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[期刊] 水产学报
[作者]
王安琪 陶丽竹 周丰林 徐晓雁 沈玉帮 李家乐
为探究miR-462在嗜水气单胞菌感染草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodon idella kideny, CIK)后的调控机制，实验利用荧光定量技术检测了CIK细胞感染嗜水气单胞菌后miR-462的表达水平变化；运用RNAhybrid软件预测miR-462的靶基因，利用双荧光素酶报告基因系统进行确定；此外还分析了miR-462对靶基因下游基因的调控作用。结果发现，CIK细胞感染嗜水气单胞菌过程中，miR-462的表达发生显著变化；cx32.2、slc9a3.1和tbk1的表达先降低后升高，与miR-462的表达模式呈负相关。双荧光素酶报告系统显示miR-462可靶向cx32.2、slc9a3.1和tbk1的3’非编码区抑制其表达，过表达miR-462可以显著抑制cx32.2、slc9a3.1和tbk1的表达。转染miR-462模拟物后，下游slc4a4a、tnfrsf5、cxcl9和cxcl11基因的表达量受到抑制。研究表明，miR-462参与调控嗜水气单胞菌感染后草鱼CIK细胞中的免疫应答。cx32.2、slc9a3.1和tbk1被鉴定为miR-462的靶基因。miR-462可通过靶向slc9a3.1和tbk1影响下游基因的功能。
[期刊] 水产学报
[作者]
包天杰 鲍生成 樊坤 沈玉帮 徐晓雁 李家乐
为探索嗜水气单胞菌感染后草鱼肾脏细胞(Ctenopharyngodonidellakideny，CIK)中miR-23a 的调控机制，实验通过实时荧光定量PCR（qPCR）测定了嗜水气单胞菌感染CIK细胞后miR-23a的表达量变化，使用RNAhybrid软件预测miR-23a的靶基因并用双萤光素酶报告基因检测系统进行鉴定，最后分析miR-23a对靶基因下游基因的调控作用。研究发现，在嗜水气单胞菌感染CIK细胞不同时间点，miR-23a表达量产生显著变化；双荧光素酶报告基因实验和miRNA-23a模拟物/抑制剂转染实验对靶基因反向调控，鉴定出TBK1和GLUT1是miR-23a靶基因；过表达miR-23a抑制了下游基因ldha、ldhba、pdha1a和pdha1b的表达水平。实验结果揭示，miR-23a参与调控嗜水气单胞菌感染后CIK细胞中的免疫应答。TBK1和GLUT1是miR-23a靶基因，miR-23a能够靶向GLUT1影响下游基因的表达。以上结果为miR-23a 在硬骨鱼类中免疫反应调控方面作用提供了的重要思路，同时为进一步了解miRNA 介导多个靶基因调节鱼类先天性免疫提供了更多理论依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
贾小云 金雷皓 苗潋涓 丁娜 范瑞文 董常生
【目的】预测和验证羊驼TGF-β1是mi R-663的靶基因之一,并对mi R-663介导的TGF-β1在黑色素生成过程中的作用进行研究。【方法】利用Targetscan、RNAhybrid和RNA22在线预测mi R-663的靶基因,并对靶基因3′UTR区可能的mi R-663的作用位点进行分析。利用DNAMAN软件分析比对羊驼、人和牛等哺乳动物TGF-β1-3′UTR区的相似性。利用SacⅠ和XbaⅠ将羊驼TGF-β1基因的3′UTR区插入pmir GLO构建双荧光报告载体pmir GLO-TGF-β1-3′UTR并与mi R-663 mimic共转染293T细胞,通过测定荧光素酶活性来验...
[期刊] 水产学报
[作者]
王骞 王承德 罗敏意 黎果 车行 林蠡 赵丽娟
为研究miR-155在柱状黄杆菌胞外多糖(FC-EPS)诱导的细胞凋亡中的作用机制，本实验采用RNA干扰(RNAi)技术，通过过表达miR-155和敲降踝蛋白基因(talin-1)，皆能抑制FC-EPS诱导的细胞凋亡，并鉴定出talin-1为miR-155的靶蛋白。在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中，踝蛋白水平显著升高，在凋亡发生阶段检测到凋亡执行蛋白Caspase-3的活化，同时检测到2条踝蛋白剪切异构体，大小分别约为200 ku和250 ku；将构建的鲤Talin-1真核表达质粒转染鲤上皮瘤细胞(EPC)，过表达的Talin-1延迟且延长了细胞凋亡的进程，并检测到上述2条踝蛋白异构体。然而，当以FC-EPS转染EPC细胞时，Talin-1先下降再恢复到正常水平，细胞不发生凋亡。因此，在FC-EPS诱导细胞凋亡的过程中，细胞通过上调miR-155来调控靶基因talin-1 mRNA和蛋白转录的变化，以及产生Talin-1蛋白异构体来抑制细胞发生凋亡。本研究为有效防治柱状黄杆菌疾病提供新思路。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
彭小云 刘红 陈孝煊 张棋 袁娟 刘佳佳 吴志新
将嗜水气单胞菌粗脂多糖(C-LPS)和大肠杆菌脂多糖(E-LPS)分别经腹腔注射草鱼(剂量为4mg/kg),以注射PBS为对照。48h后,分别提取各组草鱼的头肾、脾脏、肾脏、肝脏和肠组织中的总RNA,利用Real-time PCR的方法检测不同组织中TNF-α、IL-1β、IL-10和TLR4基因的表达情况。结果显示,与对照组相比,头肾中,TNF-α和IL-1β的表达量在E-LPS组显著升高,而IL-10的表达显著下降;C-LPS组TNF-α和IL-10的表达量显著性升高;TLR4在两试验组均有显著性降低。脾脏中,TNF-α、IL-1β和IL-10在E-LPS组与对照组无显著差异,而IL-1β...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
殷海成 杨东辉 贾峰 黄进 张勇
本研究旨在探讨酵母β-葡聚糖在饲料中添加或注射或制成β-葡聚糖-嗜水气单胞菌油乳剂灭活疫苗(β-AH)对黄河鲤[Cyprinus(Cyprinus)carpio haematopterus]免疫应答及嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)攻毒后的抵抗能力。选择体质量为(32.33±0.21)g的健康黄河鲤1 800尾,随机分为12组(Ⅰ–Ⅻ),每组3个重复,每个重复50尾。分别饲喂添加0(Ⅰ、Ⅶ–Ⅻ组)和150、300、450、600和750 mg/kg的β-葡聚糖的基础日粮(Ⅱ–Ⅵ组)、注射每千克体质量150 mg、450 mg、750 mgβ-葡聚糖(Ⅶ–Ⅸ组)和注射β-...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘佳佳 吴志新 石焱 姚卓凤 李景 彭小云 陈孝煊
在饲料中添加0.2%甘露寡糖(Mannan oligosaccharide,(MOS)),饲养草鱼(Ctenopharyngodon idellus)28 d后,草鱼经腹腔注射3.2×106cell/mL的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)0.1 mL,在注射嗜水气单胞菌48 h、72 h和96 h后,分别取草鱼头肾、脾脏和肝脏,利用荧光定量PCR分析甘露寡糖对草鱼感染嗜水气单胞菌后各组织中IL-1β和IL-10的表达影响。结果显示,在草鱼头肾中,MOS/I(0.2%甘露寡糖+注射Ah)组IL-1β的表达在注射嗜水气单胞菌后48 h和72 h显著高于CON/I(基础...
[期刊] 水产学报
[作者]
王彦波 任真真 张岩 傅玲琳
为了筛选能提高水产动物对嗜水气单胞菌抗病性的益生菌，并研究其免疫调节的作用机制。将５种乳酸菌与斑马鱼ＺＦ－４细胞共培养后通过荧光定量ＰＣＲ方法检测细胞因子ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和ＩＬ－１０的表达量，并用流式细胞仪检测被嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒后的细胞凋亡率来筛选对ＺＦ－４细胞保护性最显著的乳酸菌，将其添加至模式生物斑马鱼饲料中饲喂２８ ｄ后，用嗜水气单胞菌ＮＪ－１攻毒并检测斑马鱼肠道中促炎性细胞因子ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和抗炎性细胞因子ＩＬ－１０的表达情况，并计算斑马鱼被攻毒后的累积死亡率。结果显示，５种乳酸菌分别与细胞共培养后，芽孢乳酸菌０９．７１２能明显提高ＺＦ－４细胞ＮＦκＢ、ＴＮＦ－α和．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺路 李杜 徐文
用嗜水气单胞菌9120株制备了鱼类出血性败血症疫苗。用该疫苗分二组对白鲢进行免疫，检测免疫后白鲢血清中的抗体水平，其中加佐剂免疫组获得了较高滴度的凝集抗体，不加佐剂免疫组产生的凝集抗体滴度较低，但用间接血球凝集试验可以检出。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺路 曾令兵 杨先乐
以绵羊红细胞为载体，建立了检测银鲫血清抗体的间接血球凝集试验。用该方法研究了银鲫对嗜水气单胞菌灭活菌苗的免疫应答一般规律。研究结果表明，疫苗免疫组在免疫７天后可以测到血凝抗体，２１天达到高峰值４０９６，然后开始下降，３５天时抗体滴度降为１６。加弗氏不完全佐剂疫苗免疫组亦在７天时可以测到血凝抗体，２１天达到１０２４，３５天时为２０４８，抗体维持在较高的水平。对鱼体免疫后的保护力进行测定，结果表明，两个免疫组分别在７天左右和１４天左右开始产生保护力。免疫保护力在鱼体免疫初期随着抗体滴度的增加而加强，随后在一段时间内保持在较强的水平，并不随抗体滴度的下降而减弱。浸泡免疫试验的结果亦表明，银鲫可以通过...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾亚东 汪成竹 陈昌福
将采用温酚法从嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)中提取的粗脂多糖(crude lipopolysaccharide,LPS)作为免疫原,注射接种中华鳖(Pelodiscus sinensis)后,通过测定受免鳖的交叉凝集抗体效价、肾脏和血液中吞噬细胞的吞噬活性和对A.hydrophila活菌细胞内杀菌活性,比较了3种致病菌的粗LPS对中华鳖的免疫原性。试验结果表明,从3种致病菌中提取的粗LPS对中华鳖均具有较强的免疫原性,受免鳖的血清中存在对3种致病菌的...
关键词：
中华鳖 嗜水气单胞菌 粗脂多糖 免疫应答
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
范红结 陈怀青 姚火春 陆承平
将嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ，Ａｈ）Ｊ－１菌株第５代［Ｊ－１（５）］在产毒素培养基上连续传代至第３５代［Ｊ－１（３５）］，并分别检测Ｊ－１（６）和Ｊ－１（３５）的生化特性。另取Ｊ－１（６）、Ｊ－１（１５）、Ｊ－１（２５）和Ｊ－１（３５）分别制备嗜水气单胞菌灭活疫苗，用其分别免疫鲫鱼，之后用Ａｈ强毒攻击；同时用Ｊ－１（６）经腹腔注射或浸泡各免疫组鲫鱼，测其最低免疫剂量。结果显示，从第５代传至３５代，Ａｈ菌株的培养特性和免疫原性没有显著差异；腹腔免疫和浸泡免疫的最低有效剂量分别为１×１０７ｃｆｕ／尾和５×１０７ｃｆｕ／ｍＬ。表明ＡｈＪ－１株可作为理想的疫苗生产株。
关键词：
嗜水气单胞菌 免疫原性 生化特性 稳定性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
郭松林 关瑞章
为研究嗜水气单胞菌感染对美洲鳗鲡细胞免疫功能的影响,将60尾美洲鳗鲡平均分为3组,分别为对照组、浸泡组和注射组,每组20尾。对照组注射PBS,浸泡组以1.0×107cfu/mL的菌液浸泡1 h,注射组注射1.0×108cfu/mL的菌液。各组鳗鲡均于处理后6 h和30 h断尾采血,肝素钠抗凝,分别取全血、淋巴细胞和红细胞进行培养,采用四甲基偶氮唑法(MTT法)测定美洲鳗鲡全血细胞、淋巴细胞和红细胞的免疫水平。结果表明,浸泡组细菌感染后30 h的红细胞免疫水平显著高于细菌注射组,而细菌注射组的淋巴细胞免疫水平显著高于浸泡组和对照组,3组鳗鲡的全血细胞免疫水平无显著差异;与30 h相比,处理后6 ...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张秋胜 陈昌福
采用福尔马林灭活的嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila)菌苗免疫接种异育银鲫 ,通过测定受免鱼血清中凝集抗体效价 ,溶菌酶活性 ,血液中吞噬细胞的吞噬活性 ,杀菌活性并通过鱼体攻毒试验 ,探讨了异育银鲫对福尔马林灭活的嗜水气单胞菌菌苗的免疫应答状况。结果表明 ,接种 2 8d后 ,受免鱼血清中凝集抗体效价和溶菌酶活性均值分别为 1∶18.89和 15 6 .36U/ml,相应的对照组则为 1∶0 .83和 138.6 8U/ml;受免鱼血液中白细胞吞噬百分比和吞噬指数分别为 6 3.38%和 6 .0 2 ,而对照组的分别为 47.95 %和 5 .0 8;免疫组和对照组白细...
关键词：
异育银鲫 嗜水气单胞菌 免疫应答
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
侯廷龙 刘惠茹 凃彦芳 张佳颖 李春涛 迟庆生 吴家乐
旨在研究饲料中添加丁酸梭菌（Clostridium butyricum）对草鱼（Ctenopharyngodon idella）生长性能及血清酶活、免疫功能和抗病能力的影响，选用初始体质量为[ (23.78±0.68) g]的健康草鱼600尾，随机分为4组，每组3个重复，每个重复50尾。对照组（T0组）只投喂基础饲料，实验组（T1、T2、T3组）分别投喂添加1×10~(7)、1×10~(8)、1×10~(9 )cfu/g 丁酸梭菌的饲料，实验周期为56 d。结果表明：与T0组相比，T1、T2和T3组草鱼的增重率（WGR）和特定生长率（SGR）显著增加，存活率（SR）无显著差异。与T0组相比，T1、T2和T3组草鱼的血清超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、溶菌酶（LZM）活性显著增高，补体C3含量显著增高，但谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）活性显著降低。与T0组相比，T1、T2和T3组草鱼的免疫相关基因白细胞介素-8（IL-8）、白细胞介素-1β（IL-1β）、免疫球蛋白M（IgM）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA相对表达量显著上调。投喂益生菌56 d后，用嗜水气单胞菌对草鱼进行攻毒实验，与T0组相比，T1、T2和T3组草鱼的累积死亡率显著降低。综上所述，饲料中添加丁酸梭菌可以提高草鱼的生长性能、血清抗氧化能力、机体免疫力以及抗病能力。
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