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[期刊] 华北农学报
[作者]
王文跃 李国瑞 黄凤兰 尚雨丝 王超 罗蕊 邱靖 王丹 张智勇 陈永胜
以蓖麻茎秆为试材,研究了影响cDNA-AFLP标记蓖麻差异基因反应体系的几个关键因素,建立了适宜蓖麻的cDNA-AFLP分析体系。结果表明:当裂解液为1.4 mL时提取的RNA浓度最高,EcoRⅠ和MseⅠ的组合6 h可将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物用于预扩增,预扩增产物稀释15倍时作为选择性扩增模板可以获得条带丰富且重复性好的结果。蓖麻cDNA-AFLP反应体系的建立为进一步研究蓖麻株高、叶型等相关基因奠定了基础。
关键词：
cDNA-AFLP 蓖麻 体系建立
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈晓凤 黄凤兰 李国瑞 王文跃 张智勇 包春光 吴春桃 张现世
以蓖麻种子为研究对象,优化其cDNA-AFLP反应体系,为研究不同蓖麻材料或不同发育阶段的蓖麻种子内脂肪酸基因表达差异奠定理论基础。试验结果表明:提取蓖麻种子总RNA;将RNA逆转录为cDNA,用高频限制性内切酶EcoRⅠ和MseⅠ进行酶切,并与EcoRⅠ、MseⅠ接头连接,得到连接产物;连接产物稀释40倍作为预扩增模板,进行预扩增;优化选择性扩增反应体系,得到最佳反应体系为:10×PCR Buffer 2.0μL、dNTPs(10 mmol/L)1.4μL、Mg2+(25 mmol/L)1.4μL、模板稀释80倍1.0μL、Ex扩增引物(50 pmol/μL)1.2μL、My扩增引物(50 ...
关键词：
蓖麻 脂肪酸 cDNA-AFLP
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈永胜 李国瑞 黄凤兰 王文跃
为筛选调控蓖麻株高、叶型及产量相关的优良基因,培育出节间较短、茎体粗壮而长度适中、高产的蓖麻矮化良种。采用cDNA-AFLP技术分析始花期矮秆蓖麻茎秆的cDNA表达差异片段,共回收128条差异片段,114条可在Balatx数据库中查询,39条序列被Blast2GO中的GO注释。这些基因几乎涵盖了与矮化相关的各类基因,涉及细胞生长、分化、信号转导、转录调控、物质与能量代谢及运输等,可能在蓖麻矮化机制中起重要或决定性作用,为揭示蓖麻矮化的分子机制找到新的突破口。
关键词：
蓖麻 矮杆 cDNA-AFLP 差异基因
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
马洪双 夏新莉 尹伟伦
以胡杨为研究材料,建立适用于胡杨抗逆研究的cDNA-AFLP反应体系,对影响反应体系的关键因素(RNA提取、内切酶组合、预扩增体系、选择性扩增体系)进行了探索和优化。结果表明:通过改进后的CTAB法能成功获得高质量的RNA;EcoRⅠ/MseⅠ的组合4.5h内将ds-cDNA酶切完全,与相应接头连接过夜后产物直接用于预扩增;稀释10倍的预扩增产物作为模板用于选择性扩增;通过优化体系得到的选择性扩增产物,银染检测后条带清晰稳定,经RT-PCR检测,证明优化后的cDNA-AFLP技术差异显示的结果可以准确反映基因在植物体中差异表达的真实情况,并利用该技术成功筛选出42对可以获得带型丰富且重复性好的...
关键词：
胡杨 cDNA-AFLP 抗逆机制
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴旭 严美姣 刘丽平 连森阳 傅星源 王光瑛 李昂
以番鸭脑垂体为材料,用Trizol法提取总RNA,用Superscipt II-RT合成第一链cDNA,RNase H和DNA Polymerase合成第二链cDNA,最后用EcoRⅠ/MseⅠ分步酶切cDNA各2 h,经T4连接酶合成双链cDNA,预扩增反应后产物稀释40倍进行选择性扩增反应.经1%琼脂糖电泳及6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的结果显示,番鸭脑垂体总RNA的提取及cDNA-AFLP预扩增和选择性扩增的效果良好.番鸭cDNA-AFLP反应体系的建立为番鸭就巢的分子机理研究奠定了基础.
关键词：
番鸭 cDNA-AFLP 体系建立
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
江成 林二培 黄华宏 童再康
为了挖掘光皮桦材性相关基因,本研究以光皮桦木质部为材料,通过对RNA的提取、cDNA的反转录及纯化的对比分析,以及选扩体系优化等,建立了相应的cDNA-AFLP体系。结果表明:采用CTAB和RNAiso试剂相结合的方法得到的RNA质量较好,cDNA经纯化后选扩效果明显变好。选扩体系为:4.0μL预扩产物(稀释40倍)、1.6μL的引物(10.0μmol/L)、0.2μL的dNTP(2.5 mmol/L)、0.4μL的Mg2+(25.0 mmol/L),以及0.2μL的Taq DNA聚合酶(5 U/μL)。进一步以来自不同木质化茎段的cDNA为模板,筛选出31对扩增效果较好的引物组合,同时分离出...
[期刊] 华北农学报
[作者]
孙涌栋 李贞霞 张兴国 陈碧华 李新峥
以黄瓜为研究材料,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适宜黄瓜的cDNA-AFLP分析体系,并得到了较为清晰可辨的cDNA-AFLP指纹图谱。结果表明,适用于黄瓜dscDNA的酶切组合为TaqI和VspI,dscDNA酶切用量为300 ng,用作预扩增模板的连接产物稀释倍数为1倍,作为选择性扩增模板的预扩增反应产物的适宜稀释倍数为30倍。
关键词：
黄瓜 cDNA-AFLP 分析体系
[期刊] 华北农学报
[作者]
唐美玲 孔瑾 徐维华 韩振海
以山葡萄品种左山一的叶片和花芽为材料,对cDNA-AFLP体系的几个关键因素进行摸索,建立了适宜山葡萄的cDNA-AFLP反应体系。结果表明,提取山葡萄的花芽RNA适宜用改良的CTAB法,提取叶片RNA适宜用SDS-酸酚法。在2×Y/TBuffer的作用下,500 ng的cDNA利用MseI与EcoRI双酶切4 h即可酶切完全,将16℃连接过夜的产物稀释5倍作为预扩增的模板,预扩增产物稀释20倍作为选扩模板能获得带型稳定可重复性好的结果。
关键词：
山葡萄 cDNA-AFLP
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
邢超 金璐 刘鹏 阮颖 刘春林
以蓖麻品种淄5号和秀蓖2号的成熟种子胚轴为外植体,在含0.25 mg/L苯基噻二唑基脲(TDZ)的改良MS(蔗糖20 g/L、琼脂9 g/L)固体培养基上诱导生芽。结果显示:淄5号和秀蓖2号平均每个外植体可产生4个不定芽,2品种间产生不定芽的数量没有明显差异;不定芽经伸长、诱导生根能发育成完整的植株,2品种在根分化能力上没有明显差异。综合分析,这2个蓖麻品种基因型对体外再生体系的建立没有明显影响。
关键词：
蓖麻 胚轴 再生体系 外植体
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵永 朱国立 何智彪 包春光 陈晓凤 姜桐桐 李佳会 黄凤兰 周婷婷 常旭丰 刘佳琪
为了建立Ｌｍ型雌性系蓖麻不同发育时期的标雌／单雌／两性系花序ｍＳＡＰ反应体系，提取不同类型不同发育时期的花序基因组ＤＮＡ，混合成基因池；用ＥｃｏＲⅠ和ＨＰＡⅡ／ｍＳＰⅠ的组合，１２ Ｈ可将ＤＮＡ酶切完全；１６℃条件下，将酶切产物与ＥｃｏＲⅠ、ＨＰＡⅡ／ｍＳＰⅠ接头过夜连接；连接产物用于预扩增。优化后的预扩增反应体系为１０×ＰｃＲ ＢｕｆｆＥＲ ２．５μＬ、Ｄ ＮＴＰＳ（１０ ｍｍｏＬ／Ｌ）２．５μＬ、ｍｇ２＋（２５ ｍｍｏＬ／Ｌ）２．０μＬ、模板２．０μＬ、Ｅ０扩增引物（１０ＰｍｏＬ／μＬ）１．５μＬ、Ｈ０扩增引物（１０ ＰｍｏＬ／μＬ）１．５μＬ、ＬＡ ＴＡｑ（５ ｕ／μＬ）０．２５μＬ、Ｄ．．．
关键词：
蓖麻 花序 MSAP
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王大玮 李煜 周玮 李周岐
【目的】建立并优化适合杜仲的AFLP技术体系,为进一步构建其遗传图谱及开展分子标记辅助育种奠定基础。【方法】对杜仲基因组DNA提取方法、酶切与连接体系、预扩增和选择性扩增程序的影响因素进行分析,并对适合杜仲AFLP分析的引物组合进行筛选。【结果】模板DNA的提取采用改进的CTAB法,酶切模板DNA用量500 ng,酶切时间6 h,连接反应时间6 h,预扩增产物最适稀释倍数30倍。同时筛选出E-AAG+M-CAA,E-AAG+M-CAT,E-AAG+M-CTA,E-AAG+M-CTG,E-ACA+M-CAA,E-ACA+M-CTA,E-ACC+M-CTG共7对适合杜仲AFLP分析的引物组合。【结...
关键词：
杜仲 AFLP 体系优化 引物筛选
[期刊] 华北农学报
[作者]
张桂华 杜胜利 鞠秀芝 韩毅科 马德华 王鸣
以24个不同类型的黄瓜高代自交系为试材,通过对扩增长度多态性(AFLP)反应体系中的几个关键参数进行优化,建立了适合于黄瓜的AFLP反应体系。结果表明,用于酶切的基因组DNA以300 ng为宜,预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜,选择性扩增引物的选择性碱基的数目以“2+3”组合为宜。采用优化好的体系,引物组合P12M12在供试材料中共扩增出稳定清晰的带纹35条,其中多态性带4条。
关键词：
黄瓜 扩增片断长度多态性 DNA指纹图谱
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨敏敏 刘红艳 左阳 赵应忠
以芝麻细胞核雄性不育系95ms-5为材料,对AFLP反应体系中的酶切连接、预扩增和选择性扩增中的关键性因素进行了优化。结果表明,在模板DNA质量浓度为200ng/μL、37℃酶切连接6h的情况下,预扩增中最佳Mg2+浓度为1.0mmol/L,dNTP最佳浓度为0.3mmol/L,Taq酶量以0.5U为宜,预扩增引物终浓度为0.4mmol/L;选择性扩增中,预扩增产物稀释10倍后,以Mg2+0.8mmol/L、dNTP 0.2mmol/L、Taq酶1.0U、选扩引物0.6mmol/L为宜。
关键词：
油料作物 芝麻 AFLP 反应体系 优化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
栾兆杰 曹远银 李天亚 陈思 陈秀梅 朱桂清 李伟华
【目的】分析中国重要辅助鉴别寄主明尼2761经小麦秆锈菌诱导后的基因表达谱,寻找与其抗病基因表达相关的片段。【方法】运用cDNA-AFLP技术研究明尼2761和感病对照Thatcher分别接种小麦秆锈菌后的基因表达差异,对与明尼2761抗病相关的特异表达片段进行分析。【结果】140对AFLP引物组合能够检测到约7 000多条差异表达转录衍生片段(TDF),平均每一对引物可以获得50条条带,其中有86对引物能够在明尼2761和Thatcher之间扩增出差异条带。对可能与抗病相关的35条特异TDF进行克隆测序,经BLASTx比对,30条TDF在数据库中能够找到同源序列,其中24条TDF功能已知,6...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
周生财 黄华宏 童再康 吴小林
采用核酸电泳缓冲液(TNE)结合十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)提取的高质量楠木Phoebe基因组脱氧核糖核苷酸(DNA)可满足扩增片段长度多态性(AFLP)分析的要求。利用浙江楠Phoebe chekiangensis基因组DNA优化建立楠木AFLP反应体系如下:酶切反应300 ng基因组DNA,0.3μL缓冲液4,0.3μL牛血清白蛋白(100×BSA),50nkat EcoRΙ,25 nkat MseΙ,双蒸水加至30.0μL放置37℃恒温箱酶切4 h,聚合酶链式反应(PCR)仪上65℃15min;连接反应20.0μL酶切产物,2.5μL T4缓冲液,666.8 nkat T4连接酶,5...
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