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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
武悦 徐良 王娟娟 龚义勤 谢洋 柳李旺
[目的]为揭示萝卜(Raphanus sativus L.)硝酸还原酶基因(RsNR)的分子特征,降低硝酸盐含量,对萝卜RsNR基因进行分离与表达特性研究。[方法]基于本实验室转录组测序所得unigene序列分离RsNR基因cDNA,利用生物信息学方法进行序列分析,采用RT-qPCR方法对不同浓度KNO3(0、5、20、30和50mmol·L-1)和不同时间(0、4、8、12和24h)处理的萝卜中RsNR基因表达进行检测,并测定硝酸盐含量和硝酸还原酶活性(NRA)。[结果]获得萝卜RsNR基因cDNA序列(GenBank登录号:KM272859),开放阅读框为2742bp,编码913个氨基酸,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王茜龄 余亚圣 杨艳 李军 刘长英 吕蕊花 余茂德
【目的】以桑树栽培品种桂优62号为材料,克隆桑树硝酸还原酶(nitrate reductase,NR)基因全长cDNA和DNA序列并分析其序列特征,在此基础上研究桑树硝酸还原酶基因在桑树细胞脱分化和分化过程中的表达特征以及影响因素,为进一步阐述硝酸还原酶在桑树生长发育中的作用机制奠定基础。【方法】基于单倍体川桑(Morus notabilis Schneid)基因组数据(http://morus.swu.edu.cn/morusdb)注释的scaffold570序列设计特异引物,硝酸钾处理桑树叶片48 h后使用RNAiso Plus(TaKaRa)和改良CTAB法提取总RNA及基因组DNA,分...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵丽华 豆献英 赵志光 蔡伟明
克隆并分析了水稻中两个可能的硝酸还原酶基因在多种非生物胁迫和重力刺激下的表达变化。AK102363(OsNR1)和AK102178(OsNR2)是水稻中两个可能的硝酸还原酶基因。在盐胁迫处理下,两基因均下调表达。OsNR1在100 mmol/L NaCl处理24 h时表达下调最显著,而OsNR2也是在100 mmol/L NaCl处理24 h时表达下调最显著。用15%PEG模拟干旱处理,两基因表达下调,24 h时差异最显著。低温处理24 h后,基因OsNR1同样下调表达。不同浓度的NO供体SNP处理,两基因均受诱导而上调表达,在0.1 mmol/L的SNP处理12 h时表达量最高。向重性刺激处...
关键词：
一氧化氮 胁迫 重力 基因相对表达量
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周艳孔 邵文婷 龚义勤 朱献文 马二磊 赵天荣 柳李旺
以萝卜Nau-DY06为试材,采用亲和指数和荧光显微镜进行自交不亲和性测定,结果表明其为稳定自交不亲和系。根据不同作物SRK基因保守序列设计特异引物,以Nau-DY06柱头为材料,采用RT-PCR扩增获得SRK基因cDNA序列,包含2562bp开放阅读框(ORF),命名为RsSRK-a(GenBank登录号:GQ121139)。该基因cDNA序列编码853个氨基酸,其核苷酸序列与甘蓝型油菜SRK3、羽衣甘蓝SRK13-b基因同源性均为89%。RsSRK-a基因序列编码的蛋白质相对分子质量为96.6×103,等电点为6.69。半定量RT-PCR分析表明,RsSRK-a基因在自交不亲和系花期柱头中...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杜丽娜 王琪 王春兰 苏睿 谭春艳 蒲燕 陈发波 赖彪
为确定参与胭脂萝卜花青苷生物合成的类黄酮糖基转移酶基因(RsUFGTs),从萝卜基因组中筛选出3个候选的RsUFGTs基因,以胭脂萝卜为材料,克隆了3个RsUFGTs的开放阅读框(ORF)并进行序列及表达分析。结果表明:RsUFGT1和RsUFGT2的ORF长度分别为1 383和1 374 bp,分别编码460和457个氨基酸,而RsUFGT3提前终止;氨基酸序列比对和系统进化树分析表明RsUFGT1和RsUFGT2均含有PSPG保守特征结构域,且属于ClusterⅠ亚族成员;利用实时荧光定量PCR分析它们在不同着色萝卜品种中的表达发现,RsUFGT1在‘红心1号’胭脂萝卜皮和肉组织中表达量较高,在‘满堂红’萝卜皮和‘春不老’的萝卜皮与肉中均不表达,其表达量与花青苷含量呈正相关,而RsUFGT2的表达则无明显规律。因此,RsUFGT1可能是胭脂萝卜花青苷生物合成的重要结构基因之一。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
岳川 曹红利 周艳华 王璐 郝心愿 王新超 杨亚军
【目的】克隆谷胱甘肽还原酶基因CsGRs,研究CsGRs在茶树抵御不同逆境胁迫中的作用。【方法】在茶树转录组数据库中搜索茶树CsGRs,根据获得的基因片段,设计反转录PCR(RT-PCR)引物和RACE-PCR特异引物,从茶树中克隆CsGRs的cDNA全长序列,并利用在线生物信息学软件对其进行分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析CsGRs在茶树不同组织间的表达差异及其在低温、干旱、高盐胁迫和ABA处理下的表达模式,利用分光光度计测定低温胁迫和干旱胁迫下叶片中还原型谷胱甘肽(GSH)的含量变化。【结果】RT-PCR克隆获得CsGR1的cDNA全长,其长度为1 827 bp,包含1 ...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
董丽丽 龚凌燕 陈磊 涂佳丽 张水明
［目的］肉桂酰辅酶Ａ还原酶（ＣＣＲ）是木质素合成的关键酶。本文旨在通过克隆和鉴定石榴ＣＣＲ基因（Ｐｇ ＣＣＲ）来探究石榴木质素的合成机制以及培育软籽石榴新品种。［方法］以石榴品种‘红玉石籽’（ＰｕｎｉＣＡ ｇＲＡｎＡｔｕｍ‘ＨｏｎｇｙｕｓＨｉｚｉ’）籽粒为材料，利用ＲＡＣＥ和Ｒｔ－ＰＣＲ的方法，获得Ｐｇ ＣＣＲ基因的全长序列。通过实时荧光定量ＰＣＲ分析Ｐｇ ＣＣＲ基因在不同品种、不同组织、籽粒不同发育时期的表达水平。［结果］Ｐｇ ＣＣＲ基因Ｃ ＤｎＡ全长序列１ ０１７ ｂＰ，编码３３８个氨基酸，包含被认为是ＣＣＲ蛋白催化位点的保守序列ＫｎＷｙＣｙｇＫ。系统进化树分析表明，Ｐｇ ＣＣＲ与其他物种．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
吴蓓 李梦瑶 王广龙 黄蔚 熊爱生
［目的］肉桂酰辅酶Ａ还原酶ＣＣＲ（ＣｉｎｎＡｍｏｙｌ－Ｃｏ Ａ ＲｅｄｕＣｔＡｓｅ）在植物木质素代谢中起重要的作用，能够将羟基肉桂酸还原生成肉桂醛。本文目的是研究不同芹菜中肉桂酰辅酶Ａ还原酶基因ＡｇＣＣＲ在芹菜中组织表达和非生物胁迫过程中的响应情况。［方法］以２个芹菜品种‘六合黄心芹’和‘文图拉’为材料，分别克隆出编码肉桂酰辅酶Ａ还原酶的基因ＡｇＣＣＲ。利用荧光定量ＰＣＲ分析不同芹菜组织和２种芹菜在高温、低温、干旱和盐胁迫下ＡｇＣＣＲ的表达情况。［结果］序列分析表明，‘六合黄心芹’和‘文图拉’中ＡｇＣＣＲ基因均含有１个长度为１ ０１４ ｂＰ的开放阅读框，编码３３７个氨基酸，二者的核苷酸位点有３．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘晓丛 曾丽 刘国锋 彭勇政 陶懿伟 张邀月 王梦茹
【目的】克隆万寿菊(Tagetes erecta L.‘Scarletade’)类胡萝卜素裂解双加氧酶基因CCD1(TeCCD1),分析其序列特征和表达特性,为阐明其在类胡萝卜素降解途径中生物学功能及进一步探讨万寿菊花色形成机理提供理论基础。【方法】依据万寿菊花蕾转录组数据,利用同源序列比对结果设计引物,结合RT-PCR技术克隆获得万寿菊CCD1 cDNA全长,分析其序列特征;利用Real-time PCR分析舌状花未开花蕾、半开花蕾、开放的头状花序和完全开放的头状花序4个不同发育时期的基因表达特性。【结
[期刊] 水产学报
[作者]
颜玲 钟婧妍 袁永斌 张瑶 胡宏辉 陆婷婷 白志毅
为了阐明谷胱甘肽硫转移酶Pi类基因(HcGSTP1)在三角帆蚌类胡萝卜素转运中的作用，并探讨该基因表达与三角帆蚌壳色的相关性。本实验克隆并鉴定了三角帆蚌HcGSTP1基因，对其进行了序列特征和进化分析，通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和原位杂交(ISH)技术检测了HcGSTP1基因在三角帆蚌中的表达及定位情况，利用RNAi技术对其功能及作用机制进行了初步分析。结果显示，HcGSTP1基因的全长cDNA序列为1 317bp，其中开放阅读框(ORF)区为618 bp，编码205个氨基酸，包含一个GST-N-pi结构域和GST-C-Pi结构域。qRT-PCR结果显示，HcGSTP1基因在紫蚌肝胰腺和斧足中表达量极显著高于白蚌，且在紫蚌边缘膜和中央膜中表达量显著高于白蚌。原位杂交结果显示，HcGSTP1基因在外套膜的外褶、背膜区、腹膜区、部分中褶以及外褶与中褶连接处出现明显的阳性信号。RNAi技术结果显示，HcGSTP1基因在边缘膜中表达的干扰率达83.74%，同时发现边缘膜中总类胡萝卜素含量(TCC)降低了30.12%。上述实验结果初步证实HcGSTP1基因参与三角帆蚌类胡萝卜素的转运，进而可能会影响贝壳及珍珠呈色，为深入理解三角帆蚌类胡萝卜素转运及贝壳和珍珠颜色形成机制补充了分子依据。
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
刘美兰 谭晓风 龙洪旭
以葡萄桐近成熟种子为材料,根据油桐转录组数据库中已知部分烯脂酰CoA还原酶(enoyl-CoA reductase,ECR)序列,利用RACE克隆技术,克隆得油桐烯脂酰CoA还原酶的全长c DNA序列,命名为VfECR,并对该基因的核苷酸序列及其相应氨基酸序列的理化性质、疏水性/亲水性、跨膜结构域、蛋白质的二、三级结构、亲缘关系进行分析。结果表明:该基因全长1 154 bp,含有一个933 bp的开放阅读框,编码310个氨基酸,属于不稳定的亲水性蛋白,含有6个明显的跨膜结构域,且与陆地棉ECR蛋白的同源性最高,亲缘关系最为接近。同时利用RT-qPCR对VfECR基因的组织特异性和种子发育过程中...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙盛明 戈贤平 傅洪拓 朱健 张世勇
利用cDNA末端快速克隆方法获得了青虾(Macrobrachium nipponense)的过氧化物还原酶基因(Prx)全长cDNA序列。该基因cDNA全长878 bp,包括72 bp的5′末端非翻译区,594 bp的开放阅读框(ORF),212 bp的3′末端非翻译区,开放阅读框编码198个氨基酸。氨基酸相似度比对显示,所分离的青虾过氧化物还原酶基因包括两个半胱氨酸残基的区域"FYPLDFTFVCPTEI"和"GEVCPA"。系统进化树分析表明,青虾过氧化物还原酶基因与南美白对虾(Litopenaeus vannamei)过氧化物还原酶聚在一起,具有最近的亲缘关系。荧光定量PCR检测显示,过...
[期刊] 水产学报
[作者]
胡菊 冯彩 马晓 吴利敏 刘慧芬 宋红梅 胡隐昌 田雪 李学军
为探究SPR在锦鲤体色形成中的作用,实验利用RACE技术获得spr cDNA全长序列,并分析其时空表达模式,同时利用Western blot和免疫组织化学方法检测SPR蛋白在皮肤、鳍条和鳞片中的分布和表达情况。结果显示,spr cDNA全长879 bp,包含132 bp和134 bp的5′和3′非编码区,开放阅读框510 bp,编码170个氨基酸残基。氨基酸序列比对和系统进化树分析显示,锦鲤SPR具有保守的adh_short_C2结构域,与金鱼相似性高达97.7%。spr在各组织中均有表达,其中皮肤的表达量最高。spr在锦鲤个体发育的4个阶段表现为先降后升。纯红、纯白及红白3种体色锦鲤皮肤、鳞片和鳍条中spr mRNA和蛋白表达水平基本一致,在纯红锦鲤皮肤中表达量最高,红白锦鲤白色皮肤、鳞片和鳍条的表达量最低。SPR组织定位分析显示,红色锦鲤和白色锦鲤皮肤中均检测到阳性信号,其中红色皮肤阳性信号强度高于白色皮肤。研究表明,spr可能与锦鲤红/黄色素细胞的分化和形成具有一定相关性,参与了锦鲤体色的形成。
关键词：
锦鲤 spr 基因克隆 蝶啶代谢 体色
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李彦肖 彭海涛 管苇 许小海 李英 侯喜林
利用cDNA-AFLP技术,从芜菁花叶病毒(TuMV)侵染的不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)幼叶中分离到1条编码谷胱甘肽还原酶的基因片段,通过电子克隆得到其cDNA全长为1 503 bp,编码501个氨基酸,命名为Nhc-cGR1。对该基因进行生物信息学分析,并利用实时定量PCR研究其在TuMV侵染和水杨酸(SA)、茉莉酸(JA)、乙烯(ET)诱导下的表达情况。结果表明:该基因作为病原相关基因参与了TuMV病害响应,并通过增加自身表达量来激活细胞内的信号转导途径,诱导各种防卫反应相关基因的表达;同时,SA和JA抑制该基因的表达,外施...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张飞雪 虞章红 刘坤宇 文锴 王建军 侯喜林 李英
[目的]本文旨在探究醛酮还原酶AKR4C亚家族BcAKR4C9基因在不同激素处理及逆境胁迫中的表达模式,从而分析BcAKR4C9基因在不结球白菜作物中的生长代谢和逆境胁迫中可能发挥的作用。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,克隆了BcAKR4C9基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析BcAKR4C9基因在不同组织,高温、低温、NaCl胁迫、伤害胁迫,以及水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸等处理下的基因表达变化。[结果]序列分析表明,BcAKR4C9基因包含1个长度为948
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