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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡元森 王远 吕扬勇 黄亮 张帅兵 李娜
[目的]对莱姆病螺旋体(Borrelia burgdorferi)端粒解离酶(telomere resolvase,ResT)进行原核可溶性表达纯化,并筛选高衍射度的ResT-DNA复合物晶体,为探究ResT-DNA复合物的结构和功能奠定基础。[方法]合成pET28_b-ResT表达质粒,构建原核表达载体pSUMO-ResT,分析ResT可溶性蛋白在BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21 Gold(DE3) pLysS、BL21 Codon Plus(DE3)、Rosetta(DE3)和Rosetta(DE3) pLysS中的表达量,获得最优的ResT原核表达菌株。基于AlphaFold预测的ResT蛋白模型,利用定点突变及ResT可溶性蛋白表达分析,获得高效可溶性表达ResT突变体。经Ni-NTA亲和层析、HiTrap Heparin HP亲和层析及分子筛层析对ResT突变体ResT(W94H)进行蛋白纯化。利用EMAS检测ResT(W94H)与DNA的结合能力。使用蛋白晶体接种(seeding)和交叉接种(cross-seeding)方法,利用多种商业化结晶试剂盒筛选并优化ResT-DNA复合物的结晶条件,对复合物晶体进行X射线衍射分析。[结果] BL21 Gold(DE3) pLysS菌株是ResT最佳的高效可溶性表达菌株,W94H突变体比野生型具有更强的可溶性表达。获得了高纯度(95%)且高质量浓度(15 mg/mL)的ResT(W94H),其能够与底物DNA形成稳定的ResT-DNA复合物。在18℃下,ResT-DNA最佳结晶条件是:PEG3350 150 g/L、二甲苯二酸钠0.1 mol/L(pH 6.6)、NaCl 0.15 mol/L,ResT-DNA晶体分辨率最高为3.52 A,晶体空间群为P4。[结论]得到了高纯度ResT (W94H)蛋白,获得了ResT-DNA复合物晶体。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
张凤雪 徐英武 张智俊 肖冬长 王超莉 屈亚平
3-deoxy-D-manno-octulosonate(KDO)8-phosphate synthase(KDO8PS)[EC 4.1.2.16]是KDO生物合成途径中的关键酶。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,以毛竹Phyllostachys edulis新鲜实生苗为材料,分离得到竹子KDO8PS基因。通过对不同物种来源的KDO8PS进行氨基酸序列比对分析和半定量RT-PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析。将PeKDO8PS基因构建入原核表达载体pET-28a,并在大肠埃希菌Escherichia coli原核表达系统中获得了KDO8PS的可溶性高表达。经nickel亲和层...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
赵富林 徐明飞 谢青云 单衍可 雷静 施志玉 孙海凤 刘斐
[目的]表达、提纯DEx H/D-box家族蛋白Ded1p,并综合传统电泳以及单分子荧光共振能量转移(sm FRET)技术,探究Ded1p的双链RNA解螺旋机制。[方法]原核表达、纯化出全长的Ded1p作为研究蛋白,并验证其解螺旋酶活性。以荧光对标记的带有3'末端单链RNA尾巴的13 bp双链RNA作为研究底物,基于全内反射的单分子荧光共振能量转移技术,在自制的样品通道内添加800 nmol·L-1Ded1p、2 mmol·L-1ATP/Mg2+以及研究底物进行解螺旋试验,再用自编的Matlab程序采集和
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王国业
提出用AutoCADR14的三维造型功能建立螺旋体模型的方法，并利用AotoLISP语言通过二次开发实现螺旋体的参数地设计，从而扩展了AutoCADR14的三维造型功能。该参数化设计应用程序可以建立各种截面形状的螺旋体模型，具有灵活性和通用性，为有关应用领域提供了方便。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘红蕊 吴诚诚 单衍可 谢青云 邢刚 雷静 施志玉 孙海凤 刘斐
［目的］ＲＮＡ解螺旋酶Ａ（ＲＮＡ ｈｅｌｉｃＡｓｅ Ａ，ＲｈＡ）参与许多细胞生物学过程中，并能促进爱滋病病毒１型（ｈｉＶ－１）等一些病毒的复制，本试验旨在探究温度、ｐ ｈ值对ＲｈＡ的动力学影响。［方法］利用ｐｃＲ扩增全长ＲｈＡ基因，构建重组载体ｐ ｅＴ－２８Ａ－ＲｈＡ和ｐ ｃｏｌｄ－Ⅰ－ＲｈＡ，分别转化至Ｂｌ２１ ｓＴＡＲ（ｄｅ３）和Ｂｌ２１、ＲｏｓｅＴＴＡ２菌株中，加ｉｐＴＧ分别在２８℃和１５℃中诱导表达。将全长ＲｈＡ基因重组到ｐ ＦＡｓＴ ＢＡｃ ｄｕＡｌ载体中，然后将重组穿梭载体转化到含有杆状病毒基因组的ｄｈ１０ＢＡｃ感受态细胞中，通过转座作用，将ＲｈＡ基因整合到杆状病毒基因组中。提取重．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
汤海洋 张彦明 汪蕴 刘亚兵 丰美福
在获得HLA-G1cDNA克隆序列的基础上,构建了pGEX-4T2-HLA-G1原核表达载体,对HLA-G1的诱导表达发现,融合蛋白以包涵体形式存在于表达菌中。进一步溶解包涵体,改善复性条件,最终获得高纯度的GST/HLA-G1融和蛋白。51Gr释放试验表明,纯化的HLA-G1具有抑制NK细胞对靶细胞的杀伤活性。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张星亮 彭熹 邓翔 刘扬 崔香淑
为明确植物光合作用中镁离子螯合酶ＣＨＬＩ与ＣＨＬＤ亚基形成复合物ＣＨＬＩ－ＣＨＬＤ这一重要过程的机制，首先需要获得可溶性ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的ＣＨＬＩ和ＣＨＬＤ重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，添加异丙基－β－Ｄ－硫代半乳糖苷（ＩＰＴＧ）进行诱导表达。通过ＮＩ琼脂糖树脂（ＮＩ ｓＥＰＨａｒｏｓＥ ６ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）和谷胱甘肽琼脂糖树脂（ＧＬｕＴａＴＨＩｏＮｓＥＰＨａｒｏｓＥ ４ ＦａｓＴ ＦＬｏｗ）亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ｓＤｓ－ＰａＧＥ）和ＴＥＶ酶切试验验证目标蛋白。采用．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
程国富
本试验应用热水酚法提取了猪痢疾密螺旋体菌壁的水相抗原，并用琼扩法、火箭电泳法以及被动血凝法测定了该抗原的特异性。结果表明，该抗原能特异性地与兔抗猪痢疾密螺旋体的抗血清和单克隆抗体６Ｈ结合，而与抗非致病性密螺旋体抗血清不发生反应。
关键词：
猪痢疾密螺旋体,热水酚法,水相抗原
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘京国 赵晓萌 杨爱珍 师光禄
【目的】构建含有α-胰凝乳蛋白酶作用位点的Cry3A的突变体Cry3Am,以期提高Cry3A的活化效率,增强杀虫活性。【方法】利用重叠PCR技术,构建Cry3A杀虫蛋白的突变体Cry3Am,使之在原核细胞中表达纯化突变体蛋白;将Cry3Am与饲料混合后饲喂黄粉虫,用以评价Cry3Am的杀虫活性。【结果】成功地在Cry3A杀虫蛋白结构域I的α3和α4之间加上1个α-胰凝乳蛋白酶的作用位点,并提取Cry3Am到杀虫蛋白。体外酶切试验结果表明,Cry3Am很容易地被降解为55 kD的杀虫蛋白。生测分析结果表明,Cry3Am对黄粉虫的毒力是Cry3A的2倍以上。【结论】向Cry3A中插入α-胰凝乳蛋白...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
翟留涛 秦魏 刘娜女 奚绪光
【目的】通过大肠杆菌表达纯化牛(Bos taurus)RECQL蛋白,利用停流光谱技术对解旋条件进行优化,为研究RECQL的酶促反应动力过程奠定基础。【方法】将人工合成的牛RECQL蛋白编码序列与pET21a载体相连接,获得重组表达载体pET21a-BtRecql后,将其导入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行诱导表达,经过Ni-NTA亲和层析和Superdex 200凝胶过滤层析,得到纯化的重组蛋白BtRECQL;再利用停流光谱技术对BtRECQL解旋过程进行检测分析,通过摸索不同的试验参数找到BtRE
[期刊] 林业科学研究
[作者]
宋传生 胡佳续 林彩丽 任争光 耿显胜 田国忠
胸苷酸激酶是d TTP从头合成和补救途径的关键酶,催化d TMP形成d TDP,在DNA复制和生物的生存中发挥着必不可少的作用。本文在前期研究的基础上,对从泡桐丛枝(Pa WB)植原体中获得的的3个同源蛋白TMK-a-1、TMK-a-2及TMK-b与已报道的小麦蓝矮(WBD)、洋葱黄化(OY-W)植原体的TMK-a、TMK-b的氨基酸序列进行了比对和相似性分析,结果显示Pa WBPS TMK-b与WBD TMK-2和OY-W TMK-b之间的相似性分别为95.65%和99.03%;Pa WBPS TMK-a-1与Pa WBPS TMK-a-2的相似性为90.57%,且二者与WBD TMK-1和...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
项子龙 刘长琳 张金勇 胡鹏 何暮春 柳淑芳 庄志猛 薛同明
本研究从金乌贼(Sepia esculenta)转录组中筛选出疑似TERT (Telomerase reverse transcriptase)基因序列,通过系统进化和同源序列分析,鉴定出该基因为金乌贼TERT基因,序列长度为2415 bp。采用实时荧光定量PCR技术,检测和分析金乌贼TERT基因在不同组织、不同发育时期和不同性别的相对表达量差异。结果显示,与产卵期相比,濒死期的心、肝、胰、鳃、性腺、食道上神经团(除去视腺和视叶后的脑组织)等6个组织的TERT基因表达量呈显著下调趋势,推测与濒死期的器官组织分裂和增殖能力下降有关。TERT基因在金乌贼不同组织中具有明显的组织特异性,说明金乌贼各组织器官的衰老状态并不一致。本研究结果可为深入研究头足类生殖与衰老等生命过程的端粒酶调控机制提供基础数据。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵雪梅 张正钫 郭静成
用含不同浓度硒的Zarrouk培养液培养螺旋藻，用含不同浓度硒的豆芽汁葡萄糖培养酵母、并用含不同浓度硒的棉子皮培养基培养平菇、试验结果表明：在适宜的培养条件下，螺旋藻、酵母及平菇生长最适宜硬浓度分别为60mg·L(-1)，10mg·L(-1)和200mg·L(-1)，硒富集系数分别为19．2，14．4和22．6。将3种植物的蛋白质提出，经柱层析及电泳分离，分别得到多种含硒蛋白。试验证明。3种植物吸收的硒绝大部分都转化为含硒蛋白。
关键词：
硒 螺旋藻 酵母 平菇 硒蛋白
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
邵坤彦 彭宝玉 叶程 刘威 何冬兰
以吸水链霉菌基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到谷氨酰胺转胺酶基因片段,构建pGEX-TGase重组质粒,并转化到大肠杆菌中得到重组菌BL21/pGEX-TGase。重组菌经乳糖诱导产生融合蛋白,并对诱导条件进行了优化。表达产物主要以包涵体形式存在,采取稀释及尿素梯度液相色谱结合的方法,成功地实现了包涵体蛋白的复性。通过GST亲和柱纯化目的蛋白,得到酶活为29U/mg的电泳纯目的蛋白。
[期刊] 农村经济
[作者]
姚望
常态的利益表达是农民维护和增进自己利益的重要手段。在中国社会转型中,囿于自身条件及社会环境的影响,农民出现非常态的利益表达——冷漠与过于热忱。非常态的利益表达不仅影响着农民利益的获取,也影响着农村的和谐与稳定,以新的理论视角探讨非常态利益表达的行动逻辑是解决农民利益表达困境,实现好、维护好、发展好农民根本利益的前提和基础。
关键词：
农民 利益表达 困境 沉默的螺旋理论
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