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[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱曜良 田丁 吴志新 陈孝煊
为了研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内朗格汉斯细胞(Langerhans cells, LCs)的分布及其特征性基因CD207的功能，利用免疫荧光(immunofluorescence, IF)、蛋白质印迹、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)探究草鱼LCs在相关免疫组织的表达情况及其特征性基因CD207在感染中的调节作用。免疫荧光结果显示，LCs主要在草鱼的头肾，皮肤的表皮和真皮，肠道固有层和鳃的鳃小片中分布。蛋白质印迹和qPCR结果显示，在LPS、PolyI:C处理头肾白细胞后，CD207的mRNA和蛋白相对表达水平均有显著上调。结果表明在抗原入侵机体后，草鱼LCs可以通过上调CD207的表达，在抵抗病原感染过程中发挥重要功能。
[期刊] 水产学报
[作者]
田丁 李珂珂 蒋飞 陈春秀 念子清 吴志新 陈孝煊
为进一步研究CD8α、CD207在草鱼树突状细胞(dendritic cells,DCs)中的功能，实验构建了草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒并在草鱼DCs中成功表达。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从草鱼DCs中获得CD8α、CD207开放阅读框序列(ORF)，分别插入真核表达质粒pcDNA3.1，构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207；经测序鉴定正确后，采用脂质体法将重组真核表达质粒分别转染至草鱼树突状细胞，经细胞免疫荧光技术和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证CD8α、CD207的表达。结果显示，在蛋白免疫印迹实验中CD8α、CD207蛋白可正常表达，且大小与预测结果一致。细胞免疫荧光结果显示，CD8α、CD207蛋白主要在草鱼DCs的细胞膜上表达。本研究成功构建pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207重组真核表达质粒，为后续研究CD8α、CD207基因在DCs中的作用机制奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
郭琼林
草鱼淋巴细胞表面扫描电镜结构特征为有孔穴且较为光滑、具短小细锥状突起 ;中华鳖淋巴细胞、胸腺细胞表面扫描电镜结构特征为凹凸不平、较为光滑 ;它们均以表面凹凸不平特征的占大多数。E花环试验的光镜和扫描电镜观察显示 :草鱼淋巴细胞E花环形成不明显 ,而中华鳖淋巴细胞、胸腺细胞的成花率分别为 2 5 %～ 34%和 36 %～ 47% ,能形成花环的淋巴细胞、胸腺细胞以表面结构特征凹凸不平 (类似哺乳动物T淋巴细胞 )的为主。草鱼、中华鳖血液淋巴细胞和中华鳖胸腺细胞与抗人CD2 单克隆抗体交叉反应的免疫组化检测显示中华鳖血液淋巴细胞和胸腺细胞的CD2 阳性率分别为 2 4%和 33%。草鱼血液淋巴细...
[期刊] 水产学报
[作者]
陈勇 李家乐 沈玉帮 傅建军 王荣泉 宣云峰
ghrelin是一种在脊椎动物摄食调节过程中起重要作用的脑肠肽,具有明显的摄食促进作用。实验利用同源克隆技术获得了草鱼ghrelin基因的cDNA序列和DNA序列,其中cDNA序列全长506 bp,包括90 bp的5′端非编码区(5′-untranslated region,5′UTR),312 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),以及104 bp的3′端非编码区(3′-untranslated region,3′UTR)。开放阅读框编码的103个氨基酸的ghrelin前体肽,经剪切加工后形成含有19个氨基酸的成熟肽。氨基酸序列分析结果显示,草鱼ghrelin与硬...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
孙翰昌 丁诗华 方平 张芬 李云 刁晓明
以草鱼(Ctenopharyngodon idellus)为实验对象,利用RACE技术克隆了草鱼成纤维细胞成长因子8(Fibro-blast Growth Factor8,FGF8)cDNA序列。实验结果显示,草鱼FGF8 cDNA序列长度为887 bp,其中5′-非翻译区长100 bp,3′-非翻译区长157 bp,开放阅读框(ORF)633 bp,编码210个氨基酸的前体蛋白,包含22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽。利用已知的FGF8序列绘制系统发育树,发现草鱼与两种鲤科鱼(班马鱼、墨西哥脂鲤)聚为一簇,显示亲缘关系很近,而与其它脊椎动物如两栖类、鸟类、哺乳类的亲缘关系则相对较远...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨春荣 苏建国 彭丽敏 董捷
采用同源克隆及快速扩增cDNA末端技术,从草鱼鳃组织中克隆了Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)基因的cDNA全长。序列分析表明,草鱼TLR9 cDNA全长3 468 bp,编码1 058个氨基酸,其中包括18个氨基酸组成的信号肽、16个富含亮氨酸重复结构域(leucinerich repeat,LRR)、1个跨膜区和1个TIR结构域(Toll/IL-1 receptor)。该蛋白的分子量为121 921 u,等电点为8.80。氨基酸序列的同源性分析显示,草鱼TLR9与鲤TLR9的同源性最高(85%),依次为斑马鱼(82%)、大西洋鲑(55%)、虹鳟(55%)...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘邦辉 郁二蒙 王广军 余德光 谢骏 王海英 龚望宝
利用PCR和RACE方法首次克隆了编码草鱼肌肉Ⅰ型胶原蛋白的α1基因(COL1A1)的cDNA全长序列,为5772bp,其开放阅读框为4347bp,编码1448个氨基酸。BLAST同源性分析结果显示,草鱼COL1A1基因的氨基酸序列与斑马鱼、金鱼同源性较高,分别为93.90%和93.60%,呈现出较高的保守性。系统进化树分析表明,该基因与斑马鱼、金鱼处于同一支,亲缘性最近。生物信息学分析显示,草鱼COL1A1蛋白质的相对分子质量为137.2ku,理论等电点是5.44,为α螺旋β折叠三重螺旋结构蛋白。有18段三重螺旋重复域,22段低复杂度域,17个功能域。COL1A1蛋白有33～69,1249～...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
符贵红 杨先乐 喻文娟 胡鲲 章海鑫 黄宣运
采用基因克隆技术获取草鱼(Ctenopharyngodon idellus)细胞色素P450 3A(CYP3A)cDNA序列长1 849 bp,包含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)1 542 bp,1个终止密码和含polyA信号3′UTR;ORF编码514个氨基酸,含信号肽(29 aa),2个跨膜螺旋区(23 aa,23 aa),血红素结合域(21 aa)和6个底物识别位点(SRS1-6);与其他脊椎动物CYP3A氨基酸序列相似度达60%～92%。用实时定量PCR和分光光度计法分别研究了草鱼肾细胞系(Ctenopharyngodon idellus kidney ...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
赵彦花 区又君 李加儿 温久福 周慧
利用石蜡切片、HE和阿利新兰-高碘酸雪夫-试剂[AB-PAS (Alician blue and periodic acid Schiff reagent AB, pH 2.5)]染色技术,研究黄唇鱼(Bahaba flavolabiata)消化系统的组织结构和黏液细胞的分布特征。黄唇鱼食道粗而短,胃呈"卜"形,分为贲门部、盲囊部和幽门部,胃与肠的连接处有8条幽门盲囊,肠道在体腔内迂回2个曲折。光镜下观察到消化管管壁由外至内依次为外膜、肌肉层、黏膜下层和黏膜层。食道肌肉层很厚,黏膜层很薄,未见黏液细胞分布。胃部肌肉层和黏膜层均很厚,黏膜固有层分布胃腺,黏膜上皮为单层柱状上皮。幽门盲囊管腔很大,但肌肉层很薄。肠道肌肉层较厚,黏膜皱褶较细长,黏膜上皮细胞间可见圆形的黏液细胞。肝脏内弥散分布胰腺组织,肝小叶内可见大量糖原空泡。AB-PAS染色检测到胃部分布为红色的Ⅰ型黏液细胞;幽门盲囊黏膜上皮分布大量蓝色的黏液细胞,为Ⅱ型黏液细胞;前肠、中肠和后肠检测到大量Ⅱ型黏液细胞,并有少量Ⅰ型黏液细胞。黄唇鱼消化系统的组织结构以及黏液细胞分布特征体现了食性与结构功能相协调的特点。
关键词：
黄唇鱼 消化系统 黏液细胞
[期刊] 水产学报
[作者]
黄吉芹 张建禄 李杨 刘品 李南充 雷彩霞 吉红
为获知草鱼B细胞淋巴瘤-2(B cell CLL/lymphoma-2,Bcl-2)基因序列及其在草鱼各组织和脂肪细胞中的表达情况,采用cDNA快速末端扩增技术获得了草鱼Bcl-2的全长cDNA序列,通过实时定量PCR研究了Bcl-2在草鱼不同组织中的表达水平及经二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)处理后,草鱼脂肪细胞Bcl-2的表达变化。结果显示,所获得草鱼Bcl-2基因全长cDNA序列长度为1 292 bp,包含133 bp的5'非翻译区和784 bp的3'非翻译区;开放阅读框为375 bp,编码124个氨基酸。草鱼Bcl-2与鲤、斑马鱼Bcl-2氨基酸同源性...
关键词：
草鱼 B细胞淋巴瘤-2 DHA 基因表达
[期刊] 水产学报
[作者]
杨峰 秦超彬 卢荣华 孙君君 杨丽萍 聂国兴
为探讨Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在鱼类糖类和脂质代谢中的作用，本实验采用ＲＡＣＥ方法获得了草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ的全长Ｃ ｄＮＡ序列（登录号：Ｋｐ７３３８４６），利用生物信息学技术对该基因及其所编码蛋白的结构特征进行了分析；采用实时定量ｐＣＲ技术，检测了Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ在１９个不同组织中的表达特性以及高糖（４５％）、高脂（８％）和高糖高脂饲喂对草鱼肝脏中该基因表达的影响。结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ Ｃ ｄＮＡ全长２１８６ Ｂｐ，其中开放读码框为１１２２ Ｂｐ，编码３７３个氨基酸；跨膜结构分析表明草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ为典型的７次跨膜蛋白；同源性分析结果显示，草鱼Ａｄｉｐｏ Ｒ１－Ｂ与．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
左振华 唐建州 张钊 唐春华 陈韬 张东裔
利用快速扩增cDNA末端(rapid amplification cDNA end,RACE)技术获得草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因全长cDNA序列为2093bp,含有1个1944bp的开放阅读框,5′非编码区长25bp,3′非编码区长124bp,可编码647个氨基酸.生物信息学分析表明,在IAP的N端无氨基酸残基组成的信号肽;与斑马鱼的同源性最好,其次是斑猫鲿;在系统进化上,与斑马鱼、斑猫鲿共聚为1支.用半定量RT-PCR分析正常及细菌诱导下草鱼细胞凋亡抑制蛋白基因在不同组织中的表达分布,正常情况下,凋亡抑制蛋白基因在所取的7种组织中均有表达,其中脑、肠和肾表达最高,肝和心脏次之,鳃和肌肉最低,但...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
叶星 白俊杰 劳海华 简清 罗建仁
用DNAExtractionKit提取草鱼(Ctenopharyngodonidella)肝脏的总DNA,合成特异引物,进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖电泳检测、纯化后克隆到pGEM Teasyvectorsystem的T载体上,筛选转化子,提取质粒,酶切鉴定。重组质粒序列测定的结果显示克隆了草鱼线粒体细胞色素b(cytb)基因1140个碱基及两侧部分序列共1254bp。用DNA分析软件VectorNTI6.0比较草鱼与GenBank中18种鱼类cytb的序列,显示草鱼与它们的cytb基因具有较高的同源性;根据草鱼与这18种鱼的cytb基因序列同源性所建立的进化树,与传统的分类地位基本吻合。
关键词：
草鱼 线粒体 细胞色素b 核酸序列
[期刊] 水产学报
[作者]
黄纬杰 郭向召 张子豪 董强 熊雪梅 高泽霞
为分析草鱼全基因组微卫星特征并开发高多态性微卫星标记亲子鉴定平台，实验利用已发布的草鱼全基因组序列，开发高度多态、准确度高、重复单元在4～6碱基范围的微卫星标记。结果显示，在草鱼900.51 Mb基因组序列中共筛选到微卫星序列677 363个，总长度12 835 407 bp，占全基因组长度的 1.425 4%，平均跨度为1 329.43bp。其中单碱基重复序列出现最多，占比52.85%；二碱基重复序列其次，占比31.44%；再次是四碱基重复，占比8.05%，三碱基重复序列占比6.47%，五碱基重复序列占比1.12%；六碱基重复出现最少，仅占比0.07%。1～6碱基重复类型中优势重复单位分别是A/T、AC/GT、AAT/ATT、AGAT/ATCT、AATAT/ATATT、AACCCT/AGGGTT。随机挑选重复序列为4～6个碱基的110个位点设计引物，在草鱼繁殖亲本群体中扩增，筛选出15对多态性引物，经CERVUS 3.0软件分析15个位点平均期望杂合度0.802～0.959，模拟分析结果鉴定准确率为100%，置信度为95%。通过对20个家系子代192个个体进行亲本来源鉴定，所有子代均成功匹配到正确父母本，鉴定准确率达到100%。本研究分析了草鱼全基因组微卫星特征，并利用多态性微卫星位点进行草鱼亲子鉴定，为草鱼微卫星的功能和应用研究以及草鱼的育种工作奠定基础。
关键词：
草鱼 全基因组 微卫星 亲子鉴定
[期刊] 中国水产科学
[作者]
位战飞 郭华 李海龙 郑卫卫 王文文 戴欢 朱颖 刘洋 董忠典 陈松林
本研究通过ＲＡＣＥ技术在半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）中克隆得到１个ＣＤ４０同源基因。该基因Ｃ ＤｎＡ全长为２０９８ ｂｐ，开放阅读框为１０１１ ｂｐ，可编码由３３６个氨基酸组成的蛋白质。推导得到的ＣＤ４０氨基酸序列包含１个信号肽、１个跨膜结构区、２个ｎ－糖基化位点以及含４个富含半胱氨酸的保守结构区。不同物种氨基酸序列同源分析结果显示，该基因与哺乳类、两栖类以及硬骨鱼类相似性为２８％～４７％，其中与硬骨鱼类相似性较高。系统进化分析结果显示，半滑舌鳎ＣＤ４０与其他硬骨鱼类ＣＤ４０聚类为一支，哺乳类与两栖类ＣＤ４０聚类为另一支。荧光定量ｐＣＲ结果显示，ＣＤ４０在健康半滑舌．．．
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