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[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
张馨宇 戚华彩 董向向 李贺 张志宏
ｍｉｃｒｏ ｒＮＡ（ｍｉｒＮＡ）是来自真核生物自身基因组的非编码小分子ｒＮＡ，在转录后水平上负调控基因表达，在植物的生长发育和胁迫应答等方面起重要作用。以栽培草莓艳丽为试材，利用ｒＴ－Ｐｃｒ技术克隆草莓叶片中５种新ｍｉｒＮＡ的前体及靶基因，分析靶基因的结构特征与功能，结果表明：草莓ｍｉ ｒ－６，ｍｉ ｒ－１２，ｍｉ ｒ－１３，ｍｉ ｒ－１４，ｍｉ ｒ－２９的前体长度分别为５１３ ｂＰ，３０９ ｂＰ，４６４ｂＰ，３３４ ｂＰ和３４３ ｂＰ，均能形成典型的茎环结构，其中ｍｉ ｒ－１２、ｍｉ ｒ－１３的成熟ｍｉｒＮＡ序列在茎环３＇端臂上，ｍｉ ｒ－６、ｍｉ ｒ－１４、ｍｉ ｒ－２９成熟ｍｉｒＮＡ序列．．．
关键词：
草莓 miRNA 前体 靶基因 功能分析
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李贺 张志宏 高秀岩 刘月学 黄飞飞
【目的】microRNAs(miRNAs)在植物的生长发育过程中起着重要作用,本研究旨在建立一种快速准确地鉴定草莓中保守miRNA的方法。【方法】以草莓叶片为试材,在利用改进的CTAB法成功富集小于150bp的小分子RNA的基础之上,采用3′端加接头、5′端和3′端两端加接头、利用茎环等3种RT-PCR策略来检测鉴定草莓中保守miRNA,同时比较总核酸、总RNA和小分子RNA等不同种类的模板对利用茎环RT-PCR检测miRNA的影响。【结果】对于植物中20种miRNAs,通过3′端加接头方式鉴定出7种;通过两端加接头方式鉴定出1种;而利用茎环的方式鉴定出15种。分别以3种核酸为模板的茎环RT-...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
顾冕 孟大千 徐国华
［目的］本文旨在明确林烟草（ＮｉｃｏｔｉａＮａ ｓｙｌｖｅｓｔｒｉｓ）ｍｉｃｒｏｒＮａ８２７（ｍｉｒ８２７）及其靶基因的表达调控特征，揭示其靶基因在进化上的变异性及其功能，为全面解析植物磷信号途径提供新的证据。［方法］基于本课题组前期工作从普通烟草（ＮｉｃｏｔｉａＮａ ｔａｂａｃｕｍ）中克隆到的ｍｉｒ８２７基因序列，采用生物信息学手段结合ｒａｃｅ和ｒｔ－ｑ Ｐｃｒ，以及本氏烟草叶片表皮细胞瞬时表达和酵母突变体回补试验，对林烟草ｍｉｒ８２７的靶基因进行克隆，对ｍｉｒ８２７及其靶基因的表达模式、靶基因的定位和功能进行研究。［结果］获得林烟草ｍｉｒ８２７两个靶基因Ｎｓ－ｓＰＸ－ｍＦｓ１／２的ｃ ＤＮ．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴田 谢从华
以马铃薯叶片为试验材料,其叶片分别经外源SA、MJ、ETH、ABA处理后,在不同时间点取样,提取总RNA,对Star基因的表达进行半定量RT-PCR分析。结果表明,Star基因能够被SA、MJ、ABA迅速诱导表达,而被ETH诱导表达的时间比较晚。可见,Star基因被4种信号分子诱导表达之间存在广泛的重叠,反映了在马铃薯抵御晚疫病菌侵染过程中Star基因参与了一个非常复杂的信号传递过程。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵晓初 李贺 代红艳 刘月学 马跃 张志宏
【目的】从草莓中克隆SPL(SQUAMOSA promoter binding protein-like)转录因子基因SPL9,并分析其在草莓植株不同生长时期的表达水平及与miR156的表达关系,探讨SPL9在草莓植株生长发育中的作用。【方法】根据苹果SPL基因家族的保守序列设计简并引物,以草莓叶片为试材,利用RT-PCR克隆草莓SPL9基因片段,在此基础上利用RACE方法克隆SPL9的cDNA全长。利用实时定量RT-PCR技术分析草莓叶片中SPL9及miR156的表达水平。【结果】从草莓(Fragaria×ananassa)品种‘全明星’中克隆出SPL9基因的cDNA全长序列,命名为FaSP...
[期刊] 华北农学报
[作者]
苏丽艳
生长素响应因子ARF是一类新的转录因子,通过激活或抑制生长素响应基因的表达调控植物的生长发育过程。为解析草莓生长素响应因子FvARF5在草莓形成过程中的功能,以草莓为试验材料,克隆了FvARF5基因并进行了生物信息学分析,利用qPCR分析了FvARF5在草莓不同组织及植物激素处理下的表达模式。结果表明,FvARF5基因开放阅读框为2 745 bp,编码914个氨基酸,蛋白质分子质量为100.65 ku,等电点为5.25。多序列比对和系统进化树分析表明,FvARF5基因具有保守的B3 DNA结合结构域和生长素响应因子保守结构域,与蔷薇科月季ARF5基因的进化关系最近,相似度达95%。亚细胞定位预测分析表明,FvARF5蛋白定位于细胞核中。启动子分析显示,FvARF5基因具有多样化的激素应答元件。qPCR结果表明,FvARF5存在组织表达差异,在茎和绿果中表达量较高。另外,FvARF5基因表达受到生长素和赤霉素的诱导,初步推测该基因可能参与了生长素和赤霉素调控草莓果实的形成过程。为进一步研究FvARF5基因的功能奠定基础。
关键词：
草莓 FvARF5 生长素 基因克隆
[期刊] 西南农业学报
[作者]
吕广磊 付坚 和志娇 白现广 蔺忠龙 黄兴奇 杨和生 程在全
以从疣粒野生稻受白叶枯病菌诱导所建的差减文库中筛选出的一个具有CC-NBS-LRR抗病结构域的基因(克隆号为ME281),用半定量RT-PCR法,以肌动蛋白(β-actin)基因为内参,研究疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因ME281基因mRNA的表达水平。通过对PCR体系中循环次数及Mg2+浓度的优化,最终建立了一个稳定、方便的半定量RT-PCR体系。通过ME281基因与β-actin基因PCR产物的灰度之比,确定ME281为诱导性表达,并进一步推测其为疣粒野生稻抗白叶枯病相关基因,甚至为抗病基因。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
侯圣凡 华战迎 刘峻杰 董振飞 冯泽坤 闫佳琪 王红清
为科学防控草莓炭疽根腐病,本研究在调查全国12个草莓主产区的109株草莓根部腐烂样品的基础上,对导致草莓根部腐烂的病原菌进行菌落形态鉴定、分离纯化与分子鉴定、多基因序列(ITS-ACT-GAPDH-CALTUB2-CHS)联合鉴定以及致病性鉴定。结果表明:109株草莓根部腐烂样品中有27.5%的样品是由草莓炭疽根腐病病原菌胶孢炭疽菌复合种(Colletotrichum gloeosporioides complex)引起;胶孢炭疽菌复合种可分为3种生理小种,分别为暹罗炭疽菌(C.siamense)、隐秘炭疽菌(C.aenigma)与果生刺盘孢菌(C.fructicola);3种炭疽菌致病力由高到低依次为隐秘炭疽菌、果生刺盘孢菌和暹罗炭疽菌。其中隐秘炭疽菌发病较快,引起的病症较重。综上,本研究可为草莓炭疽根腐病病害防控提供有价值的信息。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李春 王永 李义 丁静
[目的]本文旨在鉴定森林草莓同源异型域-亮氨酸拉链家族(homeodomain-leucine Zipper,HD-Zip)Ⅰ亚家族的转录因子,分析其序列属性及表达模式,为其进一步功能研究和利用奠定基础。[方法]运用生物信息学方法,鉴定和分析森林草莓HD-ZipⅠ亚家族基因的系统进化关系、蛋白基序、基因结构、复制方式及启动子元件等;利用公共转录组数据和荧光定量PCR技术,分析其在花和早期果实中以及黑暗、脱落酸(ABA)、6-苄氨基嘌呤(6-BA)或水杨酸(SA)处理的离体叶片中的表达模式。[结果]森林草莓HD-ZipⅠ亚家族包含11个基因,它们含有0～3个内含子,相对均匀地分布在第1和3～7号染色体上。全基因组/片段复制是HD-ZipⅠ亚家族基因扩张的主要复制方式。光和激素响应元件是其启动子区所占比例最高的2类顺式作用元件。转录组数据显示,多数HD-ZipⅠ基因在森林草莓除成熟花粉粒和胚之外的花和早期果实组织中表达量较高。5个HD-ZipⅠ亚家族基因的定量结果表明,FvH4_1g20230、FvH4_5g36570、FvH4_5g15520和FvH4_7g32570基因在ABA、6-BA或SA处理3和6 h时有响应;FvH4_7g32570基因在黑暗时被诱导,FvH4_5g36570、FvH4_7g32570、FvH4_1g20230、FvH4_5g15520基因在ABA诱导的离体叶片衰老过程中发生显著的表达变化;而在6-BA处理的叶片中,这5个基因的表达与对照相比均无持续的显著变化。[结论]HD-ZipⅠ亚家族基因很可能在黑暗和ABA诱导的森林草莓离体叶片衰老过程中起重要的调控作用,并参与森林草莓花和早期果实的发育以及激素响应过程。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
岳静宇 刘明 雷家军 薛莉
红花草莓是一种可食用的观赏花卉,花色是红花草莓最主要的观赏性状。miRNAs作为重要的转录后调节因子,在植物中发挥着重要的作用,但在红花草莓中尚未见报道。通过对红花草莓品种四季红不同发育进程的花蕾进行miRNA和降解组测序,利用趋势分析,筛选到与花色调控相关的差异FamiR156a及其差异靶基因FaSPL13A,对其进行克隆、过表达载体的构建、生物信息学分析和表达分析。结果表明:FamiR156a前体序列为104 bp,靶基因FaSPL13A编码区序列为1236 bp,并对获得的序列分别进行生物信息学分析和系统进化树构建,发现FamiR156a前体序列与蔷薇科的苹果、桃同为一个分支,FaSPL13A的氨基酸序列与蔷薇科的森林草莓和月季聚类在同一分支上,说明它们亲缘关系较近、功能相似且克隆结果准确。同时,构建了FamiR156a及其靶基因FaSPL13A过表达载体pRI-101-AN-FamiR156a和pRI-101-AN-FaSPL13A,成功转入到农杆菌中。随着花蕾的发育,花瓣的颜色逐渐加深,实时荧光定量结果发现,FaSPL13A基因在红花草莓花瓣中表达逐渐下降,而FamiR156a的表达量逐渐升高,二者表达量呈相反趋势,表明在红花草莓花瓣呈色过程中FamiR156a及其靶基因FaSPL13A是负调控的关系,从而说明FamiR156a可能调控红花草莓花瓣的着色。研究结果为揭示红花草莓花瓣花青苷的生物合成提供了转录后水平调控的分子依据,为进一步深入研究红花草莓花瓣呈色机理及分子育种奠定了基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
秦彩艳 霍金龙 王配 王淑燕 苗永旺 潘伟荣 査星琴 曾养志
通过NCBI下载猪近缘物种的KCNJ12基因序列,在线BLAST比对获得猪EST序列、参考基因组序列和高通量基因组序列。利用Lasergene软件电子克隆猪KCNJ12基因编码区序列及部分侧翼序列。针对编码区设计特异引物并以版纳微型猪近交系BMI为研究材料进行试验验证,同时应用半定量RT-PCR技术对BMI 31种重要组织进行了表达分析。研究获得了猪KCNJ12 1 290 bp的编码区序列(GenBank登录号:KC505155,对应的氨基酸登录号:AGK36093)。生物信息学分析表明,该基因编码429个氨基酸,预测的蛋白质分子量(Mw)为48.63 kDa,等电点(pI)为5.66。蛋白...
[期刊] 林业科学
[作者]
薛永常 李金花 卢孟柱 张绮纹
A fragment of PAL (phenylalanine ammonia_lyase) gene was amplified by RT_PCR from poplar (Populus×euramericana cv. “74/76”) developing second xylem mRNA. It was cloned into pGEM-T Easy vector and identified by restriction enzyme, PCR amplification and sequencing. The sequence of the amplified DNA fr...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杜国栋 张鹤 宋亚楠 吕三三 王素素
研究草莓根系腐解物溶液的化感作用,探讨其对草莓光合机构功能的抑制作用。利用盆栽试验考察5个草莓根系腐解物溶液处理(0.0%,2.5%,5.0%,10.0%,20.0%)对草莓植株的生长发育、叶片气体交换和光系统功能的影响。结果表明:根系腐解物处理对下茬草莓植株叶柄长度、新茎粗度和叶面积有一定抑制作用。处理70d后,草莓植株叶面积分别较对照降低16.3%、18.8%、27.1%和38.8%。随处理浓度增加,根系腐解物明显降低了草莓叶片中叶绿素各组分的含量,提高叶绿素a/b比值;各处理叶片的净光合速率(Pn)分别较对照下降了22.7%、25.3%、43.2%和43.0%,气孔导度(Gs)和胞间CO...
[期刊] 华北农学报
[作者]
谷瑞华 王进忠 文思远 王升启 张爱环 魏艳敏
为了快速提取植物叶片的总RNA,并对烟草病毒进行检测,对提取及检测方法进行了研究。结果表明:以黄瓜叶片、白肋烟叶片为试材,用TRIzol试剂盒在1 h内提取到纯度高、完整性好的总RNA。设计烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒和马铃薯X病毒的特异性引物,RT-PCR检测,从感病叶片中分别扩增出313,326,392 bp的目的片断,而健康叶片中无此扩增带。构建这3种病毒重组质粒,对核苷酸序列与GeneBank中报道的进行比较,同源性分别为99.36%,97.55%,98.21%。用这种方法快速、可靠,为烟草病毒的检测提供科学依据。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
罗赟 陈宗玲 宋卫堂 王红清
为研究草莓不同品种花色苷成分组成特点,本试验以17个品种草莓为试材,利用液质联用仪(HPLCMS)和高效液相色谱仪(HPLC-DAD)对果实花色苷的种类与含量进行研究。在草莓果实中检测到9种花色苷,但不同品种所含花色苷种类、含量及比例有所不同。其中花葵素3-葡糖苷、花葵素3-芸香苷、花葵素-丙二酰葡糖苷、花青素3-葡糖苷和花葵素3-甲基丙二酰葡糖苷在草莓中含量较多,尤以花葵素3-葡糖苷含量最高,占总花色苷的58.6%~93.6%。通过主成份分析和品种聚类分析,根据总花色苷含量高低、花色苷种类丰富程度和花青苷含量的高低的综合因素,将草莓品种分为丰富型(RA)3个、高花青苷型(HC)6个,普通型(...
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