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[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨先乐 夏春 左文功
旋转培养优于静置培养,它不仅表现在可形成细胞单层的面积大,单层细胞的产量高,单位面积所需的培养液(维持液)少,而且细胞生长的速度较快,细胞形成单层的时间较短,接种病毒后收获的病毒滴度也相应较高,它适宜于疫苗工厂化生产。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
罗毅志 杨广智 叶雪平
[期刊] 水产学报
[作者]
许淑英 李焕林 邓国成 姜兰
本文报道经筛选的ＧＣＨＶ－８４１毒株在草鱼吻端成纤维细胞系（ＰＳＦ）中进行适应性培养，弱毒驯化，细胞培养弱毒疫苗的制备，安全性观察，不同稀释度和剂量的免疫保护率测定及保存试验。ＧＣＨＶ－８４１毒株在ＰＳＦ细胞中继代驯化至５３代达到减毒目的。筛选得５３～５９代作毒种制备的细胞弱毒疫苗使用安全。用稀释１０～１０４倍的疫苗，０．１～０．３毫升／尾剂量注射草鱼，其免疫保护率均在８５％以上。生产上使用疫苗的适宜浓度和剂量是稀释１０２倍和０．２毫升／尾。冻干疫苗宜保存于４℃以下。较合适的保存期是６个月（４℃）和１８个月（－２０℃）。
关键词：
草鱼出血病,细胞培养,弱毒疫苗,免疫效果
[期刊] 淡水渔业
[作者]
许淑英 李焕林 邓国成 姜兰 白岳强 姜金忠
草鱼出血病细胞培养弱毒疫苗对草鱼的最小免疫量为稀释１０３倍、０２ｍｌ／尾。免疫产生期为疫苗注射后的第２天；免疫保护期达１５个月。弱毒疫苗的保存期为－３０℃３０个月、－１０℃２４个月、４℃８个月、１５—２０℃１个月左右。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 左文功 廖来强 田先文
使用廉价培养基ＣＡＳ在ＣＩＫ细胞系上增殖草鱼出血病病毒（ＧＣＨＶ—８５４株），所制备的灭活疫苗性能稳定，安全性好。用该疫苗免疫草鱼，饲养１０天后，其血清中和抗体水平测定结果表明，注射组为１０７．９±１１．０（３），浸泡组为６８．５±９．９（３），与对照组［２０．２３±４．５（３）］相比，Ｐ值分别为Ｐ＜０．００１和０．００１＜Ｐ＜０．０１，差异极显著。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘德福 孙世友 彭福峰 王兴礼
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
李瑞伟 曾令兵 张辉 肖艺 周勇 范玉顶 刘秋凤 孙建滨
以海藻酸钠、壳聚糖以及草鱼出血病细胞灭活疫苗为原材料,采用复凝聚法制备草鱼出血病口服微囊疫苗。通过单因素试验和正交试验,研究了海藻酸钠浓度、壳聚糖浓度、氯化钙浓度以及加入疫苗体积对微囊疫苗包封率的影响,确定了其最佳制备工艺。结果显示,各因素对草鱼出血病微囊疫苗包封率的影响程度由大到小依次为:海藻酸钠浓度>疫苗加入量>壳聚糖浓度>氯化钙浓度;制备草鱼出血病微囊疫苗的最佳工艺为:海藻酸钠浓度为1.5%,壳聚糖浓度为1%,氯化钙浓度为4%,加入疫苗体积为2 mL。该微囊疫苗平均粒径为(7.02±3.95)μm,平均包封率为60.53%,平均载蛋白量为8.12 mg/g,在pH 7.4的PBS溶液、生...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 高梦雪 蒋勇华
本文对草鱼细胞和病毒的两种大规模培养方式进行了研究和比较。静置培养条件下，细胞生长速度快，２—３天内可形成单层，单层均匀而稳定；旋转培养条件下，细胞７天左右长成单层，细胞单层面积大，病毒培养产量高。这两种培养方式所观察到的细胞病变过程及表征基本相同，病毒的ＴＣＩＤ５０／ｍｌ值稳定在６．０左右。采用这两种培养方式，可实现草鱼细胞和病毒的大规模培养。
关键词：
草鱼,细胞,病毒,大规模培养
[期刊] 淡水渔业
[作者]
曾令兵 陈艳红 胡春生
采用微量细胞培养系统测定草鱼出血病病毒854株在草鱼肾脏组织细胞系(CIK)上的繁殖动态。病毒在感染后12小时滴度开始上升,24～72小时呈对数上升,84小时病毒滴度达到最高点,以后渐趋平稳。
[期刊] 水产学报
[作者]
叶雪平 杨广智 罗毅志 陈因良 陈志宏
应用细胞生物反应器微载体悬浮培养法,对草鱼胚胎细胞 CP-80 进行大规模培养,同时增殖草鱼出血病病毒。细胞经培养6天后,细胞量可达到8.4×10~6cells/ml,较始接量(2×10~5cells/ml)提高了41倍。接入草鱼出血病病毒后,经5天培养增殖,毒力达到8.0LgTCID_(50)/0.1ml,较始接毒力(3.75LgTCID_(50)/0.1ml)增加了4.25个对数值。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘林 徐诗英 李婧慧 邹勇 倪金俤 杨鸢劼 曹广力 薛仁宇 陈辉 贡成良
为了评估草鱼出血病病毒(GCRV)vp6基因核酸疫苗的免疫效果,将vp6基因克隆进pFastBacTMDual载体杆状病毒的多角体蛋白(Ph)启动子下游,同时将团头鲂(Megalobrama amblycephala)β-actin启动子控制的vp6基因克隆进杆状病毒的P10启动子下游,获核酸疫苗载体pFastBac-FA-VP6-ph-VP6。按每尾分别注射疫苗载体10、30、60μg的剂量免疫草鱼(Ctenopharyngodon idellus)(体长14～20 cm,体质量60～120 g),同设pFastBacTMDual载体(30μg/尾)阴性对照组及空白对照组(0.4 mL/尾无...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
孔祥婷 沈颂东 姜德勋 姜红霞 徐健荣 张君 韩晓磊 许璞
采用M199培养基对黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)吻端组织进行体外培养研究,继代培养细胞传至第8代。实验结果显示:吻端组织接种培养3~5 h,细胞迁移伸展,6 d后生长细胞集落汇合,每4~6 d递次进行继代培养,培养生长的细胞呈纤维样。比较继代细胞在不同温度(15、27、37℃)和血清浓度(0、10%、20%)条件下的生长,27℃、10%血清的培养条件最适宜吻端细胞的增殖。通过染色体组型分析,证明离体吻端细胞为正常的二倍体细胞。研究结果表明,黄颡鱼离体吻端细胞对温度等培养条件有很强的适应性,培养细胞增殖迅速,具有建立连续细胞系的潜力。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张楠 王保军 张秀清 张京声 孙君社
研究了元宝草悬浮细胞生长及其金丝桃素类物质(金丝桃素和假金丝桃素)的代谢规律。悬浮培养细胞的生长周期为18 d,其中4~10 d是对数期。金丝桃素类物质在10 d达到46.06μg/g(DW),其含量增加与细胞鲜质量增长相偶联。可溶性糖的消耗与细胞的生长以及金丝桃素类物质的代谢有着密切的关系,是影响细胞鲜质量和金丝桃素类物质增长的重要因素。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘秋凤 曾令兵 周勇 马杰 范玉顶 张辉 李瑞伟
研究了在悬浮培养系统中使用微载体Cephodex规模化培养草鱼肾脏组织细胞CIK和草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的条件并进行了优化。结果表明,Cephodex是一种适合CIK细胞贴壁生长的微载体,搅拌方式(搅拌时间/静止时间)及血清浓度(0%、5%、10%、15%)对CIK细胞在Cephodex微载体上的贴附效率有影响。贴附期以转速35 r/min、每静置45 min搅拌2 min的间歇搅拌方式最佳,8 h后细胞贴附率可达90%以上;细胞贴附期培养基中的血清浓度为5%。当Cephodex微载体用量10 mg/mL、细胞初始接种密度2.5×105cells/mL、连续搅拌速度40 r/min时可获得...
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