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[期刊] 华北农学报
[作者]
王川川 母童 李德生 张迪 李蕾蕾 张娟 顾亚玲
旨在深入了解荷斯坦奶牛脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的分子功能，及其在不同组织中的表达规律。以荷斯坦奶牛的乳腺组织为cDNA模板，通过PCR扩增荷斯坦奶牛FABP4基因的编码区序列(Coding sequence, CDS),并进行生物信息学分析；利用qRT-PCR技术检测了FABP4基因在小肠、肝脏、乳腺、心脏、子宫、肾脏及卵巢组织中的mRNA相对表达水平。结果表明，荷斯坦奶牛FABP4基因编码区序列长399 bp,编码133个氨基酸，蛋白质二级结构以β-折叠为主。FABP4蛋白为稳定亲水性蛋白，无跨膜结构和信号肽剪切位点。通过氨基酸同源性分析发现，牛FABP4与绵羊和山羊之间的亲缘关系最近；核质定位表明，FABP4基因可能在细胞质中发挥重要功能。利用STRING对FABP4进行蛋白互作分析发现，与FABP3、PPARG、LIPE等脂质相关蛋白密切相关。qRT-PCR结果显示，FABP4在泌乳中期奶牛的各组织中均有表达，但在奶牛乳腺组织中表达量最高，显著高于其他组织(P<0.05)。本研究为后续深入研究荷斯坦奶牛中FABP4的生物学功能及乳脂调控机制提供了重要的理论依据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
邹荣婕 昝林森 姜向阳 张佳兰 申光磊
为了寻找影响奶牛产奶性状的候选基因,采用PCR-SSCP分子标记方法,对中国荷斯坦奶牛LOX-1基因3′非编码区进行了多态性分析。结果表明,在中国荷斯坦奶牛中检测的LOX-1基因3′UTR有AA型、BB型和AB型3种基因型,其频率分别为0.1374,0.3130和0.5496;不同基因型与中国荷斯坦奶牛的乳脂率之间有显著的相关性(P<0.05),但对乳蛋白率、产奶量和体细胞评分(SCS)影响不大,未达到显著水平。初步认为LOX-1基因可能是控制中国荷斯坦奶牛产奶性能的一个候选基因,或是与之存在紧密遗传连锁的分子标记。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
周涛 付力立 罗正中 马莉 杜振隆 姚学萍 沈留红 余树民 严作廷 曹随忠
【目的】基于非靶向代谢组学技术,对荷斯坦奶牛初乳和常乳中的代谢物进行鉴定与分析。【方法】选择年龄、体况及预产期相近、胎次相同的健康围产期经产荷斯坦奶牛12头,分别于分娩后1 h和21 d采集乳汁,离心并收集乳清,依次记为初乳组(C＿0)和常乳组(C＿21)。采用代谢组学技术对初乳组和常乳组乳清进行分析,结合正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)和学生t检验,以变量投影重要度(variable importance in the projection,VIP)>1,P<0.05为标准筛选差异代谢物,并对筛选出的差异代谢物进行聚类分析、显著差异代谢物筛选和KEGG通路分析。【结果】在荷斯坦奶牛初乳组(C＿0)和常乳组(C＿21)共筛选到97种差异代谢物,通过聚类热图可以看出,大多数代谢物在初乳组的含量高于常乳组;差异代谢物随机森林图显示,排名靠前的9种显著差异代谢物分别为乌头酸、柠康酸、龙胆酸、泛酸、牛磺酸、氧戊二酸、柠檬酸、6’唾液酸乳糖和精胺。KEGG通路富集分析显示,8条主要的代谢通路分别为酮体的合成与降解、牛磺酸与次黄嘌呤代谢、丙酮酸代谢、嘌呤代谢、嘧啶代谢、氨基糖与核苷酸糖代谢、三羧酸循环和丁酸代谢。【结论】荷斯坦奶牛初乳中脂质、氨基酸和核苷酸代谢物的含量高于常乳,而常乳中糖类代谢物含量高于初乳,初乳与常乳中代谢物水平的差异为后续代谢物机制的研究奠定了理论基础。
关键词：
奶牛 代谢组学 牛初乳 牛常乳 代谢物
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张迪 刘佳敏 禹保军 李德生 顾亚玲 温万 张娟
旨为探索bta-miR-2285f和宿主基因TANK结合激酶1(TANK binding kinase 1,TBK1)的生物学功能，以及bta-miR-2285f与靶基因互作调节奶牛乳脂代谢的潜在机制，本研究通过生物信息学方法分析bta-miR-2285f在不同物种间的保守性，并通过上游序列CPG岛分析、启动子预测、进一步进行组织表达谱分析，预测靶基因并进行GO功能和KEGG通路富集分析。利用双荧光素酶报告试验验证bta-miR-2285f调控的下游靶基因钙结合蛋白39(Calcium binding protein 39,CAB39),并在乳腺上皮细胞水平探究bta-miR-2285f的功能作用。结果表明：1)bta-miR-2285f是牛特异性miRNA,属于内含子miRNA;2)bta-miR-2285f与宿主基因TBK1上游序列2 kb处均不含有CPG岛。bta-miR-2285f在上游586 bp处为转录起始位点。宿主基因TBK1在上游105 bp处为转录起始位点；3)TargetScan和miRWalk预测miR-2285f有172个交集靶基因，主要参与新陈代谢、遗传信息传递、信号分析和细胞的相互作用，并且显著富集到mTOR信号通路、PI3K-AKT信号通路、ErbB信号通路、Hippo信号通路以及甘油酯代谢等乳脂代谢相关的信号通路并在STRING数据库中构建bta-miR-2285f靶基因之间的互作网络图；4)bta-miR-2285f在奶牛乳腺组织中的表达水平最高，与其他组织存在显著差异(P
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李瑞瑞 虎红红 冯雪 杨文飞 马云
【目的】旨在探究前期GWAS筛选出的与荷斯坦奶牛产奶相关的二肽基肽酶样6（Dipeptidyl Peptidase-like 6，DPP6）和E3泛素连接酶基因（Parkin gene，PRKN）的生物学性质及表达特性，为后续验证DPP6和PRKN基因对于荷斯坦奶牛相关调控机制研究提供基础。【方法】利用ProtParam、Phyre2、NetPhos 3.1等软件分析DPP6和PRKN的理化性质与蛋白结构，并采用实时荧光定量PCR（Real-Time quantitative PCR，RT-qPCR）检测DPP6和PRKN基因在荷斯坦奶牛的心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、乳腺、子宫、卵巢、瘤胃、黄体10个组织中的表达规律；通过脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）诱导乳腺上皮细胞（bMECs），初步检测DPP6和PRKN基因在炎症反应中的表达模式。【结果】DPP6蛋白编码863个氨基酸，与山羊的亲缘关系最近；PRKN蛋白编码488个氨基酸，其中甘氨酸含量最多，其序列与马鹿的相似性最高，保守型较强。本研究推测2个物种的DPP6和PRKN蛋白可能具有相似的生物学功能，并且2个蛋白均属于不稳定亲水性蛋白。DPP6和PRKN基因在组织中普遍表达。其中，DPP6基因在乳腺、肺脏、脾脏以及肾脏组织中的表达量显著高于其他组织，而PRKN基因在乳腺、肾脏、瘤胃组织中显著高表达。此外，相比于空白对照组，DPP6与PRKN基因均能够在LPS诱导的bMECs中极显著表达（DPP6基因极显著下调，PRKN基因极显著上调）。【结论】本研究结果说明DPP6与PRKN基因可能在调控荷斯坦奶牛乳房炎症过程中发挥潜在作用，为后期荷斯坦奶牛DPP6与PRKN两个基因在奶牛bMECs炎症反应相关调控机制研究提供理论依据。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
吴红超 樊新忠 徐凯勇 沈彦峰 东金华 谭景和
本研究对荷斯坦奶牛体型性状与功能寿命做了协方差和多元相关分析。结果表明,蹄角度、尻宽、乳房质地等和功能寿命均成正相关,乳房深度、悬韧带、后附着宽度等和功能寿命成负相关。进一步对功能寿命(y)与体型性状(xi)进行协方差分析,建立了回归方程y=-701.556+0.099x1+0.005x2+7.691x3+16.646x4+10.425x5+13.128x6,R2为0.8934。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
鞠志花 王洪梅 李秋玲 黄金明 李建斌 安利国 杨桂文 仲跻峰 王长法
【目的】研究中国荷斯坦牛κ-酪蛋白基因第4和第5外显子多态性与泌乳性状的关联性,为培育高乳蛋白及高乳脂率奶牛提供参考依据。【方法】采用DNA测序、PCR-RFLP和CRS-PCR技术,对544头中国荷斯坦牛κ-酪蛋白基因的外显子4和5序列进行研究,通过SHEsis软件和PHASE软件进行配对连锁不平衡分析和单倍型分析。【结果】发现6个新的SNPs,包括外显子5上A12907G、G12950A、C12989T、A13028G、T12980C共5个SNP位点,证实前4个位点紧密连锁;外显子4上A10996T共1个SNP位点。单位点基因型与泌乳性状关联分析表明,A10996T突变位点的TT和AT基因...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵敬贤 李娟 严兴荣 倪和民 陈燕 张路培 高会江 许尚忠 李俊雅 高雪
[目的]对前期获得的3头转基因牛进行分子生物学评价,包括转基因阳性鉴定、基因及蛋白表达水平的检测,旨在进一步为转基因牛的安全评价提供一些科学依据。[方法]根据Gen Bank上公布的牛FABP4基因(Gen Bank登录号:NM_174314)m RNA序列,利用兼并密码子对现有FABP4基因进行突变,并构建了p EGFP-C1-FABP4真核表达载体、通过细胞转染、体细胞核移植、胚胎移植技术获得3头转基因牛;分别采集了1号转基因牛不同组织样,2、3号转基因牛与野生型个体8、10、12、14月龄的血液样本,利用RT-PCR技术对所获转基因个体的阳性与否进行了鉴定;同时利用荧光定量PCR技术检测...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
方平 昝林森 张佳兰 申光磊 刘新武
采用PCR-SSCP技术,对中国荷斯坦奶牛乳铁蛋白基因(Bovine lactoferrin,BLF)5′侧翼区的多态性进行了分析,并用最小二乘法拟合线性模型分析各种基因型与奶牛乳房炎的相关性。结果发现,中国荷斯坦奶牛BLF基因5′侧翼区存在AA、BB和AB 3种基因型,其基因型频率分别为0.8805,0.0299和0.0896;AA基因型在-148位缺失G;与AA基因型相比,BB基因型在-149位发生C→T变异,-135位发生G→A变异;BLF基因5′侧翼区的χ2值为7.992 4(P<0.01),说明BLF基因5′侧翼区的突变处于Hardy-Weinberg非平衡状态,样本群体中AA基因型...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈仁金 杨章平 毛永江 陈莹 常玲玲 吴海涛 冀德君 李云龙 张亚琴
【目的】通过研究中国荷斯坦牛溶菌酶基因(lysozyme,LYZ)编码区多态性与乳房炎的关联性,寻找与乳房炎相关的分子标记,加快中国荷斯坦牛的抗病育种进程。【方法】利用PCR-SSCP技术对30个公牛家系的610头中国荷斯坦牛LYZ基因进行多态性检测,利用最小二乘均数法对LYZ基因的多态位点与SCS和305d产奶量进行相关分析【结果】LYZ基因的外显子1上存在115(T>G)突变位点,突变使精氨酸变为亮氨酸;突变位点经PCR-SSCP法检测发现了3种基因型TT、TG和GG,频率分别为0.270、0.508和0.222,χ2检验表明中国荷斯坦牛在该位点偏离Hardy-Weinberg平衡;GG基...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李秋玲 李建斌 张争锋 王洪梅 高运东 侯明海 仲跻峰
【目的】通过对中国荷斯坦牛MC1R基因的核苷酸序列分析和蛋白结构预测,探讨中国荷斯坦牛红白花毛色形成的分子机制。【方法】采用PCR-RFLP技术对MC1R基因进行分型,利用生物信息学方法对其蛋白结构特征进行模拟分析。【结果】检测出与毛色表型相关的三种基因型,EE基因型在中国荷斯坦黑白花牛中占优势,ee基因型在中国荷斯坦红白花牛中占优势。蛋白预测结果显示,ee基因型个体的缺失突变使蛋白质翻译提前终止,引发二级结构改变,导致中国荷斯坦牛红白花个体的出现。【结论】E等位基因主要与黑色毛色形成有关,e等位基因主要与红色毛色形成有关。
关键词：
牛 红毛 MC1R 蛋白结构
[期刊] 中国农业科学
[作者]
魏胜娟 昝林森 王洪宝 成功 季舒涵 王虹 付常振 姜碧杰
【目的】旨在通过构建秦川牛FABP4基因的重组腺病毒载体,为在细胞水平研究FABP4基因的功能和作用机制做准备。【方法】根据GenBank收录的牛FABP4基因mRNA序列设计引物,PCR扩增并克隆测序。将目的基因连接到穿梭载体pAdTrack-CMV上并用PmeⅠ线性化后,转化含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的E.coli BJ5183感受态细胞进行同源重组,得到重组质粒pAd-FABP4,并用PacⅠ酶切鉴定。将经过PacⅠ线性化的pAd-FABP4转染HEK 293A细胞进行病毒包装和扩增,TCID50法测定病毒滴度。【结果】经测序鉴定本次克隆的FABP4序列与GenBank收录的一...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余横伟 桂林生 胡言 昝林森
【目的】探索脂肪酸结合蛋白3(Fat acid binding proteins 3,FABP3)及脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对秦川牛肉用新品系肉用性状的影响,为秦川肉牛的选育提供理论基础。【方法】随机选择1824月龄健康的秦川肉牛571头,尾静脉采血10mL/头,提取血液DNA,PCR扩增FABP3及FABP4基因,检测其单核苷酸多态性(SNP)位点,并分析SNP位点基因型和单倍型组合对肉牛肉用性状(背膘厚、眼肌面积、肌间脂肪含量)的影响。【结果】测序发现,在FABP3基因第3个内含子上检测出1
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
付小波 昝林森 张佳兰 王英 王均辉
利用PCR-SSCP分子标记技术,研究了中国荷斯坦奶牛sα2-酪蛋白基因(CSN 1S 2基因)第二外显子的多态性,并分析了其与产奶性状之间的相关性。结果表明,中国荷斯坦奶牛CSN 1S 2基因第二外显子存在A和B2个等位基因,有AA、BB和AB 3种基因型,A和B的等位基因频率分别为36.54%和63.46%,AA、BB、AB基因型的频率分别为19.2%,46.1%和34.6%,群体中多态信息含量为0.356 3,达中度多态性,遗传变异较大;CSN 1S 2基因第二外显子对产奶量和乳脂含量没有明显影响,但AA基因型个体乳蛋白含量显著高于BB和AB基因型个体(P<0.05),表明A基因对中国荷...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冀德君 陈仁金 杨章平 朱国强 毛永江 陈莹 李锐
【目的】通过研究IL-8基因5′侧翼区多态性与体细胞评分(somatic cell score,SCS)的相关性,获得与低体细胞计数(somatic cell counts,SCC)性状相关的遗传标记,为低SCC性状的选育提供借鉴。【方法】采用PCR-SSCP技术检测来自30个公牛家系的610头中国荷斯坦奶牛的IL-8基因5′侧翼区的多态性,并采用混合动物模型分析多态位点与主要泌乳性状及SCS的相关性。【结果】IL-8基因5′侧翼区存在1个SNP位点,即-180 A/G;定义了3种基因型,即GG、GA和AA,频率分别为0.41、0.43和0.16。该SNP位点对SCS具有显著效应,对SCS指标...
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