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[期刊] 中国水产科学
[作者]
曾端 叶元土 罗莉 林仕梅
取 1龄草鱼 (体长 2 0～ 2 5cm)肠道制成常规肠囊样本 ,分别使用Ringer’s液、山本液、今村液以及 1mmol/L亮氨酸 (Leu)溶液和 1uci/mlH3-Leu溶液进行体外培养 ,并设定培养条件分别为 :培养温度 2 0、2 5、30和 37℃ ,培养时间 5、10、30及 6 0min。测定在各条件下草鱼肠道碱性磷酸酶 (AKP)活性和Leu的吸收积累量。结果显示 ,1龄草鱼肠道离体培养最佳条件为 :培养液为山本液 (NaCl 0 .75 % ,KCl 0 .0 2 % ,Ca Cl2 0 .0 2 % ,NaHCO30 .0 0 2 % ) ,培养时间为 5min ,...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
姚仕彬 叶元土 蔡春芳 姚林杰 许凡 刘猛 萧培珍 王丽宏
以强化培育后草鱼的肠道粘膜为试验材料,采用不同消化法和离心转速梯度分离肠道粘膜细胞团,分别试验不同培养液与不同CO2浓度组合、胎牛血清浓度及细胞接种浓度时细胞生长效果,并且观察草鱼原代肠道粘膜细胞生长过程,同时采用3种细胞形态观察法、MTT检测法及相关酶活力系统评价细胞培养效果。结果表明:采用机械刮取消化法,分离转速为400 r/min,在使用M199培养液、6%CO2、15%胎牛血清、接种浓度为2×103(个/孔)条件下可批量复制草鱼原代肠道粘膜上皮细胞;细胞增殖过程符合动物原代肠道粘膜上皮细胞生长分化规律,采用荧光倒置显微镜与Giemsa染色法相结合、MTT检测法、AKP酶活力及LDH/M...
关键词：
草鱼 肠道粘膜细胞 分离方法 原代培养
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
苏建明 雷红宇 黄平 肖调义
将新鲜草鱼肠道组织经超声破碎、乙酸浸提后,再经Sephadex G50和Sephadex G25凝胶柱过滤层析,收集各组分,采用药敏纸片法检测各组分的抗菌活性.收集具有抗菌活性的组分,经Tricine SDS-PAGE,考马斯亮蓝染色后分析获得1条较明显的蛋白带,相对分子质量约为6 200.该抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和嗜水气单胞菌均表现出较强的抗菌活性,说明抗菌肽对维持鱼类肠道微生物区系稳定具有重要作用.
关键词：
草鱼 肠道 抗菌肽 抑菌活性
[期刊] 水产学报
[作者]
陶会竹 肖宁 赵雨婷 房慧 李槿年
为了建立草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,本研究在采用刮除法结合胶原酶IV消化法制备肠黏膜固有层单细胞悬液的基础上,使用鱼类脏器单核细胞分离试剂盒分离肠巨噬细胞,再经差异贴壁法纯化肠巨噬细胞,最后,用含10%胎牛血清和5%草鱼血清的RPMI 1640完全培养液,在28°C、5%CO2条件下原代培养肠巨噬细胞,并通过细胞形态学检查、分子标记检测和功能验证实验加以鉴定。结果显示,每尾鱼(约250 g)肠巨噬细胞的获得量约为3×107个,细胞活率为99.6%,纯度达到95%以上;倒置显微镜观察发现,原代培养4~5 d的贴壁细胞多呈圆形或多边形,体积明显增大,细胞汇合度达到95%;光镜和电镜观察到染色后的贴壁细胞具有巨噬细胞的形态结构特征,贴壁细胞经荧光定量PCR在m RNA水平检测到巨噬细胞特异性标志分子(草鱼巨噬细胞集落刺激因子受体),功能实验证实贴壁细胞具有吞噬功能,脂多糖能够显著提高其呼吸暴发活性。本研究首次成功建立了草鱼肠巨噬细胞的分离培养与鉴定方法,为开展口服疫苗诱导的草鱼肠黏膜免疫应答研究提供细胞模型。
关键词：
草鱼 肠巨噬细胞 分离 原代培养 鉴定
[期刊] 淡水渔业
[作者]
冯雪 吴志新 祝东梅 王艳 庞素风 于艳梅 梅小华 陈孝煊
检测了分别从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)和银鲫(Carassius auratus gibelio)肠道中分离的180株细菌的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶的产酶能力。结果显示,两种鱼肠道内可分泌胞外消化酶的细菌包括Aero-monas(气单胞菌属,Aer.)、Vibrio(弧菌属,Vib.)、Bacillus(芽孢杆菌属,Bac.)、Pseudomonas(假单胞菌属,Pse.)四个种属的细菌,Aer.在其中占主要优势,45.71%的Aer.可分泌胞外消化酶。草鱼可分泌上述四种胞外消化酶的菌株共有33株,占肠道菌总数的36.67%;银鲫43株,占47.78%。产...
[期刊] 水产学报
[作者]
冯健 刘栋辉 刘永坚 田丽霞 梁桂英
为了研究草鱼肠道完整吸收小肽与肠道中小肽的关系,用6.25%酶解酪蛋白、酸解酪蛋白、酪蛋白溶液和生理盐水进行草鱼肠道灌注试验(1mL·100g-1体重)。20min后尾静脉采血制备血浆,高效液相色谱分析结果表明:灌注酶解酪蛋白溶液的草鱼血液循环中总肽量和某些肽量显著(P0.05)。草鱼血浆中肽量的增加与肠道提供的肽种类和数量有关。实验结果表明,草鱼肠道能够完整地吸收某些小肽进入血液循环。
关键词：
草鱼 小肽 高效液相色谱 吸收
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李欢 钟秋萍 王微微 吴山功 邹红 李文祥 王桂堂
为探究草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道固有纤维素降解菌群及其酶活,从冬天禁食条件下的野生草鱼肠道粘膜分离培养的细菌中随机挑取22个单菌落,经筛选得到8株纤维素降解细菌,测量了它们降解纤维素所产生的水解圈的大小,并进行了16 S rDNA序列测定。结果显示,不同细菌(菌株)之间纤维素降解能力存在显著差异(F=4.03,P
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李玉萍 田晶晶 张凯 夏耘 王广军 郁二蒙 李志斐 龚望宝 谢骏
为探讨皇竹草(Pennisetum sinese Roxb)对草鱼(Ctenopharyngodon idella)脂肪蓄积和肠道菌群组成的影响，配制3组分别含0(对照组)、10%和20%皇竹草粉的等氮等能纯化饲料(蛋白质水平33%,脂肪水平8%),饲喂草鱼稚鱼[(28.51±0.04)g] 8周，每组饲料饲喂3个重复。结果显示，饲料中添加10%和20%皇竹草粉能显著降低腹腔脂肪指数。相比对照组，皇竹草粉组的草鱼肝脏脂滴数量均明显减少，脂肪细胞大小明显变小。血清中的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和游离脂肪酸(NEFA)的含量随着皇竹草粉水平的升高呈下降趋势，其中20%添加水平相比对照组草鱼显著降低。皇竹草粉组肝脏中的TG、TC和NEFA的含量均显著下降。肝脏和腹腔脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(pparγ)等脂肪生成相关5个基因在摄食皇竹草粉后显著下调，pparα等4个脂肪分解相关基因在摄食皇竹草粉后显著上调，肝脏组织中法尼酯X受体(fxr)基因在摄食皇竹草粉后显著上调。微生物宏基因组学结果显示，10%和20%皇竹草粉组草鱼肠道内容物中肠道微生物的Ace、chao1、Shannon和Simpson指数均与对照组差异显著，表明皇竹草粉提高了草鱼肠道内菌群种类的丰度和多样性。从门分类来看，与脂肪蓄积相关菌群厚壁菌门(Firmicutes)的比例在皇竹草组中显著降低，拟杆菌门(Bacteroidetes)比例呈上升趋势。饲料中添加一定量的皇竹草粉可降低草鱼体脂蓄积，推测肠道菌群的改善是这一过程中的重要环节。
关键词：
草鱼 皇竹草 脂肪蓄积 肠道菌群
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李玉萍 田晶晶 张凯 夏耘 王广军 郁二蒙 李志斐 龚望宝 谢骏
为探讨皇竹草（Pennisetum sinese Roxb）对草鱼（Ctenopharyngodon idella）脂肪蓄积和肠道菌群组成的影响，配制3组分别含0%（对照组）、10%和20%皇竹草粉的等氮等能纯化饲料（蛋白质水平为33%，脂肪水平为8%），饲喂草鱼稚鱼[（28.51±0.04）g] 8周，每组饲料饲喂3个重复。结果显示，饲料中添加10%和20%皇竹草粉显著降低腹腔脂肪指数（P<0.05），组织切片显微结构显示，相比对照组，皇竹草粉组的草鱼肝脏脂滴数量均明显减少，脂肪细胞大小明显变小。血清中的甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）和游离脂肪酸（NEFA）的含量随着皇竹草粉水平的升高呈现下降趋势，其中20%添加水平相比对照组草鱼显著降低（P<0.05）。皇竹草粉组肝脏中的TG、TC和NEFA的含量均显著下降（P<0.05）。肝脏和腹腔脂肪组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（pparγ）等脂肪生成相关5个基因在摄食皇竹草粉后显著下调（P<0.05），过氧化物酶体增殖物激活受体α（pparα）等4个脂肪分解相关基因在摄食皇竹草粉后显著上调（P<0.05），肝脏组织中法尼酯X受体（fxr）基因在摄食皇竹草粉后显著上调（P<0.05）。肠道菌群宏基因组学结果显示，10%和20%皇竹草粉组草鱼肠道内容物中肠道微生物的Ace、chao1、Shannon和Simpson指数均与照组存在显著差异（P<0.05），表明皇竹草粉提高了草鱼肠道内菌群种类的丰度和多样性。从门分类来看，与脂肪蓄积相关菌群，厚壁菌门（Firmicutes）的比例在皇竹草组中显著降低（P0.05）。综上，以上结果表明，饲料中添加一定量的皇竹草粉能够降低草鱼体脂蓄积，其中肠道菌群的改善可能是这一过程中的重要环节。
关键词：
草鱼 皇竹草 脂肪蓄积 肠道菌群
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
吴莉芳 王洪鹤 秦贵信 张东鸣 孙泽威 朱丹 孙玲
【目的】研究大豆蛋白对草鱼肠道组织及血液主要生化指标的影响,为草鱼人工配合饲料的合理优化提供依据。【方法】以初始体质量为(50.63±0.43)g的健康草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为试验对象,在室内单循环控温养殖系统中进行8周生长试验。以鱼粉为动物蛋白源,用去皮豆粕为植物蛋白源,用去皮豆粕分别替代0%(CK),15%,30%,45%和60%的鱼粉,配制成5种等蛋白(约300 g/kg)、等能(15.6 MJ/kg)的日粮,分别饲喂各组草鱼,研究大豆蛋白对草鱼肠道组织及血液主要生化指标的影响。【结果】60%大豆蛋白替代组草鱼的前肠、后肠皱襞高度极显著低于对照组(P<0...
关键词：
草鱼 大豆蛋白 肠道 血液生化指标
[期刊] 淡水渔业
[作者]
贺国龙 刘立鹤 张恒
从100 g左右的健康草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肠道中分离出3株疑似芽孢杆菌(Bacillus)菌株(G1、G2、G3),并通过对其进行生理生化特征、16S rDNA全序列和产酶能力的分析,筛选出1株高产酶能力的益生菌株。结果显示:G1、G2和G3菌株与枯草芽孢杆菌在16S rDNA序列相似性≥99%的水平上聚为同一分支,结合形态观察和生理生化特征,最终鉴定G1、G2和G3菌株均为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);以水解圈直径/菌落直径比值评定了G1、G2和G3菌株的产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶的能力,其中G1菌株产纤维素酶、淀粉酶和蛋白酶能力(比...
[期刊] 水产学报
[作者]
黄垚 秦真东 陈嘉俊 杨敏璇 徐子正 杨友成 黎烽 詹凡玢 李亚男 李清清 林蠡 施斐
为探究抗菌素对草鱼免疫和肠道菌群的影响，本实验以草鱼为研究对象，设置基础饲料（对照组）、基础饲料添加恩诺沙星或氟苯尼考3组饲料，投喂草鱼2周后，通过肠道酶活检测、qRT-PCR和高通量测序技术分析饲料中添加抗菌素对草鱼肠道免疫及肠道菌群多样性影响。分析结果显示，（1）饲料中添加恩诺沙星和氟苯尼考降低了草鱼肠道谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量，提高丙二醛（MDA）的含量，导致草鱼肠道氧化应激。（2）氟苯尼考组中的TNF-α、IL-1β、IL-12、NF-κB-P65、MHC Ⅱ、sIgM等免疫因子和ZO-1、ZO-2、occludin、CLDN-1、JAM3等黏膜相关蛋白的mRNA表达量显著下降，恩诺沙星组的免疫因子TNF-α、IL-1β、IL-12、TLR4、MHC Ⅱ和黏膜相关基因ZO-2、occludin、CLDN-1、JAM3的mRNA表达量显著下降。（3）通过16S rRNA高通量测序来揭示拌食投喂抗菌素对草鱼肠道微生物群落结构的影响，分析结果显示饲料中添加恩诺沙星或氟苯尼考对草鱼肠道α多样性无显著差异，但对β多样性出现显著变化（P < 0.05），表明2种抗菌素对肠道菌群丰富度没有显著影响，但会改变群落多样性。综上所述，本研究结果揭示饲料中添加恩诺沙星和氟苯尼考会导致草鱼肠道氧化应激、调控黏膜免疫应答，并影响肠道菌群的结构与多样性。本研究为草鱼病害防控相关研究及草鱼的绿色健康养殖提供了参考。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
郝耀彤 吴山功 王桂堂 邹红 李文祥
对草鱼(Ctenopharyngodon idellus)先饲喂人工饲料再饲喂苏丹草,运用PCR-DGGE的方法,比较了食物改变引起的草鱼肠道微生物菌群结构的变化过程。结果显示,饲喂同种饲料的草鱼后肠与前、中肠样品间菌群结构存在显著差异(TH0-F0=-2.268,P<0.05),饲喂不同种食物的相同肠段样品间菌群结构也存在着显著差异(P
[期刊] 中国水产科学
[作者]
叶元土 王友慧 林仕梅 罗莉
采用离体灌注实验系统和茚三酮对氨基酸显色的实验方法,对跨过草鱼肠道壁的氨基酸进行定量分析,在相同的实验环境下,分别研究草鱼肠道对10种必需氨基酸的吸收转运量。结果表明,在60min内草鱼肠道可对灌流的氨基酸进行持续的吸收转运,并在肠道外积累;当肠道内灌流氨基酸浓度逐渐增加时,肠道外只有苏氨酸的浓度与其起始浓度呈正相关变化,其他9种氨基酸在高浓度(10.0mmol/L)时的吸收转运量均显著下降,表现出高浓度氨基酸对吸收转运的"抑制"效应;通过对吸收转运量达到最大值时实验氨基酸的浓度与吸收转运量的比较,以及在氨基酸吸收转运量随时间的变化规律等的比较分析表明,10种氨基酸在肠道吸收、转运量的变化行为...
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必需氨基酸 跨壁吸收 肠道 草鱼
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