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[期刊] 林业科学
[作者]
冯健 齐力旺 孙晓梅 张守攻
为研究落叶松在扦插生根过程中基因的表达情况,以落叶松扦插生根率存在显著差异的2个全同胞无性系为材料构建差异表达cDNA文库,获得正、反2个消减文库。随机挑取正库和反库各500个克隆进行测序。将测序结果整理后,正库得到272个UniEST,反库得到249个UniEST。经生物信息学分析表明,这些UniEST分别属于新陈代谢、信号途径、物质运输、抗性相关、生长发育等类别基因,这些基因可能在扦插生根过程中具有重要作用。选择部分有代表性的基因,运用半定量PCR技术对这些基因在落叶松不同器官、不同扦插阶段的表达情况及对IBA的响应进行检测。检测结果表明激素在落叶松扦插生根过程中发挥重要作用,除激素类基因...
关键词：
落叶松 SSH文库 扦插 生长素
[期刊] 林业科学研究
[作者]
冯健 齐力旺 孙晓梅 韩素英 张守攻
以落叶松扦插生根率存在显著差异的2个全同胞优良无性系茎和根为材料,应用抑制消减杂交技术构建了扦插生根过程中2个差异表达cDNA文库,酶切效率检测、连接效率检测、差减效率检测结果表明:这2个落叶松扦插生根过程差异表达cDNA文库构建成功。利用PCR扩增和点杂交试验筛选阳性克隆,将阳性克隆测序,并经生物信息学分析,最终获得521个Un iEST。
关键词：
落叶松 抑制消减杂交文库 扦插
[期刊] 中国农业科学
[作者]
宋杨 吴树敬 张艳敏 陈学森
【目的】寻找苹果短枝型枝条形成相关基因,为进一步探索苹果短枝型芽变形成机理及选育新的短枝型苹果品种奠定基础。【方法】利用抑制性差减杂交技术构建正反向苹果短枝型芽变枝条和正常型枝条差异表达cDNA文库,利用荧光定量RT-PCR验证文库中克隆的插入片段。【结果】从两个文库中共获得291个有效阳性克隆,插入片段大小主要分布在300—600 bp之间。利用GenBank的BLAST比对分析,其中126个表达序列标签(EST)找到了与之匹配的同源序列。获得的cDNA片段功能涉及代谢、转录、胁迫响应、转运、光合和信号转导;有165个EST片段未找到同源序列。对文库中EST序列进行实时荧光定量RT-PCR验...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
麻文俊 王军辉 张守攻 孙晓梅 赵海祥 宁延龙
对4个日本落叶松优良无性系(日抚27-3-1、日宽17-3-1、日草82-4-3、日草103-3-1)扦插生根过程中插穗生根性状和插穗内源多酚类物质含量进行了动态分析。结果表明:日本落叶松无性系扦插生根性状存在较大差异,日抚27-3-1和日宽17-3-1较易生根,日草103-3-1和日草82-4-3难生根。插穗内源多酚类物质变化趋势差异较大,总酚酸含量随扦插时间的延长而不断降低,且较易生根的2个无性系插穗内的各种酚类物质含量均低于难生根的2个无性系;其中日抚27-3-1和日宽17-3-1插穗内邻苯二酚、对羟基苯甲酸、阿魏酸、儿茶酸和没食子酸含量都随扦插时间而不断减小,且减小幅度较小;日草82-...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
杨俊明 沈熙环
为揭示华北落叶松扦插生根能力的遗传变异规律和提高选择利用效率 ,对 4～ 8龄全同胞优良单株、全同胞家系、半同胞优良单株和半同胞家系幼树的嫩枝插条 ,采用自控喷雾进行了扦插试验 .生根率、根重量、根条数和根长度间呈高度遗传相关 ,生根率是反映生根能力高低的主要指标 .生根能力的差异主要受基因加性效应控制 ,对生根能力选择利用效果明显 ,单株选择较家系选择效果好 ,其中以全同胞单株选择利用潜力最大 .采穗母树的生长与生根不相关 ,速生单株的生根能力与家系生根能力也不相关 .在速生全同胞家系中选择生长快、生根能力强的单株 ,进行控制授粉 ,按生根和生长性状进行轮回选择 ,会收到良好的改良效果
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
陈华 蔡铁城 张冲 邓烨 熊发前 唐荣华 周双彪 庄伟建
以‘闽花6号’品种为材料,利用SMART技术成功构建了花生叶不同生育时期混合的全长c DNA文库,并对文库的部分序列进行测序及分析.结果表明,该文库原始库容为2.25×106cfu·m L-1,重组率达100%,插入片段大小为750-2000bp,平均插入片段大小为1000 bp,达到文库质量要求.随机挑选50个单克隆进行5'端测序,共获得50条有效序列.通过与NCBI非冗余蛋白质数据库进行比对和注释,获得已知功能基因或具推测功能的基因25个,未知功能基因14个,新基因11个,其中49个(98%)基因为花生未报道的基因.参与代谢过程和胁迫响应的基因表达量较高.
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
谢小玉 侯爽 冉春燕
从前期构建的干旱诱导的甘蓝型油菜SSH文库中随机挑取了646个阳性克隆,对其进行测序及生物信息学分析。结果表明:通过测序,获得639条高质量EST序列,186条单一序列(重叠群89条,单拷贝序列97条);比对分析发现,166条单一序列有同源序列;乙醛酸和二羧酸代谢、碳代谢、光合中的碳固定、氨基酸的生物合成、氮代谢等在植物抵抗干旱胁迫中发挥着重要的作用;MYB、NAC5、锌指蛋白等转录因子以及苹果酸脱氢酶、核酮糖1,5–二磷酸羧化酶/加氧酶、果糖–1,6–二磷酸醛缩酶、磷酸核酮糖激酶等与光合相关的基因以及P5CS基因、F–box蛋白等参与油菜干旱胁迫应答;单一序列涉及的功能中所占比例较大的是蛋白绑定和催化活性。以抗旱性较强的甘蓝型油菜Holiday为材料,在开花初期进行干旱处理,在处理的第1、3、5、7天(土壤含水量分别为60%、40%、30%、20%)进行叶片取样,采用实时荧光定量PCR,分析基因表达量,发现随机选取的文库中的3个基因(P5CSb、BnSOS2和CAM)在干旱胁迫下表达水平均上调,推测这3个基因在抵御干旱胁迫中发挥了重要作用。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李龙 张立峰 齐力旺 韩素英
本研究克隆了日本落叶松体细胞胚胎发生相关受体类蛋白激酶基因LaSERK1,并检测了在不同培养条件下LaSERK1的表达情况,发现LaSERK1与已发现的其他物种SERK1基因有高度相似性,qRT-PCR结果显示:LaSERK1在体胚发生早期高表达。结果表明:LaSERK1可能在落叶松体胚发育早期起重要作用,LaSERK1也可能成为早期胚性细胞的标记基因。
[期刊] 林业科学
[作者]
谭晓风 胡芳名 谢禄山 石明旺 张党权 乌云塔娜
为研究油茶种子在油脂转化高峰期的基因表达并分离克隆与油脂合成等有关的重要基因,以油茶优良无性系湘林1号和湘林4号近成熟种子为材料构建cDNA文库;随机挑取2327个克隆进行3′端测序构建EST文库。将数据完整并无X、N的1979条cDNA序列与NCBI核酸数据库的非冗余序列进行同源性比较,确认763条cDNA序列与核酸数据库中其他物种的DNA序列具有很高或较高的同源性,可确认266种基因;有1216个克隆序列为未知功能的基因序列。各类基因表现出不同的表达丰度,其中贮藏蛋白基因、与基因表达调控相关的基因、抗逆相关基因、种子成熟和胚胎发育相关的基因等为高丰度表达,与脂肪酸代谢相关的基因等为中丰度表...
关键词：
油茶 cDNA EST 文库 表达基因
[期刊] 林业科学
[作者]
王笑山 孙晓梅 齐力旺 王建华 王树仁
研究了高、中柱式、矮台式整形修剪方法对不同年龄 (2～ 1 0a生 )日本落叶松采穗母株生长、产穗量、插穗生根 (无激素处理 )及 2a生扦插苗生长的影响。结果表明 ,日本落叶松实生幼年母株每年进行整形修剪 ,虽然不能完全抑制老龄化对母株插穗生根的影响 ,但有助于幼化复壮母株组织。未加整形修剪的 1 0a(实际为 9 5a)生树形母株的插穗生根率只有 2 4 8% ,而同龄经不同剪控措施处理的母株插穗生根率可达5 5 2 %～ 81 1 % (平均 64 9% ) ,均极显著地大于对照。整形修剪方式不同 ,对母株生长 (地径 )、产穗量和插穗生根率等的影响不同。高、中柱式母株由于修剪相...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
吴涛 张俊红 韩素英 杨文华 李万峰 齐力旺
以2年生日本落叶松实生苗为材料构建其小RNA文库,对283个克隆进行PCR验证后测序,通过生物信息学分析鉴定文库中的microRNA并进行qRT-PCR验证。结果表明:(1)小RNA文库的体积为50 mL,总库容量为5.25×106cfu,重组率为92.6%,插入片段长度约65 bp,与小RNA连接片段长度吻合。(2)去除rRNA(86个)、tRNA(14个)等非目的序列后,获得日本落叶松28个保守miRNAs,属于17个miRNA家族;其中,15个miRNAs(miR159c、miR160a、miR162a、miR164b、miR165a、miR166a、miR166a*、miR166b*、...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
王建华 孙晓梅 王笑山 徐成立 丁彪 王效东
系统地研究了全光雾插条件下母株年龄、激素种类及其浓度对日本落叶松半木质化插穗生根的影响,并在此基础上利用隶属函数法对各处理的生根效果进行了综合评价,分别为不同年龄阶段的落叶松扦插选配出最佳激素种(?)及其浓度的处理组合,12．5、8．5 a子代林插穗经最佳组合处理后生根率分别可达78．8％、92．5％,极大地提高了较高年龄日本落叶松扦插繁殖的生根能力。三因素方差分析结果表明,母株年龄(A)、激素种类(B)和激素浓度 (C)对落叶松插穗生根率、生根量和偏根率等生根性状的影响达极显著或显著水平,同时三因素互作效应(A×B× C)反双因素互作效应(A×B、A×C、B×C)对绝大多数性状的影响也很显著...
[期刊] 林业科学
[作者]
黄麟 徐旭凌 李超 叶建仁 吴小芹
松材线虫取食和致病相关基因的鉴定是揭示松材线虫病致病机制的重要研究内容。以松材线虫混合虫体为测试方,线虫卵为驱动方,构建二者差减cDNA文库。文库测序结果经序列拼接、功能注释,共获得松材线虫虫体特异表达的有效EST序列354个,拼接后获得34个重叠群,其中15个重叠群获得明确的功能注释,其中MixC12、MixC25、MixC33分别与过氧化物酶、β-1,4内切葡聚糖酶、锌指家族蛋白有较高的同源性,这些基因被认为与植物线虫的取食和致病性密切相关。RT-PCR分析验证了所获得的差减cDNA的代表性。
[期刊] 林业科学
[作者]
刘玉民 刘亚敏 马明 何丙辉 李昌晓
对马尾松嫩枝扦插苗生根特性进行观测,研究其生根过程中相关氧化酶(PPO,POD,IAAO)活性、黄酮类物质和营养物质等內源物质的动态变化。结果表明:马尾松属于愈伤组织生根类型,用适宜含量的生根剂GGR6处理马尾松插穗能显著提高其生根率和根系质量,且能改变內源物质的变化动态。在马尾松嫩枝扦插过程中,大部分內源物质均成规律性变化,其中PPO和IAAO活性在愈伤组织诱导期上升,在愈伤组织形成期达到高峰,在根系形成期下降;POD活性在愈伤组织形成期和根系形成期均出现高峰。內源黄酮类物质含量在扦插初期逐渐下降,30～50天又急剧升高,在愈伤组织大量形成期达到高峰,然后又逐渐下降;且黄酮含量的变化与过氧化...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张俊红 吴涛 韩素英 齐力旺 张守攻
以落叶松体细胞胚胎发育8个阶段的材料构建小RNA文库,进行了Solexa测序、miRNA鉴定、靶基因预测、qRT-PCR定量分析等研究。结果表明:发现的87个miRNAs中,29个为针叶树特异的,来自12个家族,分别为miR946、miR947、miR950、miR951、miR1311、miR1312、miR1313、miR1314、miR1316、miR3701、miR3702和miR3704,其中25个长度为22nt,且在小RNA文库中的最低拷贝数为18(miR1311),最高拷贝数为33 009(miR950)。发现12个miRNA家族的34个靶基因可能参与生长发育、抗病、AGO反馈调...
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