- 年份
- 2024(5374)
- 2023(7698)
- 2022(6288)
- 2021(5671)
- 2020(4818)
- 2019(10558)
- 2018(10265)
- 2017(18226)
- 2016(10096)
- 2015(11548)
- 2014(11462)
- 2013(10831)
- 2012(10051)
- 2011(8972)
- 2010(9323)
- 2009(8838)
- 2008(7880)
- 2007(7176)
- 2006(6436)
- 2005(5725)
- 学科
- 济(30463)
- 经济(30419)
- 融(25163)
- 金融(25156)
- 管理(25051)
- 业(24146)
- 银(22571)
- 银行(22529)
- 行(21904)
- 企(20001)
- 企业(20001)
- 中国(17846)
- 制(12386)
- 财(11727)
- 学(11571)
- 中国金融(10973)
- 地方(10218)
- 方法(10215)
- 农(10167)
- 体(8979)
- 业经(8572)
- 数学(8500)
- 数学方法(8337)
- 务(8108)
- 财务(8073)
- 财务管理(8057)
- 理论(7815)
- 企业财务(7745)
- 农业(7098)
- 体制(6373)
- 机构
- 学院(135998)
- 大学(132997)
- 研究(51728)
- 济(46831)
- 经济(45517)
- 中国(45212)
- 管理(42329)
- 科学(36279)
- 农(35388)
- 理学(35286)
- 理学院(34800)
- 管理学(33849)
- 管理学院(33643)
- 京(29066)
- 所(28461)
- 农业(28292)
- 研究所(26202)
- 中心(25968)
- 业大(25951)
- 财(25058)
- 江(22211)
- 技术(19449)
- 省(18978)
- 财经(18903)
- 院(18624)
- 州(18622)
- 北京(18111)
- 农业大学(17504)
- 银(17460)
- 室(17342)
- 基金
- 项目(93814)
- 科学(70709)
- 基金(64672)
- 研究(64209)
- 家(59523)
- 国家(59003)
- 科学基金(47955)
- 省(40345)
- 社会(36885)
- 社会科(34836)
- 社会科学(34826)
- 基金项目(33747)
- 划(33672)
- 自然(32549)
- 自然科(31733)
- 自然科学(31718)
- 自然科学基金(31096)
- 教育(29025)
- 资助(26158)
- 编号(25938)
- 重点(22525)
- 成果(21958)
- 发(21281)
- 计划(20750)
- 创(20271)
- 课题(19788)
- 科技(19376)
- 创新(19100)
- 科研(18519)
- 部(18247)
共检索到217923条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
那杰 王关林 夏然 杨怀义
【目的】建立研究草莓果实膜联蛋白基因annfaf功能体系。【方法】利用反义基因技术将从草莓成熟果实中分离克隆的annfaf基因定向克隆至植物中间表达载体pROKⅡ,构建了annfaf反义融合基因植物表达载体pRRJ4,通过根癌农杆菌EHA105将其导入草莓基因组。对获得的抗性植株进行PCR和Southern检测分析。【结果】表明该反义基因已整合到草莓基因组中。【结论】可进一步筛选annfaf基因表达缺陷型植株,用于探讨annfaf在非跃变型果实草莓成熟中的调控作用,为培育草莓新品种提供中间材料。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯莹 周翔 潘腾飞 郭志雄 潘东明
【目的】构建中国水仙ZDS反义基因表达载体,为进一步研究ZDS基因的功能、改良中国水仙花色、培育花色新品种提供参考。【方法】以中国水仙花为材料,采用RT-PCR方法克隆其ZDS基因,通过PCR、双酶切、连接等方法将ZDS基因反向互补插入到pCAMBIA1301双GUS植物表达载体中,构建ZDS反义基因表达载体P1301-ZDS,再通过冻融法将重组质粒P1301-ZDS导入根癌农杆菌。采用根癌农杆菌介导法将ZDS反义基因转化中国水仙带盘鳞茎,通过直接、间接、延迟筛选法3种方法对侵染的带盘鳞茎进行抗性筛选,采用直接筛选法和逐步降低选择压(质量浓度)方法对抗性鳞茎进行增殖和分化培养,采用GUS组织化...
关键词：
中国水仙 ZDS基因 载体构建 遗传转化
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
朱海生 陈敏氡 温庆放
根据草莓psy、pds和zds基因序列,设计含有酶切位点的特异引物,以草莓总RNA为模板,通过RT-PCR法分别克隆psy、pds和zds基因.以植物表达载体pBI121为基础,利用口蹄疫病毒2A序列将psy、pds和zds基因融合在同一个开放阅读框下,构建成三价融合植物双元表达载体pBI2A2Apsy-pds-zds.同时构建了psy和zds基因二价融合植物表达载体pBI2A2Apsy-zds.经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后,成功将2个重组表达质粒pBI2A2Apsy-pds-zds和pBI2A2Apsy-zds导入农杆菌EHA105中.
关键词：
草莓 psy pds zds 表达载体
[期刊] 林业科学研究
[作者]
余义勋 包满珠 孙振元
香石竹ACC氧化酶基因从核NDA中克隆之后,将其首先构建成正义及反义的单拷贝植物表达载体,在此基础上又同向插入一个ACO基因片段,从而获得ACO的正义重复基因和反义重复基因植物表达载体,所得载体已通过酶切分析和PCR鉴定。将该表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,并转化香石竹品种Master、爱卡迪幼叶,经PCR检测和Southern杂交鉴定,获得了8株转化植珠。
[期刊] 华北农学报
[作者]
张红心 王桂兰 陈超 赵璞 马春红
为研究细胞分裂素在水稻籽粒发育中的作用,构建了p1300-p PG-5α-IPT-Nos植物表达载体,并对水稻进行遗传转化。以水稻品种9311为材料,采用PCR法获得种子中特异表达的PG-5α基因启动子,并将此启动子与p1300相连接,构建p1300-p PG-5α载体,用NcoⅠ和SpeⅠ双酶切p SG516,获得IPT-Nos核酸片段,然后将此核酸片段插入到p1300-p PG-5α中,构建p1300-p PG-5α-IPT-Nos植物表达载体。以水稻品种日本晴愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化。成功构建了植物表达载体p1300-p PG-5α-IPT-Nos,获得了阳性率为...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
袁友泉 李超超 许馨月 张志宏 刘月学
为研究草莓ＡＰ１同源基因ＦＡＡＰ１的功能，构建了其植物表达载体ＰＢＩ１２１－ＦＡＡＰ１，并导入到农杆菌菌株ＧＶ３１０１中。利用花序浸染法将该基因导入拟南芥，经抗性筛选、ＰＣＲ检测表明获得了３个转化株系。结果显示，与对照相比，转基因株系明显早花，成花时间可提早１０ｄ以上；同时其营养生长受到抑制，植株个体矮小，莲座叶数目减少；在早花的同时，转化株系花器官异常，不能形成种子。表明草莓ＦＡＡＰ１基因参与了成花过程的调控。
关键词：
草莓 FaAP1 拟南芥 超表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
袁友泉 李超超 许馨月 张志宏 刘月学
为研究草莓AP1同源基因Fa AP1的功能,构建了其植物表达载体p BI121GFa AP1,并导入到农杆菌菌株GV3101中.利用花序浸染法将该基因导入拟南芥,经抗性筛选、PCR检测表明获得了3个转化株系.结果显示,与对照相比,转基因株系明显早花,成花时间可提早10d以上;同时其营养生长受到抑制,植株个体矮小,莲座叶数目减少;在早花的同时,转化株系花器官异常,不能形成种子.表明草莓Fa AP1基因参与了成花过程的调控.
关键词：
草莓 Fa AP1 拟南芥 超表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋春丽 赵丛枝 马俊莲
为通过转基因技术改善草莓的贮运性能,以全明星草莓为试材,克隆了与草莓成熟有关的FaEtr2基因的2个片段,并构建了该基因的反义和正义植物表达载体。根据已克隆的草莓乙烯受体FaEtr2基因序列及表达载体pBI221上的酶切位点设计2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个全明星草莓FaEtr2基因片段。两片段经双酶切消化后分别以正、反两个方向插入到植物表达载体pBI221的35 S启动子和NOS终止子之间,分别构建成All Star-FaEtr2基因的正、反义植物表达载体。
[期刊] 华北农学报
[作者]
冯雪 贾永红 郭红珍 张一名 赵学良 孙艳香
应用DNA重组技术将编码大豆液泡膜Na+/H+反向转运蛋白GmNHX1和百脉根液泡膜H+-PPase LcVP1的开放阅读框片段同时构建在pCambia1301载体中,形成p1301-GmNHX1-LcVP1双价耐盐基因植物表达载体。以Coker 312棉花品种的胚性愈伤组织为外植体,采用根癌农杆菌介导法将其转入棉花中,并利用潮霉素筛选获得抗性植株。对抗性植株的T1幼苗进行分子和生理指标检测,表明外源基因已成功整合到棉花基因组中,并不同程度地提高了转基因株系耐盐能力。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王晓静 孙林静 孙玥 张融雪 李军玲 闫双勇 苏京平
为研究水稻水孔蛋白OsPIP2;7基因在非生物胁迫中的生物学功能,根据OsPIP2;7基因序列设计特异性引物,以水稻品种中花11的三叶龄叶片RNA反转录的cDNA第一链为模板,克隆OsPIP2;7。采用嵌套PCR的方法,将3×HA标签的碱基序列连接在去除终止子OsPIP2;7基因序列的3′端,然后将此核酸片段插入到植物双元表达载体pHB中,构建pHB-OsPIP2;7-3×HA载体。以中花11成熟胚愈伤组织为材料,采用农杆菌介导的方法进行遗传转化,经过在含有潮霉素的培养基上筛选和分化,获得阳性转化子。提取转基因植株的DNA,进行潮霉素阳性植株的筛选。将阳性植株进行RNA表达检测,获得OsPIP2;7基因表达量上升的转基因阳性植株。为了检测转基因植株中OsPIP2;7蛋白的表达情况,提取OsPIP2;7基因表达上升的转基因植株膜蛋白后,用HA抗体进行杂交的Western-blot检测结果显示,OsPIP2;7-HA蛋白在转基因阳性植株体内过量表达。获得的过表达OsPIP2;7转基因新材料,将为研究OsPIP2;7基因的生物学新功能提供试验基础。
关键词：
水稻 水孔蛋白 HA标签 蛋白表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
董云洲
构建了 Imtl(Inositol methyltransferase,肌醇甲基转移酶)基因的高效植物表达载体pDH01。通过农杆菌介导的遗传转化法,得到了转基因植株。将收获的转基因 F_1烟草种子,发芽后以1.5％NaCl溶液浇灌,转Imtl基因烟草后代具有明显的耐盐能力,在株高、单株鲜重、生长势等指标上具有显著优势。
关键词：
烟草 肌醇甲基转移酶 转基因 耐盐性
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈锦华 郭磊 易力雄 刘春林 阮颖
AtCS82是拟南芥中一个功能未知的基因,推测该基因可能与种子油脂合成代谢相关。为探明AtCS82基因的功能,采用半定量RT-PCR法对AtCS82基因在拟南芥不同组织(茎、叶、花、果荚)中的表达情况进行了分析,发现其在果荚中的表达量较高,而在茎、叶、花中的表达量明显偏低,推测AtCS82基因可能参与种子发育;使用三引物法对T-DNA插入突变体进行纯合子筛选,并通过RT-PCR检测纯合子植株中AtCS82基因的表达情况,试验结果证明获得了稳定遗传的AtCS82基因沉默纯合突变体;通过构建pCAMBIA1300-35S::CS82过表达载体,并转化拟南芥哥伦比亚野生型(Col)的方式,获得了At...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘影 田振东 宋波涛 柳俊 谢从华
基于马铃薯StERF3超量表达载体转基因株系中出现了部分矮化植株,通过基因表达量检测、组织切片分析和转基因试管苗添加外源生长调节剂等方面对矮化原因进行了初步探讨。结果表明:矮化株中StERF3基因表达比对照降低;矮化株木质部和薄壁细胞明显变小,栅栏组织和海绵组织较致密;培养基中添加0.5mg/mL GA3能够使矮化株明显增高,但添加IAA效果不明显;转基因矮化株含有3～4个拷贝,多拷贝导致了目标基因的沉默;在干涉株系中StERF3基因表达比对照降低,但并未出现矮化株;推测植株矮化并不是由于StERF3表达量引起,很可能是由于多拷贝插入导致与GA3合成或其调控有关基因受到干扰引起。
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
齐春辉 韩烈保 梁小红 曾会明 刘君
将含有DREB1A和gus基因的双基因载体质粒包裹在金粉上,以基因枪轰击日本结缕草胚性愈伤组织,以gus基因的瞬时表达研究日本结缕草基因枪转化参数.结果表明,在1 100 psi压力下6 cm的轰击距离、每皿轰击2次的转化效果最好,而金粉和质粒用量对转化效率影响不显著;经过筛选和再生培养,检测到gus基因的稳定表达,并获得日本结缕草潮霉素抗性株系,PCR-Southern杂交证实外源DREB1A基因已整合到日本结缕草基因组中.
[期刊] 华北农学报
[作者]
王聚财 刘运超 陈玉梅 孟凤丽 王爱萍 张二芹 许倩茹 邓瑞广 张改平
利用水稻胚乳细胞生物反应器,构建含有HPV45-L1和HPV58-L1基因的重组植物表达载体,为HPV-45L1和HPV58-L1蛋白的表达提供一种新的高效、低廉的表达方式。利用PCR技术克隆人乳头瘤病毒HPV45-L1和HPV58-L1蛋白编码基因,将其重组于中间载体pMP3和植物表达载体pCAMBIA-1300中,构建含HPV45-L1和HPV58-L1基因的植物表达载体pCAMBIA-1300-pMP3-HPV45-L1、pCAMBIA-1300-pMP3-HPV58-L1,随后采用根癌农杆菌侵染水
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
