葡萄卷叶病毒株系分化的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎＤｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＶｉｒｕｓＩｓｏｌａｔｅｓＡｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈＧＬＲＶ葡萄卷叶病毒（Ｇｒａｐｅｖｉｎｅｌｅａｆｒｏｌｖｉｒｕｓ．ＧＬＲＶ）是甜菜黄化病毒组成员，病毒粒子丝状物约１８００～...

葡萄卷叶病毒发生时间和部位的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎＩｎｆｅｃｔｅｄＴｉｍｅＡｎｄＰａｒｔｓｏｆＧｒａｐｅｖｉｎｅＬｅａｆ－ｒｏｌＶｉｒｕｓ葡萄卷叶病毒病（ＧＬＲＶ）分布于世界上所有种植葡萄的国家。我国葡萄种植面积发展很快，但由于葡萄卷叶病毒的危害日趋严...

葡萄卷叶病毒抗血清的制备ＡｎｔｉｓｅｒｕｍＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＧｒａｐｅｖｉｎｅＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ葡萄卷叶病毒病的诊断手段主要是通过嫁接传染和血清学方法，但由于病株的病毒含量低，且没有草本寄主，使得该病毒的研究及其抗血清的制备非常困难。本...

为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3),本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品...

以含有葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)p24蛋白基因的T载体(p-G2-p24)为模板,PCR扩增该蛋白基因的全长序列及其5′端长300bp的正反向片段。将p24蛋白基因全长序列定向克隆到表达载体pCsuper 1300+上,得到重组质粒pCsuper1300-p24。将正反向片段先后插入具内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-p24-F-R。然后用HindⅢ和SacⅠ双酶切pBSint-p24-F-R,将切下的带内含子的正反向串联片段定向克隆到植物表达载体pCsuper 1300+上,...

为获得葡萄卷叶伴随病毒1号(Grapevine leafroll-associated virus 1,GLRaV-1)中国分离物的分子信息,提高其检测可靠性,本研究从河北怀来和辽宁兴城地区带有明显卷叶症状的葡萄样品中提取的叶柄韧皮部总RNA,采用RT-PCR克隆了GLRaV-1的河北(GLRaV-1-HB)和辽宁分离物(GLRaV-1-LN)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因,并进行了序列分析。结果表明:GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN的CP基因核苷酸同源性为90.7%,由此推导的氨基酸同源性为93.8%;与已报道的国外3个GLRaV-1分离物的CP基因全序列相比,其核...

在建立‘藤稔’等５个葡萄品种离体培养快速繁殖体系的基础上，通过热处理和微茎尖脱毒培养获得了再生植株；并经过ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ和长臂光敏生物素标记ＧＦＬＶ－ＣＰ基因ｃＤＮＡ探针检测．结果表明白天３８℃夜晚３５℃处理脱除ＧＦＬＶ效果最佳；多次继代培养也有脱除ＧＦＬＶ的作用．从而首次获得了‘藤稔’、‘红地球’、‘９３０７’３个葡萄品种的脱除ＧＦＬＶ的试管苗．ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ与探针平行检测的结果还表明，ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测以Ｐ／Ｎ＜１作为阴性标准更为可靠

葡萄卷叶病毒(Grapevine leafroll virus)是葡萄的重要病害,罹病葡萄明显地延迟浆果成熟二周至一个月,且着色差,糖分降低6％,减产25％以上。 1988～1990年按照美国病毒学专家D.Gonsalues介绍的方法,在国内首次应用酶联法(ELISA)检测出葡萄卷叶病毒。现简报如下。 一、材料和方法 1.葡萄测试标样513份,采自天津果园等处。 2.GLRV抗血清和γ球蛋白酶结合物。

测定了葱鳞葡萄孢(Botrytis squamosa)菌株LeekBc-10和GarlicBc-2的菌丝生长速度、致病力和菌株LeekBc-10中一种dsRNA病毒的cDNA序列及其推定编码的蛋白质序列,并对该病毒进行了系统进化分析。结果表明:菌株GarlicBc-2菌丝生长较快、致病力较强,菌株LeekBc-10菌丝生长较慢、致病力较弱。菌株LeekBc-10菌丝中有2条dsRNA片段(dsRNA-1和dsRNA-2),序列测定表明:dsRNA-1和dsRNA-2核苷酸序列与相对应Botrytis porri RNA virus 1(BpRV1)中2条dsRNA片段的相似性分别为91.7%和...

【目的】葡萄Ａ病毒（ＧｒＡｐｅｖｉｎｅ ｖｉｒｕｓ Ａ，ＧｖＡ）是葡萄皱木复合病的重要病原之一，以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施，而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此，开展针对ＧｖＡ的反转录环介导等温扩增技术（ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒＡｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｏｏｐ－ｍｅｄｉＡｔｅｄ ｉｓｏｔｈｅｒｍＡｌ ＡｍｐｌｉｆｉｃＡｔｉｏｎ，ｒｔ－ｌＡｍｐ）研究，旨在建立其ｒｔ－ｌＡｍｐ特异性检测方法。【方法】通过比对分析ＧｖＡ的ｃｐ（ｃｏＡｔ ｐｒｏｔｅｉｎ）基因序列并经引物设计软件ｐｒｉｍｅｒ ｅｘｐｌｏｒｅ ４．０设计，获得６条检测．．．

【目的】对葡萄叶片性状进行数量化研究,以克服文字描述的主观性弊端,为葡萄种质资源分类和育种研究提供参考依据。【方法】以31个葡萄种或品种(系)为材料,首先将叶片各形态指标数量化,然后根据叶片数量化公式,将葡萄叶片形态转化为8个变量并编译成0~9的代码,最后将数据输入计算机,用SPSS 17.0软件进行聚类分析。【结果】获得了葡萄叶片性状数量化的方法,得出了31个葡萄种或品种(系)叶片性状的数量化表达式,分析了此方法在葡萄种质资源和育种研究中应用的可行性。聚类分析结果显示,31个葡萄种或品种(系)大致可以分为3大类,与其遗传背景高度吻合。【结论】葡萄叶片性状数量化表达方法对葡萄育种和种质资源研究...

[目的]本文旨在解决不同光照和复杂背景下葡萄病害叶片图像的自动分割。[方法]使用了一种全卷积网络(FCN)的葡萄病害叶片图像的自动分割算法。该算法在结构上将传统的卷积神经网络(CNN)后3个全连接层换成3个卷积层。通过多层的卷积,对输入葡萄叶片图像的特征进行提取;通过池化层,对特征信息进行筛选,缩减特征尺寸,以达到减少网络参数的目的。再通过反卷积对特征上采样,从高维、小尺寸特征恢复到图像原始尺寸,对具有原始尺寸的特征进行逐像素分类,确定原图像中每个像素位置的标签是背景还是前景。因只经过上采样处理后的分割图像会较粗糙,故通过跳跃结构将较为粗糙的原图进行局部信息与整体信息的整合,达到对分割结果进行精细化处理的目的。[结果]本算法对葡萄病害叶片有较好的分割效果,单叶片和复杂多叶片图像的马修斯相互系数(MCC)分别为0.821和0.747,MCC平均值较对比算法提高了6.5%。[结论]本算法能够较精确地分割自然条件下成像的葡萄病害叶片图像,为后续在叶片精准分割病害区域和提取病害特征创造了良好的条件。

为探讨湖南永州境内几种野生葡萄的扦插生根特性,分别于2004年2月和2005年1月剪取野生状态的华东葡萄(有东安1号、2号、3号,冷水滩1号、2号,道县1号,芝山1号等7种不同株系)、腺枝葡萄、蘡奥葡萄、复叶葡萄、蛇葡萄5种野生葡萄和欧美杂种巨峰葡萄(对照)的枝条进行插扦试验.结果表明:1)5种野生葡萄的扦插成活率均极显著低于巨峰(80.0%).5种野生葡萄的扦插成活率从大到小依次为蛇葡萄(60.0%)、腺枝葡萄(32.5%)、华东葡萄(22.5%)、蘡奥葡萄(17.5%)、复叶葡萄(12.5%).华东葡萄不同株系间扦插成活率不同,东安3号成活率最高(60.0%),极显著高于其他株系,东安2号...

【背景】葡萄浆果内坏死病毒（grapevine berry inner necrosis virus,GINV）是近年来在中国报道的一种正单链RNA病毒，该病毒发生普遍且危害严重。高灵敏的检测技术是病毒田间监测和无病毒苗木培育的关键。【目的】建立灵敏度较高的GINV逆转录实时荧光定量PCR(reverse transcription real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测体系；明确不同葡萄砧木对GINV的敏感性；明确GINV在寄主植株中的时空分布规律，为该病毒的监测预警提供技术支撑。【方法】根据GenBank已登录GINV的复制酶（replicase,RP）、移动蛋白（movement protein,MP）和外壳蛋白（coat protein,CP）基因保守序列设计6套引物，通过常规RT-PCR和RT-qPCR筛选特异性强、扩增效果好的引物。再通过对退火温度和引物浓度等反应条件的优化建立GINV的SYBR Green I染料法RT-qPCR检测体系，并进一步对该技术的灵敏度、特异性和田间适用性进行评价。将GINV接种到贝达、SO4、101-14、140R和1103P 5种葡萄砧木上进行症状观察和病毒检测，以筛选GINV敏感性较高的指示植物。基于所建立的RT-qPCR技术对接种GINV葡萄砧木的不同生长时期、不同部位样品进行GINV检测，从而明确GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。【结果】建立了GINV SYBR Green I染料法RT-qPCR检测技术体系，其最佳引物为GINVRPYGF2/R2，最佳引物浓度为300 nmol·L-1，最佳退火温度为58.4℃。该技术对GINV的检测特异性强，其检测灵敏度达常规RT-PCR的1 000倍。症状观察结果表明贝达感染GINV的症状最为严重，表现为叶片系统性坏死，而其他砧木叶片仅表现褪绿斑驳和环斑症状。RT-qPCR检测结果表明GINV在EL27时期（坐果期）的相对含量最高，5个品种间的病毒相对含量在EL12（花序分明期）和EL27时期间无显著差异，EL31时期（果实增大期）的贝达与SO4、101-14、140R和1103P的病毒相对含量存在显著差异；GINV的相对含量在不同组织部位存在较大差异，由高到低依次为下部叶片、上部叶片、上部茎秆、下部茎秆、根部。【结论】建立了灵敏度高、特异性强的GINV RT-qPCR检测方法，利用该方法明确了GINV在不同葡萄砧木的时空分布规律。

以２５个不同类型的刺葡萄（２１个引自湖南，１个引自福建，３个引自江西）为试材，以叶形结构特征、花器官性状、果实外观性状和种子表型性状为指标，采用分类学性状变异分析和主成分分析方法对１６个分类性状进行综合分析。结果表明：不同类型的刺葡萄其叶形结构值有所不同，其中有３组的叶形编码值相同，即澧县–４刺葡萄与吉首–１刺葡萄、澧县–５刺葡萄与吉首–３刺葡萄、芷江６０Ｃｏ刺葡萄与望城刺葡萄，叶片形态主要表现为三裂浅缘或全缘；根据极轴与赤道轴比和刺葡萄子房形态特征可得知刺葡萄雄能花，子房退化，形状不规则；两性花与雌能花子房形态分为４类，即窄圆锥形、较窄圆锥形、广圆锥形和较广圆锥形，大多数为较广圆锥形；刺葡萄．．．