在建立‘藤稔’等５个葡萄品种离体培养快速繁殖体系的基础上，通过热处理和微茎尖脱毒培养获得了再生植株；并经过ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ和长臂光敏生物素标记ＧＦＬＶ－ＣＰ基因ｃＤＮＡ探针检测．结果表明白天３８℃夜晚３５℃处理脱除ＧＦＬＶ效果最佳；多次继代培养也有脱除ＧＦＬＶ的作用．从而首次获得了‘藤稔’、‘红地球’、‘９３０７’３个葡萄品种的脱除ＧＦＬＶ的试管苗．ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ与探针平行检测的结果还表明，ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测以Ｐ／Ｎ＜１作为阴性标准更为可靠

葡萄卷叶病毒(Grapevine leafroll virus)是葡萄的重要病害,罹病葡萄明显地延迟浆果成熟二周至一个月,且着色差,糖分降低6％,减产25％以上。 1988～1990年按照美国病毒学专家D.Gonsalues介绍的方法,在国内首次应用酶联法(ELISA)检测出葡萄卷叶病毒。现简报如下。 一、材料和方法 1.葡萄测试标样513份,采自天津果园等处。 2.GLRV抗血清和γ球蛋白酶结合物。

利用细菌质粒 M13克隆葡萄无核基因的 RAPD标记 UBC- 2 6 94 50 后 ,采用自动荧光 DNA序列分析仪对其测序。结果表明 ,UBC- 2 6 94 50 由 4 84对核苷酸及其特定序列构成。按照该序列 ,人工合成两个寡聚核苷酸5′ CCAGT TCACT CTCAA TAGGT CC3′和 5′ CCAGT TCGCC CGTAA ATG3′分别作引物 ,当用获得该标记及其序列的亲本和无核杂种后代作模板进行 PCR分析 ,凡是可以扩增出约 5 90 bp片段即为无核基因携带者和表达者。进一步用其原始无核祖先无核白和商业化无核品种及 C78- 47× B52 - 1 2 2 ...

经多年试验研究.筛选出适于葡萄茎尖脱毒培养及继代繁殖的广谱性系列培养基.它与一般常用培养基相比.可缩短培养时间12～19d.该系列培养基对不同葡萄品种的培养效果有一定的差异,但脱毒效果差异不明显,对葡萄扇叶病毒和卷叶病毒的茎尖脱毒率分别达到86.6％和84. 4％.试验证明,茎尖的长短与脱毒率成反比,与再生株的存活率成正比.

【目的】葡萄Ａ病毒（ＧｒＡｐｅｖｉｎｅ ｖｉｒｕｓ Ａ，ＧｖＡ）是葡萄皱木复合病的重要病原之一，以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施，而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此，开展针对ＧｖＡ的反转录环介导等温扩增技术（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒＡｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉＡｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍＡｌ ＡｍｐｌｉｆｉｃＡｔｉｏｎ，ｒｔ－ｌＡｍｐ）研究，旨在建立其ｒｔ－ｌＡｍｐ特异性检测方法。【方法】通过比对分析ＧｖＡ的ｃｐ（ｃｏＡｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）基因序列并经引物设计软件ｐｒｉｍｅｒ ｅｘｐｌｏｒｅ ４．０设计，获得６条检测．．．

为了建立毛葡萄茎尖离体培养及植株再生体系,给野生毛葡萄种质资源的超低温保存和无毒苗木培育提供参考,以花溪-4和农院-11毛葡萄组培苗的茎尖为材料,研究植物生长调节剂及浓度配比对毛葡萄茎尖离体培养与植株再生的影响。结果表明:毛葡萄茎尖离体培养与增殖培养的适宜培养基为MS+BA 1.5 mg/L+IBA 0.02 mg/L,离体培养成活率达93.8%以上,增殖率和增殖系数分别为88.6%和5.8;茎尖生根培养的适宜培养基为1/2MS+IBA 0.05～0.15 mg/L+IAA 0.2 mg/L,生根成苗率为100%,建立了毛葡萄茎尖组织培养和植株再生的技术体系。

葡萄卷叶病毒株系分化的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＶｉｒｕｓＩｓｏｌａｔｅｓＡｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＧＬＲＶ葡萄卷叶病毒（Ｇｒａｐｅｖｉｎｅｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ．ＧＬＲＶ）是甜菜黄化病毒组成员，病毒粒子丝状物约１８００～...

葡萄卷叶病毒发生时间和部位的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎＩｎｆｅｃｔｅｄＴｉｍｅＡｎｄＰａｒｔｓｏｆＧｒａｐｅｖｉｎｅＬｅａｆ－ｒｏｌＶｉｒｕｓ葡萄卷叶病毒病（ＧＬＲＶ）分布于世界上所有种植葡萄的国家。我国葡萄种植面积发展很快，但由于葡萄卷叶病毒的危害日趋严...

【背景】葡萄浆果内坏死病毒（grapevine berry inner necrosis virus,GINV）是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒，该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV逆转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测体系；明确不同葡萄砧木对GINV的敏感性；明确GINV在寄主植株中的时空分布规律，为该病毒的监测预警提供技术支撑。【方法】根据GenBank已登录GINV的复制酶（replicase,RP）、移动蛋白（movement protein,MP）和外壳蛋白（coat protein,CP）基因保守序列设计6套引物，通过常规RT-PCR和RT-qPCR筛选特异性强、扩增效果好的引物。再通过对退火温度和引物浓度等反应条件的优化建立GINV的SYBR Green I染料法RT-qPCR检测体系，并进一步对该技术的灵敏度、特异性和田间适用性进行评价。将GINV接种到贝达、SO4、101-14、140R和1103P 5种葡萄砧木上进行症状观察和病毒检测，以筛选GINV敏感性较高的指示植物。基于所建立的RT-qPCR技术对接种GINV葡萄砧木的不同生长时期、不同部位样品进行GINV检测，从而明确GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。【结果】建立了GINV SYBR Green I染料法RT-qPCR检测技术体系，其最佳引物为GINVRPYGF2/R2，最佳引物浓度为300 nmol·L-1，最佳退火温度为58.4℃。该技术对GINV的检测特异性强，其检测灵敏度达常规RT-PCR的1 000倍。症状观察结果表明贝达感染GINV的症状最为严重，表现为叶片系统性坏死，而其他砧木叶片仅表现褪绿斑驳和环斑症状。RT-qPCR检测结果表明GINV在EL27时期（坐果期）的相对含量最高，5个品种间的病毒相对含量在EL12（花序分明期）和EL27时期间无显著差异，EL31时期（果实增大期）的贝达与SO4、101-14、140R和1103P的病毒相对含量存在显著差异；GINV的相对含量在不同组织部位存在较大差异，由高到低依次为下部叶片、上部叶片、上部茎秆、下部茎秆、根部。【结论】建立了灵敏度高、特异性强的GINV RT-qPCR检测方法，利用该方法明确了GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。

葡萄卷叶病毒抗血清的制备ＡｎｔｉｓｅｒｕｍＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＧｒａｐｅｖｉｎｅＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ葡萄卷叶病毒病的诊断手段主要是通过嫁接传染和血清学方法，但由于病株的病毒含量低，且没有草本寄主，使得该病毒的研究及其抗血清的制备非常困难。本...

为了快速检测出实验动物临床样品中的金黄色葡萄球菌（SA），建立了一种普通PCR方法。同时合成3对引物，用金黄色葡萄球菌的阳性核酸DNA做模板，进行引物扩增，筛选出一对能扩增出270 bp单一目的片段的引物。逐一对该引物灵敏度、重复性和特异性进行了测试。实验结果显示，该方法具有高度的特异性，除了识别金黄色葡萄球菌基因组外，对小鼠其他常见病原菌均不发生交叉反应，具有优良的敏感性和稳定性。两个不同操作人员，在两个不同时间段，利用两台不同品牌的PCR仪器，用金黄色葡萄球菌阳性样品进行测试，结果显示此方法再现性良好。用该方法检测待测样本，效果也良好。

取“无核白鸡心”“美人指”“甬优一号”等 3个葡萄品种 0 5cm长的单芽嫩茎作为外植体 ,接种于不同配方的培养基上。结果表明“无核白鸡心”“美人指”接种于GS分别附加 6 BA 1 0mg·L-1和 2 0mg·L-1的培养基 ,“甬优一号”接种MS附加 6 BA 1 0mg·L-1培养基诱导芽 ,芽的诱导率分别达 1 0 0 % ,1 0 0 %和 86%。当芽伸长至 1 0～ 1 5cm时 ,3个品种均转接于MS 附加IAA 0 0 5mg·L-1,6 BA 1 0mg·L-1和GA32 0mg·L-1的分化培养基 ,芽的分化最佳 ,分化率达 80 %～ 86% ,增殖...

【目的】了解陕西关中地区猪肉中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的污染状况、耐药性及其毒素基因的分布。【方法】采集陕西关中6个地区的猪肉165份,按国标GB/T 4789.10-2010的方法,对其中的金黄色葡萄球菌进行分离,采用PCR方法对该菌进行确证并对其相关基因(如nuc、mecA、PVL、SEs和ETs)进行检测,最后采用琼脂稀释法检测金黄色葡萄球菌对11种抗菌药物的耐药性。另外,在BP平板中分别添加头孢西丁(4μg/mL)和苯唑西林(4μg/mL),分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)。【结果】165份样品的金黄色葡萄球菌污染率为33.33%(55/16...

　以酿酒葡萄赤霞珠(CabernetSauvignon)为材料,研究了行间生草覆盖对葡萄园微气候和葡萄酒品质的影响。结果表明,在赤霞珠生产园行间播种多年生黑麦草、紫花苜蓿和白三叶草,可起到平稳地温、调节空气湿度的作用。葡萄园生草可使地面最高温度降低5.7～7.3℃,地面温度日较差降低6.7～7.6℃,树冠内空气温度日较差提高1.1～2.4℃,也可使不同土层温度有所降低,这有利于根系的生长和果实品质的提高。行间生草可使果实还原糖含量增加,含酸量降低,使葡萄酒中pH值、花色素苷、单宁含量升高,酒体颜色加深,结构感增强,其中以播种紫花苜蓿效果较明显。

为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3),本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品...