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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
葛含静 杜双奎 林德慧 向进乐 李志西
【目的】从DNA分子水平研究葡糖醋杆菌及其经高静水压诱变后所得突变株的差异,优化建立了适合葡糖醋杆菌的AFLP技术体系,为细菌纤维素产生菌的高静水压诱变育种提供技术支撑。【方法】以1株从自制醋中分离出来的细菌纤维素产生菌J2及其经高静水压诱变后得到的高产细菌纤维素的突变株M438为材料,对选择性扩增程序的影响因素进行分析,优化建立葡糖醋杆菌的AFLP酶切体系,并对适合葡糖醋杆菌高压诱变前后差异分析的引物组合进行筛选。【结果】酶切模板DNA用量600 ng,酶切时间8 h,过夜连接(反应时间大于10 h),预扩增产物最适稀释倍数为500倍,从24对AFLP选择性扩增引物组合中筛选出了E-T/M-...
关键词：
葡糖醋杆菌 突变株 AFLP 引物对筛选
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林德慧 杜双奎 李志西 葛含静 向进乐
【目的】研究高静水压处理对纤维素产生菌葡糖醋杆菌(Gluconacetobacter J2)致死率、形态特征、生理生化特性、纤维素产量以及菌体生长速率的影响,为细菌纤维素高产菌株的诱变育种提供参考。【方法】将制备好的菌悬液,分装到无菌聚丙烯袋中,用真空封口机封口,然后用高静水压设备在处理压力为200 MPa时,分别处理10,15,20 min;在处理时间为15 min时,处理压力分别为150,200,250 MPa,进行高压处理。【结果】高静水压对菌株J2有显著的作用。处理时间在30 min内时,菌株J2的致死率随着处理时间的延长而增大,至30 min时全部死亡;处理压力在300 MPa内时,...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
尤颖哲
为了更全面地研究双斑东方鲀三倍体诱导方法,促进双斑东方鲀产业健康发展,采用静水压法,探讨了诱导双斑东方鲀三倍体的起始时间、压强大小和处理时间长度等的最适诱导条件。实验结果表明:在水温1820℃时,授精后5 min,采用1015 Mpa的压强、57 min的处理时间的静水压诱导条件,可获得96.67%以上的三倍体诱导率,孵化率亦能达77%以上。本文首次建立了双斑东方鲀的三倍体苗种静水压诱导法,获得了高效的双斑东方鲀三倍体诱导流程,并为其他东方鲀类的生产性三倍体诱导研究提供了参考。
关键词：
双斑东方鲀 三倍体 静水压法
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
郭丹钊 黄为一
葡糖杆菌属菌株JS1(Gluconobactersp.)所产胞外多糖(EPS)经乙醇沉淀、Sevage法脱蛋白、透析、冷冻干燥等方法分离和纯化后得到精制多糖。该多糖呈现明显的体外抗氧化活性,0.2g·L-1的添加量就可显著抑制饱和脂质的氧化,至第9天抑制率可达93.7%,效果优于柠檬酸对照处理(87.7%);对·OH有良好的清除能力,效果与维生素C对照相当,1.0g·L-1的添加量对·OH的清除率可达87.12%。通过柱层析法对精制多糖进一步分离得到P1、P2两个单一组分,并经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其纯度。通过气相色谱和核磁共振分析确定,P1由阿拉伯糖、木糖和半乳糖组成,三者的含量比为1.83...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
许建和 尤锋 吴雄飞 郑春静 石钢德 蒋宏雷 刘伟健 徐永立 张培军
同时采用冷休克法和静水压法进行大黄鱼(Pseudosciaena croceaRichardson)三倍体诱导条件研究,同时比较适合条件下两种方法诱导效果差异以及大批量诱导组不同生长阶段三倍体检出率的差别。结果表明:(1)冷休克法和静水压法都可成功诱导出大黄鱼三倍体。冷休克法适宜诱导条件为20℃培育水温下授精后3 min,在3~4℃海水中处理8~10 min;静水压法适宜诱导条件为同样培育水温下授精后3 min,在静水压450 kg/cm2下处理3 min。三倍体诱导率受处理时刻、处理时间和处理温度(或压力)3因素的影响。(2)综合三倍体诱导率、处理后受精卵原肠期存活率和仔鱼孵化率,静水压法诱...
关键词：
三倍体 大黄鱼 人工诱导 冷休克 静水压
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
白露露 贺卫军 龙青山 王业民 邓子新 陶美凤
为实现糖多孢菌的体内转座诱变,采用刺糖多孢菌的强启动子促进Tn5转座酶基因tnp(5)的表达,优化链霉菌高效转座质粒pHL734,构建了转座质粒pJTn1、pJTn2、pJTn3、pJTn4、pJTn5、pJTn6。结果显示:pJTn1～pJTn6系列转座质粒均可在红色糖多孢菌中高效转座;pJTn1和pJTn5可在刺糖多孢菌中进行转座,获得31个刺糖多孢菌转座突变株;其中30个菌株的基因组中检测到标准的Tn5转座,8个突变株的多杀菌素产量显著降低。表明pJTn系列转座质粒可作为糖多孢菌的体内转座诱变工具,为抗生素的产量调控研究和高产育种靶标基因筛选提供理论依据。
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢凤行 张峰峰 周可 赵玉洁 刘韵娅
采用紫外诱变、化学诱变(DES诱变)及复合诱变的方法对产纤维素酶枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B6的原生质体进行诱变,选育出10个高纤维酶活突变株。摇瓶发酵试验结果表明,所选突变株酶活都显著高于B6,其中,紫外诱变处理的突变株Z12,化学诱变得到的突变株H1以及复合诱变处理的突变株F12的产酶能力相对较强,且产酶能力稳定,酶活值分别为448.3,450.9,491.8U/mL,分别为对照的176%,178%,194%。试验结果说明,对枯草芽孢杆菌的原生质进行诱变可以提高菌株产纤维素酶的能力,而原生质体的复合诱变可提高诱变效应。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
宗晓秋 张东升 黄文坤 彭焕 彭德良
选取中国大豆品种中黄13、黑豆44和黑豆51的子叶为外植体材料,用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)K599菌株诱导3个大豆品种产生毛状根,通过β-葡聚糖苷酶(GUS)染色进行转化效率检测。结果表明:在25℃、12h/d黑暗培养条件下,黑豆44上诱导的毛状根数量最多,显著多于中黄13和黑豆51;黑豆44诱导的毛状根转化率最高,显著高于中黄13,但与黑豆51没有显著差异;光照或黑暗培养对中黄13产生毛状根的效率没有显著影响,但黑豆44和黑豆51在黑暗培养条件下子叶产生的毛状根数明显高于光照培养条件下产生的毛状根数;大豆孢囊线虫(Heterodera glycines ...
关键词：
大豆 毛状根 大豆孢囊线虫 发根农杆菌
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张金林 徐扩 李川 马娟 董金皋
对灰葡萄孢BC4菌株进行紫外线诱变得到了15个诱变菌株,经测定筛选出BC4-1、BC4-2和BC4-15等3个诱变菌株中以BC4-1菌株效果最好。试验发现,用于毒素产生的PD培养基的pH值对产毒能力影响很大,以pH4.0最优。用三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯萃取培养滤液制备BC-粗毒素,生物测定结果表明,以乙酸乙酯萃取所得粗毒素对杂草种子萌发及生长抑制作用最强。通过柱层析法和HPLC法分离和纯化除草活性组分,得到1个在271nm有最大UV吸收的化合物,该组分在100mg·L-1浓度下对马唐的生长具有强烈的抑制作用,在50mg·L-1浓度下可完全抑制马唐和反枝苋种子的萌发。
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
颜菲 毕平 张涛 潘皎
将科研项目成果应用于本科实验教学,设计了"紫外(UV)和甲基磺酸乙酯(EMS)诱变选育大肠杆菌赖氨酸营养缺陷型菌株(Lys–)"综合实验项目。以大肠杆菌(E.coli DH5a)为出发菌株,通过UV和EMS单一诱变和复合诱变的方法,利用青霉素法淘汰野生型菌株,采用逐个检出法进行初筛、划线对照法进行复检,通过传代培养检测Lys–突变株的遗传稳定性;对青霉素淘汰野生型菌株相关步骤重要参数的确定从原理和方法上进行探讨;通过优化UV、EMS诱变及复合诱变条件,对选育大肠杆菌Lys–突变株的高效诱变方法进行探讨。
[期刊] 林业科学
[作者]
苏筱雨 王婧 任晓婧 李会平
【目的】对分离自美国白蛾幼虫虫尸的１株白僵菌菌株ＢＨ０１进行紫外线诱变，以获得高毒力突变株，为美国白蛾的生物防治提供新的工程菌株。【方法】将白僵菌的孢子悬浮液置于紫外灯下进行诱变处理，诱变处理后获得的菌株进行培养后以产孢量超过原始菌株２倍以上作为依据筛选正向突变菌株，测定其对美国白蛾５龄幼虫的致病力，筛选高毒力突变株进行继代培养，研究其产孢量和致病力的稳定性。【结果】对原始菌株ＢＨ０１经紫外线诱变处理后获得２８个菌落，孢子校正死亡率为８５．５％，将获得的菌落重新接种于ＰＤＡ平板上得到产孢量高于原始菌株２倍以上的正突变株ＢＨ０１－５、ＢＨ０１－１２、ＢＨ０１－２５。其中诱变菌株ＢＨ０１－５对美国．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
穆昭艳 汪立平 赵勇 王娜 李安雪 汪欣
异甘露聚糖酶是制备益生元甘露寡糖的关键酶。对分泌异甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌K-6(Bacillus subtilisK-6)的紫外诱变正突变株K-6-9(Bacillus subtilis K-6-9)的诱变机理进行了研究。通过对出发菌株和正突变株的异甘露聚糖酶基因进行克隆和表达,以生物信息学的方法对异甘露聚糖酶基因序列和蛋白序列进行分析,得到突变株的突变碱基以及突变氨基酸。基因序列研究结果显示,突变体的总碱基突变频率为1.02,碱基突变类型包括碱基的颠换、转换。在检测到的11个碱基突变中,转换的频率(54.5%)是颠换频率(45.5%)的1.2倍,其中,C/T之间的转换所占比例最大,A-G和A...
关键词：
异甘露聚糖酶 紫外线诱变 基因克隆 突变
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王晓云 王慧 赵燕 陈红菊 季相山
以凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）养殖池塘底泥中分离的枯草芽孢杆菌（ＢａｃｉＬＬｕｓ ｓｕＢｔｉＬｉｓ）Ｂｃ２为出发菌株，利用紫外诱变的方法培育蛋白酶活性高的枯草芽孢杆菌菌株，并评价其降解饲料的能力。结果表明：（１）经６次紫外诱变，突变菌株Ｂ３８的透明圈直径（Ｈ）与菌落直径（ｃ）之比（Ｈ／ｃ值）达到６．４２，提高了２．１３倍；（２）福林酚法测得Ｂ３８的蛋白酶活性为８６．８２ ｕ／ｍ Ｌ，是出发菌株Ｂｃ２的３．１４倍，但紫外诱变对Ｂ３８纤维素酶活性影响不显著；（３）连续传代培养１０代后发现Ｂ３８产蛋白酶和纤维素酶能力保持稳定，证明诱变菌株具有较好的遗传稳定性；（４）利用凯氏．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陶巧静 曹斌 钱萍仙 饶慧云 刘蓉 吴月燕
利用正交试验设计Ｌ１６（４５）筛选适合葡萄ＳＳＲ标记的ＰＣＲ反应体系，对５２份葡萄种质进行ＳＳＲ标记，采用ＵＰＧＭＡ聚类法分析葡萄诱变群体和亲本的遗传关系．优化的葡萄ＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系为：ＭＧ２＋１．５ ＭＭｏＬ·Ｌ～（－１），ｄ ＮＴＰ ０．２ ＭＭｏＬ·Ｌ～（－１），ＴＡｑ酶１．０Ｕ，引物０．４μＭｏＬ·Ｌ～（－１），模板ｄＮＡ ５０ ＮＧ，总体积２０μＬ．４８对引物共扩增出２７０条带，其中多态性条带２４９条，多态性百分率为９２．２％，有３１对引物的多态性百分率达到了１００％．每对引物可扩增３～１０个等位基因，平均为５．６个．５２个葡萄样品的遗传相似系数为０．６８１～０．８８９，各诱变．．．
关键词：
葡萄 SSR 体系优化 诱变 遗传多样性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
冯学珍 郑媛 王跃军 孙谧 于建生 程江峰
以1株产海洋溶菌酶活性较高的菌株(S-12-86)为原始菌株,对其原生质体的制备、再生及紫外诱变育种进行了研究。实验所确定的原生质体的最佳制备条件为:菌株S-12-86培养18h,溶菌酶浓度为1.0mg/ml,在35℃下,酶解30min,原生质体形成率为97.6%,再生率为23.6%。同时实验所确定的原生质体诱变的适宜条件为:30W紫外灯下80cm照射120s。对大量再生突变株进行筛选,最终获得了1株遗传性能稳定的菌株R-J-101,其产酶活力达到1808U/mg,比原始菌株(1290U/mg)提高了40%。
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