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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李华 刘延琳 夏惠 张振文
应用以菌落为模板的聚合酶链反应(PCR)技术,筛选插有酒类酒球菌苹果酸-乳酸酶基因mleA和苹果酸通透酶基因mleP序列的重组阳性克隆,筛选到的阳性克隆分别扩增到约1600bp及900bp的条带,且与两个目的基因片段大小一致。提取阳性克隆的质粒进一步进行双酶切(EcoR -Kpn )及质粒PCR鉴定,证明结果正确。菌落PCR技术的应用使重组质粒的筛选和鉴定得以优化和简化。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
肖之奇 林占熺
【目的】进一步研究菌草“绿洲一号”根际土壤中的微生物群落组成情况，以期筛选出其根际土壤中的有重要生态价值的优势菌株。【方法】通过对种植了菌草“绿舟一号”和未种植菌草“绿洲一号”的盐碱地分别进行土壤取样，运用16sDNA高通量测序对其进行微生物种群测序，明确两者之间的微生物种群差异，从而筛选出菌草“绿洲一号”根际土壤中的优势菌株，对有重要生态价值的优势菌群进行分离培养及菌落PCR鉴定。【结果】实验地段中的土壤微生物种群丰度要远远高于空白地段，同时实验地段中的土壤微生物种群结构组成相较于空白地段也具有明显变化，菌草“绿洲一号”根际土壤中有重要生态价值的优势菌株为酸杆菌和鞘氨醇单胞菌。对其进行分离培养之后，菌落PCR鉴定表明优势菌株被成功分离培养。【结论】本文通过对菌草“绿洲一号”根际土壤中具有重要生态价值的优势菌株进行筛选培养，为利用菌草“绿舟一号”改良盐碱土壤提供理论依据具有重要的指导意义。
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
杨桂梅 唐文乔 李会荣 黄路标 任大明 鲍宝龙
采用16S rDNA特征序列PCR-DGGE法,分析了不同饵料饲养的暗纹东方的表皮、性腺和肠道中,以弧菌为主的细菌群落的组成。结果表明:(1)共鉴定出暗纹东方体内18种微生物,均归属于变形细菌的gamma亚群,其中13种为弧菌科细菌,3种为肠杆菌科细菌,2种为气单胞菌属细菌;(2)投喂鲜活鱼虾的与投喂人工配合饲料的暗纹东方肠道和性腺中的细菌组成是不同的,在性腺中分离到的所有12种细菌中,只有2种细菌是相同的,约占17%;在肠道中分离到的所有13种细菌中,有4种是相同的,约占31%。而在表皮上所分离到的11种细菌中,有7种细菌是相同的,约占64%;(3)DGGE特征条带V1、V13、V18、V1...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李闯 彭志清 李寅琛 吴升山 林鹿 曾宪海
为实现酵母阳性转化子的高效筛选，亟需寻找一种快速、简便的菌落PCR方法用于酵母的分子遗传鉴定.以酿酒酵母为底盘微生物，转化重组质粒或染色体整合片段，挑选抗性筛选单菌落，采用不同预处理方法处理菌体以进行菌落PCR检测，并对结果进行分析.相比其他预处理方法，使用微波冻融法制备的模板进行菌落PCR检测，稳定性好、检测性能强，适用于短链DNA以及3 000 bp以上目的片段的扩增；同时，该方法可进行毕赤酵母阳性克隆的筛选.表明微波冻融法通用性较强，制备的模板适合不同遗传背景以及基因操作方式下酵母菌落PCR检测.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵楠 刘强 魏康丽 潘磊庆 屠康 张伟
[目的]为探讨鸡蛋污染过程中微生物总量无损预测的可行性,本文研究了一种基于近红外高光谱成像技术可视化鸡蛋中菌落总数的无损预测方法。[方法]将鸡蛋样本在接种大肠杆菌和铜绿假单胞菌的混合菌悬液后储存,采集并统计不同污染程度鸡蛋样本的原始高光谱信息和菌落总数信息;在完成最佳预处理方法筛选后,结合连续投影算法(SPA)分别建立了基于全波段和特征波段光谱信息下的偏最小二乘法(PLS)和支持向量机(SVM)菌落总数预测模型;优选出相对最佳预测模型后进一步实现对鸡蛋内部污染程度的可视化研究。[结果]二阶导数预处理效果相对最佳,其中交叉验证集相关系数R_(CV)为0.88,交叉验证集均方根误差为0.82 lg(CFU·g~(-1));鸡蛋中菌落总数的相对最佳预测模型为基于特征波段下SVM模型,其中建模集相关系数R_C为0.88,预测集相关系数R_P为0.84,建模集和预测集均方根误差分别为0.86和0.97 lg(CFU·g~(-1));根据鸡蛋内部污染程度及光谱特性的差异,建立了鸡蛋内部污染程度伪彩色图像。[结论]近红外高光谱成像技术结合化学计量学及图像处理方法,可实现对鸡蛋内部菌落总数的无损预测及污染程度的可视化,该技术可以为鸡蛋的安全性在线检测提供参考。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王洪洋 胡利华
以pMycVec1/pMycVec2载体为基础,构建了筛选和鉴定细菌sRNA调控靶标的双质粒系统。对pMycVec2载体的多克隆位点进行改造,并加入强启动子rrnBp和有效转录终止子,获得可定向克隆和转录sRNA的质粒pMycVec2-D;对pMycVec1载体的多克隆位点进行改造,并加入弱启动子Pwk和有效转录终止子,获得了分别用报告基因lacZ和GFP来检测sRNA靶标序列翻译水平的质粒pMycVec1-lacZ和pMycVec1-GFP。最后,利用2对已知的sRNA与其调控靶标MicC/ompC m
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张忠明 莫才清 沈辉 周俊初 陈华癸
以在我国黑龙江地区广泛应用的慢生型大豆根瘤菌22—10为出发菌株,通过导入克隆有快生型大豆根瘤菌菌株B52的DNA片段的重组质粒pBj32H_2,构建了高效固氮大豆基因工程根瘤菌32.该菌株在黑龙江地区进行田间中试和大面积(15万亩)推广应用,获得比出发菌株22—10增产大豆7.4%和8.5%的效果。为了研究pBj32H_2中所克隆基因的结构和功能,本工作对pBj32H_2进行了限制性内切酶图谱分析,确定了pBj32H_2中外源DNA片段的大小及EcoRⅠ、BglⅡ、XhoⅠ的酶切位点,建立了该片段的物理图谱。
关键词：
物理图谱 质粒 大豆根瘤菌
[期刊] 西南农业学报
[作者]
尚慧 韩树鑫 高艳玲 张威 范国权 申宇 聂先舟 吕文河 白艳菊
【目的】马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)作为制约马铃薯生产的重要病毒之一,株系分化繁杂。近年被科学家研究分离的PVY(N-Wi)和PVY(NTN-NW)株系而言,其基因组结构极为相似但致病性差异较大。【方法】本研究利用qRT-PCR方法,方便快捷的检测出马铃薯Y病毒的这2种不同株系,同时并使之可成功且稳定的应用于马铃薯生产中。通过查找Gen Bank已公布的PVY(N-Wi)和PVY(NTN-NW)株系的全基因组序列,设计用于qRT-PCR检测,扩增目的片段大小为150 bp左右的特异
[期刊] 淡水渔业
[作者]
付立霞 高雯 韩先干 高波 张晓君 刘晓丹 曾令兵
为测定爱德华氏菌(Edwardsiella ictaluri)隐蔽质粒的拷贝数,并探究不同基因组制备方式及定量策略对质粒拷贝数测定的影响,分别采用试剂盒和水煮法制备爱德华氏菌基因组,通过绝对定量和相对定量PCR测定两种不同总DNA制备方式下的隐蔽质粒拷贝数,同时测定试剂盒对染色体DNA和质粒DNA的回收率。结果显示,以试剂盒提取的总DNA测得的pEI1和p EI2拷贝数绝对定量和相对定量分别为3.63±0.30、5.04±0.18和4.22±0.15、5.13±0.50,显著低于以水煮法测得的pEI1和p EI2拷贝数的绝对定量11.84±0.80、11.70±0.25和相对定量13.85±1.64、11.90±0.97。回收率结果显示,试剂盒对染色体DNA的回收率(45.8±4.1)%,显著高于对质粒pEII的回收率(25.1±0.5)%和pEI2的回收率(31.3±1.7)%。结果表明:通过实时定量PCR测定爱德华氏菌隐蔽质粒的拷贝数时,基因组的制备以水煮法为宜,爱德华氏菌隐蔽质粒pEI1和pEI2均属于中拷贝质粒。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
何莉莉 韩成玲 李佩亮 陈阳 刘狄 耿丽娟
研究矿质元素对北虫草继代培养中菌落类型的影响,旨在探讨优型菌落保持代数最长的矿质元素配方。采用正交试验,将北虫草优良菌株L20在不同矿质元素培养基上进行12次继代培养。结果表明:菌株L20在不同培养基中继代培养后形成7种菌落类型,有子实体形成能力的菌落为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ型,其中Ⅰ型菌落产量最高,Ⅲ型居中,Ⅱ型最低,Ⅴ型形成子实体均为畸形;Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型无子实体形成能力。各类型菌落在不同培养基中的分布规律是:子实体产量较高的Ⅰ、Ⅲ型菌落主要分布在前10代;产量较低的Ⅱ型菌落分布在前4代;子实体为畸形的Ⅴ型和无子实体形成能力的Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ型菌落主要分布在4代以后。保持优型菌落——Ⅰ型最为稳定的矿质元素配...
[期刊] 水产学报
[作者]
战爱斌 胡景杰 胡晓丽 王明玲 彭薇 李艳 李纪勤 包振民
应用微卫星富集文库—菌落原位杂交法,筛选得到了40个栉孔扇贝的微卫星标记。用固定了(AG)15和(AC)15探针的尼龙膜(Hybond N+)捕捉含有微卫星DNA的片段,经洗脱、PCR扩增和TA克隆,构建栉孔扇贝的微卫星富集文库。利用ECL试剂盒(Amersham公司)标记的(AG)15和(AC)15探针进行菌落原位杂交筛选微卫星富集文库,阳性克隆经测序获得微卫星DNA。富集文库中1200个重组克隆经过菌落原位杂交后,532个(44.3%)为阳性克隆。任意挑选100个克隆测序,结果显示所有的克隆都至少含有一个微卫星位点。利用软件设计了65对特异性PCR引物,40对能扩增出清晰的带谱;利用48个...
[期刊] 华北农学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 郭容利 李成仁 卢维彩 贾付从
依据GenBank登录的猪Th1型细胞因子(IL-2、IL-12、IFN-γ)、Th2型细胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了上述因子的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了它们各自的标准曲线及直线回归方程。结果表明,该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点,为猪体内IL-2、IL-12I、FN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的mRNA水平的定量检测,提供了必要的技术手段。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
温立斌 何孔旺 杨汉春 倪艳秀 吕立新 张雪寒 茅爱华
根据GenBank中的猪抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞中扩增和克隆了PKR、OAS/RNase L及Mx的101 bp核苷酸片段。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx标准曲线及其直线回归方程;该方法具有线性关系好,特异性、敏感性、重复性高等特点;建立的荧光定量PCR方法可检测抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx mRNA水平。为猪体内抗病毒蛋白PKR、OAS/RNase L及Mx的mRNA水平的定量检测提供必要...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗满林 陈溥言 张林元 蔡宝祥 邓小昭
将马立克氏病病毒(MDV)GA 株基因文库中 BamH I I_3和 K_3克隆片段分别用 BamH I 加 Sal I 和 BamH I加 EcoR I 双酶切消化。含有编码 MDV 糖蛋白 B(gB)部分 DNA 的2.B kb、BamH I-Sal I 片段和1.1kb、BamH I-EcoR I 片段与 Sal I-EcoR I 消化的载体 pUR 222通过三聚体连接方式相连接。限制性核酸内切酶分析表明,重组质粒含有 MDV gB 基因,并且 MDV GA 株 gB 基因克隆在 EcoR I,Hind,Ⅲ,Xba I 和 Sal I 切点与 MDVRBIB 株相同。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗满林 陈溥言 张林元 蔡宝祥 邓小昭
含有马立克氏病病毒糖蛋白Ｂ基因重组质粒的改造及其鉴定罗满林，陈溥言，张林元，蔡宝祥，邓小昭（南京农业大学动物医学院，２１００９５；南京军区军事医学研究所）ＭＯＤＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＩＤＥＮＴＩＦＩＣＡＴＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＰＬＡＳＭＩ...
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