- 管理学(27674)
- 管理学院(27499)
- 中心(23157)
- 江(20734)
- 省(20715)
- 室(20433)
- 农业大学(20186)
- 技术(19268)
- 财(19117)
- 院(18981)
- 业(18456)
- 实验(18388)
- 北京(17800)
- 实验室(17753)
- 基金
- 项目(85856)
- 科学(63722)
- 基金(59645)
- 家(57926)
- 国家(57487)
- 研究(52534)
- 科学基金(45171)
- 省(35767)
- 自然(33578)
- 自然科(32743)
- 自然科学(32727)
- 自然科学基金(32125)
- 划(31338)
- 基金项目(30518)
- 社会(28851)
- 社会科(27062)
- 社会科学(27054)
- 资助(25415)
- 教育(24527)
- 计划(21321)
- 重点(20757)
- 科技(20306)
- 编号(19762)
- 发(18480)
- 科研(17637)
- 创(17439)
- 部(17087)
- 成果(17085)
- 专项(16677)
- 农(16599)
共检索到192704条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 华北农学报
[作者]
钟雪晴 叶德晓 毛玉梅 付鸣佳 杨志海
生物体中接受蓝光信号的因子为蓝光受体蛋白。为了揭示蓝光受体蛋白在蛹虫草中的存在形式,将蛹虫草蓝光受体基因Cmwc-1和Cmwc-2的部分序列构建在原核表达载体p ET-41a(+)中,在大肠杆菌中进行表达。以所表达的融合蛋白作抗原制备抗体,并由Western Blotting对蛹虫草菌丝体和子实体分别进行分析检测。结果表明,获得了高效价的蛹虫草蓝光受体蛋白Cm WC-1和Cm WC-2的抗体。经过Western Blotting分析,在蛹虫草菌丝体和子实体中检测到Cm WC-1有42 ku (Cm WC1-42)和48 ku (Cm WC1-48) 2种蛋白质存在形式,其中在菌丝体中主要以Cm WC1-48为主,Cm WC1-42的相对量较少;而在子实体中主要以Cm WC1-42为主,没有检测到Cm WC1-48。在菌丝体和子实体中检测到Cm WC-2有相同的50 ku(Cm WC2-50)蛋白质存在形式。结果表明,在Cm WC-1和Cm WC-2复合物行使生物功能过程中,Cm WC-1在菌丝体和子实体中分别产生了差异性降解,而Cm WC-2维持稳定。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李琴 毛玉梅 付鸣佳 沈俊良 金华燕 钟雪晴
采用ＲＴ–ＰＣＲ克隆蛹虫草中蓝光受体基因ＣｍｗＣ–１和ＣｍｗＣ–２。结果表明，ＣｍｗＣ–２基因序列的翻译产物Ｃｍ ｗＣ–２中存在１个ＰＡＳ结构域和１个锌指结构域。实时荧光定量ＰＣＲ结果显示，蛹虫草菌丝体ＣｍｗＣ–１和ＣｍｗＣ–２基因的表达量分别在蓝光照射后６ ｈ和２ ｈ达到峰值。子实体形成不同阶段ＣｍｗＣ–１和ＣｍｗＣ–２的相对转录量都有较大差异，生长５０ ｄ时蛹虫草子实体不同部位的ＣｍｗＣ–１表达主要在子实体的中下段，ＣｍｗＣ–２的表达主要在子实体的顶端和中段，畸形子实体中ＣｍｗＣ–１和ＣｍｗＣ–２的表达量都不高。
[期刊] 华北农学报
[作者]
毛玉梅 李琴 付鸣佳 金华燕 沈俊良 钟雪晴
为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶（ＳｕｂｔｉｌｉＳｉｎ－ｌｉｋｅ ｐｒｏｔｅａＳｅ）的表达特性，以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象，通过ｒｔ－ｐＣｒ获得蛹虫草Ｃｍｋｅｘｉｎ基因的ｏｒＦ序列，并进行序列分析。应用ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ｐＣｒ方法，检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中Ｃｍｋｅｘｉｎ基因的转录情况。结果获得蛹虫草Ｃｍｋｅｘｉｎ基因的ｏｒＦ序列。对翻译蛋白质产物Ｃｍｋｅｘｉｎ进行生物信息学分析，表明该蛋白质含１个属蛋白转化酶的肽酶Ｓ８家族功能域（１４３～４２９）和１个前体蛋白转化酶ｐ功能域（５１４～６００），符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养４ ｄ后再蓝光照射．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
闫瑞杰 张云飞 刘玲玲 张红垒 王亚宾 胡慧
【目的】制备猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)N蛋白及其多克隆抗体,建立检测PDCoV N蛋白抗体的间接ELISA方法。【方法】从PDCoV CH-01毒株中扩增N全基因,克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-28a-PDCoV-N,转入BL21(DE3),用IPTG诱导表达重组N蛋白,并对该蛋白的反应原性进行鉴定。诱导表达的N蛋白经镍柱纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。同时用镍柱纯化后的N蛋白作为包被抗原,建立PDCoV的间接ELISA检测方法,对该方法的特异性、重复性和稳定性进行检测,并利用该方法对河南部分地区猪场送检的165份临床猪血清样本进行PDCoV抗体检测。【结果】成功克隆了1 026 bp的N基因,构建了重组表达载体pET-28a-PDCoV-N,经诱导表达后获得了重组N蛋白,其相对分子质量约42.9 ku,Western blot分析表明所表达的蛋白可与抗PDCoV全病毒猪阳性血清发生反应。制备的PDCoV N蛋白多克隆抗体经Western blot检测表明,该抗体具有特异性;间接免疫荧光试验测定该多克隆抗体在ST细胞上的最佳使用稀释度为1∶200。以N蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法,确定最佳的反应条件如下:抗原2μg/mL在4℃过夜包被,10 g/L BSA在37℃下封闭2 h,血清(1∶80稀释)37℃孵育1 h,酶标二抗(1∶6 000稀释)37℃孵育1 h,TMB在37℃下显色15 min;待检血清OD_(450)值≥0.272判定为阳性。特异性试验结果显示,该包被抗原与其他猪常见病毒的阳性血清均无交叉反应,批内和批间重复试验变异系数均小于5%。用间接ELISA法对来自河南不同地区的165份血清样本进行检测,结果表明各地样本PDCoV抗体阳性率平均为53.94%。【结论】成功表达了PDCoV N蛋白,制备了其多克隆抗体,建立了PDCoV间接ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,可用于临床猪血清中PDCoV抗体的检测。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王伟 白俊杰 劳海华 叶星 罗建仁
根据已报道的Mx蛋白cDNA序列设计合成特异引物,应用逆转录 聚合酶链式反应(RT PCR)方法,从草鱼呼肠孤病毒(GCRV)诱导的草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肝脏总RNA中扩增获得Mx蛋白cDNA,回收纯化后克隆到pGEM TEasyVector系统的T载体上。重组子的序列分析表明:所克隆的Mx蛋白cDNA长722bp,编码240个氨基酸,包括1个三联GTP结合区域和1个发动蛋白(dynamin)族特征的序列。与已知鱼类Mx蛋白基因序列比较表明,草鱼Mx蛋白基因序列与其它鱼类Mx基因相应序列具有较高的同源性,其中与斑马鱼Mx蛋白E型基因碱基序列比较同源性最高,为87...
关键词：
草鱼 Mx蛋白基因 基因克隆 原核表达
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
程翔 蔡生力 刘红 李媛媛
中国明对虾卵黄蛋白原mRNA基因在卵巢和肝胰腺中都有表达。采用实时荧光定量PCR方法测定在卵巢不同发育时期卵巢和肝胰腺这两种组织的卵黄蛋白原mRNA的表达水平,提取组织总RNA,设计特异性引物进行荧光定量PCR扩增,对卵巢发育的各个阶段,卵原细胞增殖期、卵黄发生前期、初级卵黄发生期、次级卵黄发生期和消退期的卵黄蛋白原mRNA表达进行相对定量分析。结果表明:在卵巢中,卵黄蛋白原mRNA在前3个阶段随着卵巢的发育,表达量不断增加,分别为0.04、0.23和1.03,次级卵黄发生期开始减少到0.16,消退期卵黄蛋白原mRNA表达量又增加到1.00。而在肝胰腺,前4个阶段随着卵巢发育,表达量逐步增加,...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周晓梅 沈晋良 高聪芬
用EnvirologixCry1Ab/Cry1Ac平板试剂盒检测了两种转Cry1Ac基因的棉花品系 (NUCOTN33B、NUCOTN99B) 以及常规对照品系 (苏棉 12) 不同生育期主茎嫩叶、侧枝嫩叶、蕾及蕾的苞叶中杀虫蛋白Cry1Ac的含量。结果表明, 两种转Bt基因棉主茎嫩叶杀虫蛋白Cry1Ac的含量随生育期的推移呈明显下降趋势, 花铃期 (NUCOTN33B和NUCOTN99B分别为 4 43和 2 93μg·g-1 ) 和吐絮期 (3 87和 2 86μg·g-1 ) 的含量分别降至苗期第 6叶 (7 64和 8 38μg·g-1 )的 58%、35%和 51%、34%; 相同时...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
乔艳艳 杨翠云 于翠 曹洁 马青 张丽莉
根据烟草环斑病毒外壳蛋白(TRSV-CP)基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法,获得烟草环斑病毒基因组中编码外壳蛋白部分基因片段,将其插入原核表达载体pET28a中,获得重组表达质粒pET-CP,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导蛋白大量表达。重组蛋白经过Ni+-NTA纯化后,SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,TRSV-CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,产生的融合蛋白分子质量约为34 ku,并具有免疫学活性。以纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,多抗血清效价达1∶409 600,可以与重组蛋白发生抗原抗体反应。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢训 方琦 尹跃艳 秦西云 丁铭
用RT-PCR从感染烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)的烟草样品中克隆该病毒的外壳蛋白基因,病毒外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体pET-30a(+)中,构建成重组原核表达载体,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导、Ni+NTA亲和柱纯化获重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔,制备TMV外壳蛋白多克隆抗体,并用制备的多克隆抗体建立了更简便、经济、特异性更强的DOT-ELISA检测法。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘晓玲 王振东 孙涵甜 王振华 赵振军 李忌
以栉孔扇贝(Chlamys farreri)卵巢cDNA为模板,采用PCR扩增Foxl2(forkhead box l2)基因,通过双酶切与pET-28a构建重组质粒表达载体,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,筛选鉴定阳性克隆,经测序鉴定后提取质粒转化大肠杆菌感受态细胞BL21,以IPTG诱导Foxl2蛋白表达,用SDS-PAGE鉴定表达情况,经镍柱纯化表达蛋白,通过免疫新西兰白兔(New Zealand white rabbits)制备多克隆抗体,以ELISA测定抗体效价,最后用WB(Western Blot)检测抗体特异性。结果表明,重组载体转化BL21后经1.0 mmol L~(-1)IPTG于37℃诱导6 h可产生大量Foxl2蛋白,主要以包涵体形式表达。经镍柱柱纯化可得到纯度较高的Foxl2蛋白,浓度达800 ug·mL~(-1)。免疫新西兰白兔获得多克隆抗体,效价大于1∶128 000。WB检测显示:该抗体能特异识别扇贝卵巢中的Foxl2蛋白,同时发现Foxl2蛋白在卵巢中强表达,而在精巢中几乎不表达,揭示栉孔扇贝中该蛋白具雌性性别相关性。研究成功获得效价高且能特异识别天然Foxl2的多克隆抗体,为后续深入研究Foxl2在栉孔扇贝卵巢中的功能提供了分子工具。
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘兴龙 程林友 李天龙 李长友 李国勋
根据已知Btcry8类基因的全长序列设计一对特异性引物JJX5和JJX3,以Bt菌株B-DLL的质粒DNA为模板扩增出3.5 kb大小的片段;将该片段插入大肠杆菌表达载体pET-21b中,并完成了该片段的全序列测定。该基因编码区为3 495 bp,编码的蛋白质由1 164个氨基酸残基组成,相对分子质量为131.8 kDa,等电点为pH 4.71,为弱酸性蛋白。该基因(GenBank:EU047597)编码的氨基酸序列与Cry8Ea1的氨基酸序列同源性高达99.31%,被国际Bt基因命名委员会正式命名为cry8Ea2。经IPTG诱导后该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中能够正常表达130 kDa...
[期刊] 水产学报
[作者]
李明云 丁文超 陈炯 史雨红
溶藻弧菌是中国南部水产养殖业中弧菌病的最主要病原菌,数量居海洋类弧菌之首,其快速检测具有重要意义。以溶藻弧菌国内标准株ATCC17749基因组DNA为模板,PCR扩增出外膜蛋白OmpK基因,将其克隆入表达载体pET-28a中,获得重组质粒pET-28a-OmpK,限制性内切酶结合琼脂糖凝胶电泳分析和序列测定结果表明,该序列开放读码框正确且与已发表的OmpK结构编码序列完全一致。将重组质粒pET-28a-OmpK转化大肠杆菌BL21pLysE,高效表达重组蛋白,将其纯化后免疫小鼠所得的高免血清能外膜蛋白OmpK特异性结合,表明体外表达的重组蛋白OmpK具有良好的免疫原性和反应原性。利用该抗溶藻弧...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王玉卿 赵继新 庞玉辉 降彦苗 陈新宏 武军 刘淑会
【目的】克隆华山新麦草(Psathyrostachys huashanica)的α-醇溶蛋白基因,并对其进行生物信息学分析,构建该基因的原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白。【方法】采用同源克隆法从华山新麦草基因组DNA中分离克隆出α-醇溶蛋白基因并进行序列分析,将克隆的华山新麦草α-醇溶蛋白基因Gli-Ns-5克隆到表达载体pET-28a(+)上,获得重组质粒pET28a-Gli-Ns转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。【结果】从华山新麦草基因组DNA中克隆了4个α-醇溶蛋白基因:Gli-Ns-2(FJ713595)、Gli-Ns-3(GQ139525)、Gli-Ns-4(GQ1...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
张俊玲 施志仪 翟万营 李巍
利用Western印迹法对胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-1,IGF-Ⅰ)及其受体(IGF-Ⅰreceptor,IGF-ⅠR)蛋白在牙鲆仔鱼发育变态阶段的表达进行分析。结果显示IGF-Ⅰ蛋白在仔鱼变态前(17 d)和变态起始阶段(21 d)免疫活性较强,而在变态期间降低;IGF-ⅠR蛋白在变态起始阶段的表达与IGF-Ⅰ类似,但在变态期间与IGF-Ⅰ相反,具有相对丰富的表达。这些结果为进一步研究IGF-Ⅰ及其受体在牙鲆变态中的生理意义奠定了基础。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾文超 甘鹏 熊亮 潘传英 蓝贤勇 陈宏
【目的】构建pTAT-bSox2-9R融合表达载体,并对其进行原核表达研究,为利用TAT和多聚精氨酸(9R)的跨膜作用实现转录因子蛋白直接重编程牛体细胞提供科学资料。【方法】以GenBank上公布的牛Sox2基因编码区序列为基础,设计并合成含酶切位点、跨膜转导肽TAT和9R的引物;利用PCR扩增方法获得包括Sox2、TAT和9R的重组DNA序列,并将其克隆到空质粒pTAT-HA上,从而构建pTAT-HA-bSox2-9R重组表达载体;将经酶切鉴定和测序验证后的重组表达载体转化大肠杆菌,在不同IPTG浓度和诱导时间等条件下进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
欧洲鳗鲡免疫球蛋白M重链基因的原核表达与不同组织中表达变化的定量分析
三疣梭子蟹B型清道夫受体蛋白的原核表达及细胞、组织分布
马泰勒虫棒状体颈部蛋白4基因的克隆与原核表达分析
捻转血矛线虫Hc-daf-22基因的原核表达及重组蛋白酶活性测定
文蛤生长因子受体结合蛋白2(GRB2)基因克隆、时空表达及SNP位点筛查
海带核基因组编码CbbX蛋白的原核表达与纯化
苹果蠹蛾性信息素结合蛋白Ⅱ(CpompBp2)基因的克隆及原核表达
日本血吸虫22.6ku膜相关蛋白基因的克隆及原核表达
黏虫clip型丝氨酸蛋白酶基因的克隆及原核表达
