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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
韩霜 陈素梅 蒋甲福 房伟民 管志勇 陈发棣
以菊花品种‘清露’cDNA为模板克隆出了菊花CmCSN1基因,并研究了CmCSN1在环境信号中的表达变化。序列分析表明:该基因编码442个氨基酸,推导的蛋白质相对分子质量为50 397;CmCSN1基因在进化上是保守的,具有与动物相同的PCI结构域。荧光定量PCR分析结果显示:该基因在根、茎、叶和花中都有表达,但花中的表达量较高;弱光处理使CmCSN1表达量上调;CmCSN1白天比晚上的表达量高,有昼夜节律性;在花发育过程中,萌动期表达量很低,而紧蕾期表达量急剧增加,表明该基因可能在弱光胁迫响应以及花发育方面发挥作用。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
梁潘霞 李杨瑞
以甘蔗叶片总ＲＮＡ为模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增细胞色素ｂ６－ｆ复合体铁硫亚基基因的Ｃ ＤＮＡ，采用生物信息学软件分析所克隆基因的编码蛋白特性，并用荧光定量ＰＣＲ分析该基因的表达情况。结果表明：克隆得到的Ｃ ＤＮＡ片段长度为７９６ ｂＰ，包括１个５７９ ｂＰ的开放阅读框，编码１９２个氨基酸。甘蔗与高粱ＣＹＴ基因Ｃ ＤＮＡ序列的同源性为９４．０％，氨基酸序列同源性为９９．０％；该基因推导的蛋白分子量大小为２０．６７ＫＤ，等电点为６．２４，疏水性分值在０．５０～２．１１；蛋白二级结构中α－螺旋占１７．１９％，随机卷曲占５３．１２％，延伸链占２１．５３％，β－转角只占８．３３％，ＧｅＮ ｂＡＮＫ登录号．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张俊祥 冀志蕊 王娜 徐成楠 迟福梅 周宗山
【目的】明确衔接蛋白(adaptor protein)GcAP1复合体β亚基在苹果炭疽叶枯病菌(Glomerella cingulata)生长发育和致病过程中的功能,检测GcAP1β在该菌中的时空表达模式,并揭示其是否调控多聚半乳糖醛酸内切酶(endopolygalacturonase)基因CgPG1和CgPG2、果胶裂解酶(pectin lyase)基因pnl-1和pnl-2以及果胶酸酯裂解酶(pectate lyase)基因pelA和pelB的表达,为深入开展苹果炭疽叶枯病菌衔接蛋白在致病信号传导途径
关键词：
衔接蛋白 果胶酶 苹果 炭疽菌 致病力
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
吕素慧 郗琳 聂静 温超 袁存权 马男 赵梁军
以切花菊‘神马’（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ‘Ｊｉｎｂａ’）为材料，利用ｒａＣｅ技术与同源克隆方法获得菊花ＣｍＰｉｎ１基因全长，通过ｑｒｔ－ＰＣｒ技术比较ＣｍＰｉｎ１在不同组织器官的表达，同时对ＣｍＰｉｎ１响应外施ｎａａ和去顶进行研究。结果表明：１）ＣｍＰｉｎ１基因ｏｒｆ全长１ ７６１ｂＰ，编码５８６个氨基酸，跨膜域位于蛋白ｎ端与Ｃ端；通过蛋白序列比对分析，菊花ＣｍＰｉｎ１蛋白与百日草ＺｖＰｉｎ１蛋白相似性最高；亚细胞定位结果显示ＣｍＰｉｎ１位于细胞膜；２）对ＣｍＰｉｎ１表达分析表明，该基因在菊花茎部与芽部具有相对较高的表达量，同时，在离体茎段中的ＣｍＰｉｎ１受到生长素诱．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
司超娜 张嘉欣 陈发棣 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆菊花‘神马’CmCDKL9基因,并初步分析其表达模式,为探究其在调控开花方面的功能奠定基础。[方法]从夏菊品种‘优香’的转录组数据库中筛选获得编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的基因CmSTK1/CDKL9,命名为CmCDKL9;以野生型菊花‘神马’cDNA为模板对该基因的cDNA全长进行克隆,再运用生物信息学方法对蛋白的功能和特性进行分析预测,同时利用实时定量PCR分析该基因在不同光周期处理下的表达情况。[结果]CmCDKL9基因cDNA全长1 680 bp,包含1个1 671 bp开放阅读框,编码556个氨基酸,相对分子质量为62.3×10~3,理论pI为9.60。系统进化树分析显示,CmCDKL9与拟南芥等其他物种CDK类基因起源相同,而与黄花蒿中CDKL9的同源基因亲缘关系最近。亚细胞定位表明,CmCDKL9定位于细胞核与细胞膜。启动子元件分析表明,CmCDKL9基因启动子含有G-box、AE-box等多个光信号响应顺式元件。荧光定量PCR分析表明,在营养生长时期和花芽分化时期CmCDKL9基因在菊花‘神马’的根、茎、老叶和幼叶/花蕾中均有表达,在营养生长时期幼叶中的表达量最高,而老叶中的表达量最低;在花芽分化时期花蕾中的表达量最高,而根中表达量最低。不同光周期处理表明,CmCDKL9响应光周期处理,长日照条件下表达量表现出类似节律的变化。[结论]本文克隆得到菊花CmCDKL9基因,表达模式分析表明该基因响应长日照变化。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李菲 户倩 翟怡雯 陈发棣 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆‘神马’菊花（Chrysanthemum morifolium ‘Jinba’）CmERA1基因，并初步分析其表达模式，为探究其在调控菊花开花中的作用奠定基础。[方法]从夏菊品种‘优香’的转录组数据库中筛选得到菊花中编码法尼基转移酶β亚基基因，并命名为CmERA1。提取野生型‘神马’菊花叶片总RNA，以反转录后的cDNA为模板对该基因cDNA全长进行克隆。运用生物信息学方法对其亲缘关系及其编码蛋白的特性进行分析预测；利用实时荧光定量PCR对其在不同组织及不同光周期下的表达水平进行分析；利用酵母单杂交系统对其转录激活活性进行分析；以绿色荧光蛋白GFP作为标签确定其亚细胞定位情况。[结果] CmERA1基因open reading frame（ORF）全长1356 bp，编码451个氨基酸，分子质量为50.0kD，理论pI为5.12；系统进化分析显示其与青蒿中ERA1亲缘关系最近；蛋白质二级结构分析表明，CmERA1蛋白中α-螺旋和β转角含量较高；启动子元件分析表明，CmERA1基因启动子含有分生组织特征元件、光响应元件、ABA和SA响应元件；荧光定量PCR结果表明，CmERA1在营养生长时期的叶片中表达最高，根中表达最低；在生殖生长时期的根中表达最高，舌状花中表达最低；不同光周期的处理显示，CmERA1的表达能够响应光周期而呈节律性的变化；转录激活活性分析表明，CmERA1蛋白没有转录激活活性；亚细胞定位表明，CmERA1定位于细胞核中。[结论]本文克隆得到菊花CmERA1基因，表达模式分析表明其响应光周期变化。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李菲 户倩 翟怡雯 陈发棣 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆菊花ERA1(ENHANCED RESPONSE TO ABA)基因，并分析其表达模式，为探究其在调控菊花开花中的作用奠定基础。[方法]从夏菊品种‘优香’的转录组数据库中筛选得到菊花中编码法尼基转移酶β亚基基因，并命名为CmERA1。提取野生型菊花‘神马’叶片总RNA,以反转录后的cDNA为模板，对该基因cDNA全长进行克隆。运用生物信息学方法对其亲缘关系及其编码蛋白的特性进行分析预测；利用酵母单杂交系统对其转录激活活性进行分析；以绿色荧光蛋白GFP作为标签确定其亚细胞定位情况；利用实时荧光定量PCR对其在不同组织及不同光周期下的表达水平进行分析。[结果]CmERA1基因开放阅读框(ORF)全长1 356 bp,编码451个氨基酸，相对分子质量为50.0×10~3,理论pI为5.12。系统进化分析显示其与青蒿中ERA1亲缘关系最近。蛋白质二级结构分析表明，CmERA1蛋白中α-螺旋含量最高。转录激活活性分析表明，CmERA1蛋白没有转录激活活性；亚细胞定位表明，CmERA1定位于细胞核中。CmERA1基因启动子分析表明，其含有分生组织表达元件、光响应元件、ABA和SA响应元件。荧光定量PCR结果表明，CmERA1在营养生长时期的叶片中表达最高，根中表达最低；在生殖生长时期的根中表达最高，舌状花中表达最低。CmERA1的表达能够响应光周期而呈节律性的变化。[结论]CmERA1基因的表达模式分析表明其响应光周期变化。
关键词：
菊花 基因克隆 CmERA1 表达模式
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王威姣 李菲 张皖皖 王银杰 宋爱萍 蒋甲福 陈发棣 陈素梅
[目的]本文旨在克隆菊花β-石竹烯合成酶同源基因(CmTPS1like)并探讨其参与蚜虫取食和茉莉酸甲酯(MeJA)处理应答表达的机制。[方法]以菊花‘神马’为试验材料,采用高保真PCR及染色体位移法分别克隆CmTPS1like基因全长及上游启动子序列,并采用RT-qPCR分析CmTPS1like基因的组织特异性表达以及响应蚜虫取食和MeJA处理的表达模式。[结果]CmTPS1like基因开放阅读框(ORF)共有1 644个碱基,编码548个氨基酸,且与菊科植物野菊同源性最高(95.26%)。CmTPS1like基因上游启动子区包括2个MeJA响应元件、5个MYC结合元件、2个MYB结合元件、5个光响应元件等。CmTPS1like基因在茎中表达量最高,叶和根中表达量次之,花中表达量最低。蚜虫取食12和24 h后,菊花叶片中CmTPS1like基因的表达水平上调。随着MeJA处理时间的增加(3～24 h),CmTPS1like基因被持续诱导表达。[结论]CmTPS1like基因在菊花‘神马’茎中表达量最高,其表达受蚜虫取食和MeJA处理的影响。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
马晓茜 刘至治 李思发 唐文乔 杨金权
为了解团头鲂MHCⅠ类基因的结构,采用cDNA末端快速扩增(Rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术,首次成功克隆了团头鲂"浦江Ⅰ号"F0基础群体及选育F8世代的MHCⅠ类基因,共获得3条cDNA全长序列。序列全长为2 040～2 079 bp,含有87～102 bp的5'-UTR,1 035～1 044 bp的编码区(包括信号肽,alpha 1、alpha 2和alpha 3三个结构域,跨膜区和胞质区)及911～946 bp的3'-UTR区,分别编码347、344个氨基酸。F8世代序列的核苷酸/氨基酸的同源性很高,为89.0%/93.0%,而与F0世代...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王萃铂 张瓒 张晓雪 展妍丽 亓钰莹 蒋甲福
［目的］研究菊花转录因子Ｃｍ ｍＹＢ５９的功能，阐释其对冷胁迫的影响。［方法］以菊花品种‘神马’为试验材料，采用ＲＡＣＥ和ＲＴ－ＰＣＲ技术克隆得到一个ｍＹＢ转录因子的Ｃ ＤＮＡ全长及其可变剪切；采用实时荧光定量ＰＣＲ法研究了ＣｍｍＹＢ５９在不同组织器官及低温胁迫下的表达，通过酵母单杂交验证了其转录激活的活性，同时通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统进行亚细胞定位。［结果］该基因全长９０４ ＢＰ，开放阅读框为７６８ ＢＰ，编码２５５个氨基酸，蛋白质相对分子质量为６１．９９×１０３。生物信息学分析表明，此基因为典型的Ｒ２Ｒ３型ｍＹＢ转录因子，具有保守的结构域和调控基序，因与拟南芥的ＡＴｍＹＢ５９同源性较高．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张杨 孙明 杨海燕 张启翔
采用同源克隆结合RACE技术从菊花脑叶片中克隆菊花脑(Chrysanthemum nankingense)热激蛋白70基因(hsp70)的cDNA序列,并通过荧光定量PCR(qRT–PCR)分析菊花脑在40℃高温下热激不同时间(0、0.5、1、2、3、6 h)后叶片中hsp70基因的表达差异。结果表明,克隆的cDNA序列全长2 224 bp,与水母雪莲花、紫茎泽兰的hsp70基因在核苷酸和氨基酸水平的同源性分别为88%、98%,表明该序列为菊花脑的hsp70基因序列(GenBank登录号,KJ561911),命名为Cnhsp70。Cnhsp70基因的开放阅读框为1 944 bp,其编码的蛋白(...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
曹沛沛 毛雅超 刘涛 陈发棣 房伟民 陈素梅 蒋甲福
[目的]本文旨在克隆菊花‘神马’Cm14-3-3υ基因,并初步分析其表达特征,为其功能研究奠定基础。[方法]从菊花‘优香’转录组库中获得编码拟南芥同源基因14-3-3υ序列信息,根据NCBI比对确定基因的cDNA全长并进行克隆,再利用生物信息学方法对该蛋白的功能和活性位点进行预测,同时利用实时定量PCR分析了在非生物胁迫条件下该基因的表达变化。[结果]Cm14-3-3υ的ORF序列长774 bp,编码257个氨基酸;亚细胞定位表明Cm14-3-3υ定位在细胞质和细胞核;生物信息学分析表明该蛋白有19个Se
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张星亮 彭熹 邓翔 刘扬 崔香淑
为明确植物光合作用中镁离子螯合酶ＣＨＬＩ与ＣＨＬＤ亚基形成复合物ＣＨＬＩ－ＣＨＬＤ这一重要过程的机制，首先需要获得可溶性ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，添加异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。通过ＮＩ琼脂糖树脂（ＮＩ ｓＥＰＨａｒｏｓＥ ６ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）和谷胱甘肽琼脂糖树脂（ＧＬｕＴａＴＨＩｏＮｓＥＰＨａｒｏｓＥ ４ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｓＤｓ－ＰａＧＥ）和ＴＥＶ酶切试验验证目标蛋白。采用．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
梁芳 许申平 蒋素华 袁秀云 崔波 张静
为了给菊花ＣｍＦＵＬ基因功能鉴定与遗传改良奠定基础，采用ＲＴ－ＰＣＲ法从菊花叶片中克隆出１个ｍＡＤＳｂｏｘＡ类基因的编码区序列，命名为ＣｍＦＵＬ（Ｇｅｎ ｂＡｎｋ登录号ｋＴ８９４３７９）。ＣｍＦＵＬ基因编码区ｏＲＦ片段长度为７４１ ｂＰ，编码２４６个氨基酸。ＣｍＦＵＬ蛋白属于亲水性蛋白，预测该蛋白内含１２个磷酸化位点和２个潜在的ｎ－糖基化位点。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明，ＣｍＦＵＬ蛋白与ＣｍＤ４１蛋白的相似性为９５．６％，同属于ＡＰ１／ＦＵＬ亚家族的ＦＵＬ－Ｌｉｋｅ进化枝。实时荧光定量ＰＣＲ分析表明，ＣｍＦＵＬ基因在花期不同组织中均有表达，但表达丰度不一。在花蕾中表达量最高，其次是管状．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
楼望淮 安娟 宋爱萍 陈素梅 蒋甲福 陈发棣 房伟民 管志勇
【目的】为了研究翻译起始因子4E在菊花中的表达特性及功能,克隆菊花翻译起始因子4E(CmeIF4E)基因,分析其表达特性并初步筛选得到菊花CmeIF4E的互作蛋白。【方法】根据已报道植物的eIF4E序列设计引物,采用RT-PCR和RACE技术克隆菊花eIF4E基因,荧光定量PCR及亚细胞定位分析菊花CmeIF4E的表达特性,并用酵母双杂交系统筛选其互作蛋白。【结果】克隆获得菊花eIF4E基因全长914 bp,其开放阅读框(ORF)654 bp,编码1条包含218个氨基酸残基的多肽,将该基因名为CmeIF4E,GenBank登录号为JQ904591。氨基酸序列比对和系统进化分析表明,菊花CmeI...
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