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为获得葡萄卷叶伴随病毒1号(Grapevine leafroll-associated virus 1,GLRaV-1)中国分离物的分子信息,提高其检测可靠性,本研究从河北怀来和辽宁兴城地区带有明显卷叶症状的葡萄样品中提取的叶柄韧皮部总RNA,采用RT-PCR克隆了GLRaV-1的河北(GLRaV-1-HB)和辽宁分离物(GLRaV-1-LN)的外壳蛋白(coatprotein,CP)基因,并进行了序列分析。结果表明:GLRaV-1-HB和GLRaV-1-LN的CP基因核苷酸同源性为90.7%,由此推导的氨基酸同源性为93.8%;与已报道的国外3个GLRaV-1分离物的CP基因全序列相比,其核...

关键词：葡萄卷叶病 RT-PCR 进化树

葡萄卷叶伴随病毒3号抗血清的制备及应用

[期刊] 中国农业大学学报 [作者] 王克双费菲吕睦頔李捷程玉琴

为获得特异性抗血清用于批量检测葡萄苗木中的葡萄卷叶伴随病毒3号(Grapevine leafroll associatedvirus 3,GLRaV-3),本研究用含有GLRaV-3CP蛋白基因的载体pMD18-CP为模板,PCR扩增CP蛋白基因。将PCR产物定向克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选得到阳性克隆pET-G3CP。用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析显示,GLRaV-3CP在大肠杆菌中得到高效表达。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。经分析,抗血清效价为1/214,试验结果显示,此抗血清能用于葡萄植株样品...

关键词：葡萄融合蛋白 ACP-ELISA Western blot 分离物

葡萄卷叶伴随病毒2号p24蛋白基因转化烟草的研究

[期刊] 中国农业大学学报 [作者] 李捷程玉琴

以含有葡萄卷叶伴随病毒2号(Grapevine leafroll-associated virus 2,GLRaV-2)p24蛋白基因的T载体(p-G2-p24)为模板,PCR扩增该蛋白基因的全长序列及其5′端长300bp的正反向片段。将p24蛋白基因全长序列定向克隆到表达载体pCsuper 1300+上,得到重组质粒pCsuper1300-p24。将正反向片段先后插入具内含子的中间载体pBSint上,得到重组的中间载体pBSint-p24-F-R。然后用HindⅢ和SacⅠ双酶切pBSint-p24-F-R,将切下的带内含子的正反向串联片段定向克隆到植物表达载体pCsuper 1300+上,...

关键词：葡萄异源表达 RNA干扰 RNA沉默抑制子

葡萄微茎尖培养及葡萄扇叶病毒的ELISA和探针检测

[期刊] 北京林业大学学报 [作者] 张玉满田砚亭罗晓芳

在建立‘藤稔’等５个葡萄品种离体培养快速繁殖体系的基础上，通过热处理和微茎尖脱毒培养获得了再生植株；并经过ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ和长臂光敏生物素标记ＧＦＬＶ－ＣＰ基因ｃＤＮＡ探针检测．结果表明白天３８℃夜晚３５℃处理脱除ＧＦＬＶ效果最佳；多次继代培养也有脱除ＧＦＬＶ的作用．从而首次获得了‘藤稔’、‘红地球’、‘９３０７’３个葡萄品种的脱除ＧＦＬＶ的试管苗．ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ与探针平行检测的结果还表明，ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ检测以Ｐ／Ｎ＜１作为阴性标准更为可靠

关键词：葡萄,热处理,微茎尖培养,GFLV检测,PAS-ELISA,GFLV-CP基因cDNA探针

避雨栽培对葡萄霜霉病发生和流行的影响

[期刊] 沈阳农业大学学报 [作者] 于舒怡刘长远梁春浩刘丽关天舒王辉臧超群

2012年对沈阳地区避雨和露地栽培条件下葡萄霜霉病自然发病情况进行了系统调查。对比分析表明:相同栽培条件下,不同品种间发病情况差异较大,无核白鸡心品种最早发病且流行程度最大,其次为红地球品种,巨峰品种发病最晚,发生程度最轻。应用SPSS11.5进行回归分析,明确了Logistic模型能够较好反映沈阳地区葡萄霜霉病流行时间动态情况,并推导了沈阳地区露地栽培条件葡萄霜霉病指数增长期为5月1日至7月17日,逻辑斯蒂增长期为7月17日至8月14日,衰退期为8月14日以后;避雨栽培条件该病的指数增长期为5月1日至8月14日,逻辑斯蒂增长期为8月14日至9月11日,衰退期为9月11日以后,明确了指数增长期...

关键词：葡萄霜霉病避雨栽培条件时间动态病害比较流行学

葡萄卷叶病的ELISA检测

[期刊] 华北农学报 [作者] 郑燕棠曹为玉张福庆金红赵万英朱海英

葡萄卷叶病毒(Grapevine leafroll virus)是葡萄的重要病害,罹病葡萄明显地延迟浆果成熟二周至一个月,且着色差,糖分降低6％,减产25％以上。 1988～1990年按照美国病毒学专家D.Gonsalues介绍的方法,在国内首次应用酶联法(ELISA)检测出葡萄卷叶病毒。现简报如下。一、材料和方法 1.葡萄测试标样513份,采自天津果园等处。 2.GLRV抗血清和γ球蛋白酶结合物。

关键词：葡萄卷叶病 ELISA检测酶联法黑奥林结合物卷叶 γ球蛋白乍娜品丽珠蛇龙珠

葡萄未成熟胚诱导体细胞胚发生和植株再生与遗传鉴定

[期刊] 南京农业大学学报 [作者] 孙兴民余智莹张萌董瑞奇陶建敏

以二倍体和四倍体葡萄杂交获得的未成熟合子胚为材料,诱导体细胞胚发生。采用的初生胚诱导培养基(SE培养基)为:NN69+1.80 mg.L-1NAA+0.4 mg.L-1水解酪蛋白+2 g.L-1活性炭+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂;次生胚诱导培养基分别为:3/4MS+0.35 mg.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(扩繁培养基)和MS+1.5 g.L-16-BA+0.2 g.L-1IBA+30 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂(胚状体萌发培养基)。结果表明:初生胚诱导率为11.11%和16.67%,体细胞胚在扩繁培养基上再生植株。利用流式细胞仪和SSR标记检...

关键词：葡萄未成熟合子胚体细胞胚发生流式细胞仪 SSR

需安装和验收商品销售的纳税义务发生时间的确认

[期刊] 税务研究 [作者] 池贤福

需安装和验收商品销售,是指制造商或销售商(以下统称为制造商)所销售的需经过安装和验收环节才能最终确认其收入的一种商品销售形式。在税收管理上,税务机关与纳税人对需安装和验收商品销售纳税义务发生时间的确认标准有着不同的认识:(1)税务机关内部对此也有着不同的意见:一是认为在需安装和验收商品的销售过程中,安装和验收是商品销

关键词：商品销售税务机关税收管理预缴市国家税务局确认标准销售过程购货方销售货物纳税申报表

黑香蕉葡萄不同器官发生途径再生体系的优化

[期刊] 中国农业大学学报 [作者] 常新梁晋军刘振华肖坤王燕崔海洋胡建芳

为探讨葡萄高效再生体系的优化,以黑香蕉葡萄品种叶片、叶柄、茎尖分生组织为外植体,对其再生体系进行了优化,同时比较了不同器官再生的效果。结果显示:适合叶片再生的培养基为:MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,但再生率仅为4.88%;适合叶柄再生的培养基为:NN69+1.33mg/L6-BA+0.02mg/L NAA,再生率为16.92%。说明叶柄的再生率高于叶片但两者都没有超过20%。并且NAA对黑香蕉叶柄的再生效果好于IBA。NN69基本培养基要优于MS。以茎尖为外植体在起始培养基MS+6-BA 1.40mg/L+NAA 0.09mg/L和诱导培养基培养MS+2mg/L 6-BA+0.09mg/L NAA上通过反复损伤芽尖得到茎尖分生组织(Meristematic bulk,MB),其不定芽诱导率高达87.63%。说明利用茎尖分生组织建立的葡萄再生体系更适合葡萄的遗传转化。

关键词：葡萄器官发生培养基外植体分生体

刺葡萄叶与花和果实及种子的表型性状研究

[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版) [作者] 王美军黄乐刘昆玉杨国顺钟晓红徐丰白描金燕石雪晖

以２５个不同类型的刺葡萄（２１个引自湖南，１个引自福建，３个引自江西）为试材，以叶形结构特征、花器官性状、果实外观性状和种子表型性状为指标，采用分类学性状变异分析和主成分分析方法对１６个分类性状进行综合分析。结果表明：不同类型的刺葡萄其叶形结构值有所不同，其中有３组的叶形编码值相同，即澧县–４刺葡萄与吉首–１刺葡萄、澧县–５刺葡萄与吉首–３刺葡萄、芷江６０Ｃｏ刺葡萄与望城刺葡萄，叶片形态主要表现为三裂浅缘或全缘；根据极轴与赤道轴比和刺葡萄子房形态特征可得知刺葡萄雄能花，子房退化，形状不规则；两性花与雌能花子房形态分为４类，即窄圆锥形、较窄圆锥形、广圆锥形和较广圆锥形，大多数为较广圆锥形；刺葡萄．．．

关键词：刺葡萄叶花果实种子表型性状

侵染葱鳞葡萄孢的一种新型dsRNA病毒

[期刊] 华中农业大学学报 [作者] 吴明德汪青军张静杨龙李国庆

测定了葱鳞葡萄孢(Botrytis squamosa)菌株LeekBc-10和GarlicBc-2的菌丝生长速度、致病力和菌株LeekBc-10中一种dsRNA病毒的cDNA序列及其推定编码的蛋白质序列,并对该病毒进行了系统进化分析。结果表明:菌株GarlicBc-2菌丝生长较快、致病力较强,菌株LeekBc-10菌丝生长较慢、致病力较弱。菌株LeekBc-10菌丝中有2条dsRNA片段(dsRNA-1和dsRNA-2),序列测定表明:dsRNA-1和dsRNA-2核苷酸序列与相对应Botrytis porri RNA virus 1(BpRV1)中2条dsRNA片段的相似性分别为91.7%和...

关键词：灰霉病葱鳞葡萄孢弱毒现象真菌病毒

葡萄A病毒RT-LAMP检测方法的建立

[期刊] 中国农业科学 [作者] 张永江辛言言李桂芬乾义柯

【目的】葡萄Ａ病毒（ＧｒＡｐｅｖｉｎｅｖｉｒｕｓＡ，ＧｖＡ）是葡萄皱木复合病的重要病原之一，以带毒种苗的嫁接为田间主要传播途径。使用无毒葡萄苗木进行生产是控制该病毒病害的根本措施，而简便灵敏的检测技术是筛选无毒种苗的有效保证。为此，开展针对ＧｖＡ的反转录环介导等温扩增技术（ｒｅｖｅｒｓｅｔｒＡｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｌｏｏｐ－ｍｅｄｉＡｔｅｄｉｓｏｔｈｅｒｍＡｌＡｍｐｌｉｆｉｃＡｔｉｏｎ，ｒｔ－ｌＡｍｐ）研究，旨在建立其ｒｔ－ｌＡｍｐ特异性检测方法。【方法】通过比对分析ＧｖＡ的ｃｐ（ｃｏＡｔｐｒｏｔｅｉｎ）基因序列并经引物设计软件ｐｒｉｍｅｒｅｘｐｌｏｒｅ４．０设计，获得６条检测．．．

关键词：葡萄A病毒反转录环介导等温扩增技术检测

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