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[期刊] 西南农业学报
[作者]
张楠 洪永聪 丁兆堂 王玉
本文研究冷驯化过程中茶苗叶片细胞膜相对透性和可溶性蛋白含量的变化,采用不同方法提取分离冷驯化茶苗叶片的低温诱导蛋白。结果表明:①与离体叶片相比,冷驯化茶苗叶片更适宜用来分离茶树低温诱导蛋白,其表现为质膜相对透性变化不大,而且可溶性蛋白含量保持在较高水平。②与丙酮沉淀法、TCA/丙酮沉淀法、硫酸铵沉淀法和直接提取法相比,改良Tris-HCl法最适于冷驯化茶苗叶片低温诱导蛋白的分离提取,其特点是蛋白样品得率高、蛋白条带多且清晰、杂质干扰程度少、操作步骤简易。另外,在冷驯化蛋白提取样品中还发现了大小分别为25、35和90 KDa的蛋白差异条带。
关键词：
茶 冷驯化 低温诱导蛋白 提取分离
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王晓媛 陈晨 赵江哲 芮琪 张列峰 汪瑾 徐朗莱
采用30%~50%饱和度的硫酸铵沉淀、凝胶层析脱盐及聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,再通过直接切胶后用回收槽电洗脱回收的方法,从暗诱导衰老小麦叶片中分离得到了1种耐热的蛋白水解酶。该酶具有良好的热稳定性,且表现出相当宽的pH稳定范围。该酶的最适温度为50℃,最适pH为8。分离得到的酶液在0~60℃处理1 h后,酶活性无明显变化,70℃处理1 h后仍有部分活性。酸性蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂都不能抑制该蛋白水解酶的活性,但丝氨酸蛋白酶抑制剂能部分抑制该酶的活性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张恒 陈怡名 张旭 牛影 赵佳 吴承云 郝永利 孙丽 王海燕 肖进 王秀娥
[目的]本文旨在使用“Mate＆Plate”技术构建簇毛麦受白粉菌诱导的酵母双杂交文库，鉴定正向调节小麦白粉病抗性的簇毛麦E3泛素连接酶蛋白CMPG1-V的互作蛋白，为解析其抗病性机制奠定基础。[方法]提取白粉菌诱导前及诱导后1、2、4、6、12、24和48 h的簇毛麦叶片总RNA，利用SMART技术分离纯化mRNA，合成ds cDNA，将ds cDNA和pGADT7-Rec载体共同转入酵母菌株Y187，构建簇毛麦酵母双杂交文库，明确文库插入片段大小和滴度。以CMPG1-V为诱饵筛库，并对部分互作蛋白进行了回补验证，利用BiFC方法验证CMPG1-V与筛选到的一个互作蛋白CMIN6（MYB25-V）的体内互作。[结果]成功构建了受白粉菌诱导的簇毛麦叶片酵母双杂交文库，文库滴度为9.5×10~(7 )CFU·mL~(-1)，插入片段长度在250～2 000 bp之间，重组率为100%。以CMPG1-V为诱饵筛选文库，获得79个互作蛋白，挑选其中10个互作蛋白进行回补验证。通过BiFC实验验证了CMPG1-V与MYB25-V的体内互作。MYB25-V及其在小麦中的同源基因TaMYB25受白粉菌诱导后均上调表达，推测MYB25-V可能参与调控小麦白粉病抗性。[结论]本研究成功构建了白粉菌诱导的簇毛麦酵母双杂交文库，为鉴定CMPG1-V的互作蛋白并解析其抗病性机制奠定了基础。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
梁美霞 戴洪义
以福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片为试材,研究了植物生长调节剂、基因型、暗培养、AgNO3对苹果叶片不定芽分化的影响.结果表明:福早红、鲁加3号和鲁加6号3个苹果品种的组培苗叶片分化最佳培养基分别为MS+6-BA4mg/L+NAA0.20mg/L,MS+6-BA4mg/L+NAA0.10mg/L,MS+6-BA4mg/L+NAA0.05mg/L;基因型是决定苹果组培苗叶片分化的重要因素,3个苹果品种叶片分化不定芽的能力从大到小依次是福早红、鲁加6号、鲁加3号;暗培养可以明显促进苹果叶片进行脱分化,提高叶片的分化率,苹果叶片暗培养处理的最佳时间为15d;AgNO3抑制苹果叶片愈...
[期刊] 华北农学报
[作者]
潘怡欧 刘琳琳 张炬红 张静 安少利 许鹏 靳军灵 刘志伟 席景会
植物在长期进化过程中形成了自我防御机制,能够产生特异的抗性蛋白来应对各种生物因子的胁迫,其中茉莉酸信号途径是植物必需的防御机制。本研究对拟南芥施用茉莉酸处理和对照叶片蛋白质的差异表达变化,并试图通过蛋白质组学技术来检测茉莉酸诱导的蛋白质,通过蛋白质双向电泳发现有28个蛋白点发生了显著的变化,其中19个蛋白点上调表达,9个蛋白点下调表达。选择10个差异蛋白点进行了质谱鉴定,它们分别是苏氨酸蛋白激酶、热激蛋白、不依赖于维生素B12的蛋氨酸合酶、腺嘌呤琥珀酸合酶、碳酸酐酶等,这些蛋白质可能在拟南芥叶片应答茉莉酸反应的过程中起到重要作用,进一步进行差异蛋白的功能分析对揭示茉莉酸信号通路和植物防御机制的...
关键词：
拟南芥 茉莉酸甲酯 双向电泳 质谱
[期刊] 华北农学报
[作者]
袁金海 刘自刚 孙万仓 曾秀存 马骊 方园 刘海卿 郭仁迪 王治江 陈奇 王凯音 刘林波
为了研究质外体蛋白在低温胁迫下白菜型冬油菜抗寒的作用机理，以陇油７号五叶期叶片为试材，采用２种不同提取液（提取液Ａ：０．１ ｍｏｌ／ｌ ｐ Ｈ值＝７．６ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、０．２ ｍｏｌ／ｌ ＫＣｌ、１ ｍｍｏｌ／ｌ ｐｍｓＦ，提取液Ｂ：０．０５ ｍｏｌ／ｌ ｐ Ｈ值＝７．６ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、０．０１ ｍｏｌ／ｌ ＥＤＴＡ－ＮＡ２、０．０２ ｍｏｌ／ｌ ＶＣ、１ ｍｍｏｌ／ｌ ｐｍｓＦ）进行质外体蛋白提取效果比较。结果表明：提取液Ａ的蛋白提取率达到了（０．０７３±０．００４ ６）ｍｇ／ｇ，比提取液Ｂ提高了４２．８８％；经六磷酸葡萄糖脱氢酶（ｇ６ｐＤＨ）活性检测，提取液Ａ提取的蛋白质污染率较提．．．
关键词：
质外体 陇油7号 蛋白 双向电泳
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
樊青峰 李国怀 浦艳吉 姚延兴
以Nubiana叶片为试材,对其愈伤组织的诱导、继代培养及褐变调控进行了研究。结果表明:Nubiana叶片愈伤的诱导及继代培养以WPM附加BA 0.5 mg/L和2.4-D 2.0 mg/L的培养基上效果最好;0.1%的柠檬酸(CA)具有明显地促进愈伤组织生长、抑制褐变的作用,而聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的效果最差;3%的葡萄糖(Glu)最适于愈伤组织的诱导及继代。综合以上研究结果,获得较好的愈伤组织的适宜培养条件是:WPM+BA 0.5 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L+Glu 3%+CA 0.075%~0.1%,暗培养28~30 d。
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
潘銮银 宋红改 蒋晶 乔桂荣 李海营 王扬 林永生 卓仁英
以文心兰Oncidium flexuosum无菌苗叶片为外植体,1/2MS(Murashige and Skoog)为基本培养基,对不同叶位、叶片大小(叶龄)、不同植物生长调节物质处理诱导体胚的效果进行了研究。结果表明:①幼苗的叶尖、叶基部切口、叶面切口、叶面和叶缘均能诱导出体胚,绝大部分体胚能形成二次体胚并能分化成多个类原球茎(PLBs)。②诱导体胚的最佳外植体材料是取自带根幼苗15mm长叶片。③诱导体胚的适宜培养基组成如下:1/2MS培养基(其中微量元素和有机添加物为全量,铁盐减半),磷酸二氢钠170.00mg·L-1,谷胺酰胺1000.00mg·L-1,蛋白胨1000.00mg·L-1,...
关键词：
植物学 文心兰 叶片 体胚诱导
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
莫竹承 庞万伟 刘珏 李滨
为了抢救性保护我国濒危植物膝柄木,以叶片外植体为培养材料,在叶片背面划痕,配制MS培养基附加不同浓度的2,4-D和6-BA,设置不同的暗培养时间,做3个重复的L3(43)正交设计试验,探讨各因子对膝柄木叶片诱导愈伤组织的影响。结果表明各因素对愈伤组织诱导率的影响大小顺序为:暗培养时间>2,4-D>划痕数,6-BA的影响未能达到显著水平。诱导膝柄木叶片愈伤组织各因素最佳浓度组合是:2,4-D=1.0 mg/L,6-BA=0.5 mg/L,划痕=4~5条,暗培养=30天。
关键词：
膝柄木 叶片 愈伤组织 诱导率
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张姝 王敏 韩梅琳 陈强 马荣才 高俊莲
【目的】HrpNEcc蛋白是一种起细胞信号作用的蛋白激发子,通过激活植物遗传系统的多基因表达调控,诱导植物的广谱抗病性、驱虫性和抗逆性,促进植物生长发育,因此在农业生产中具有重要意义。在hrpNEcc重组大肠杆菌高密度发酵廉价诱导剂的筛选工作中,偶然发现不添加任何外源诱导剂的TB培养基对照处理也有HrpNEcc蛋白合成。本研究旨在找出引起对照处理中HrpNEcc蛋白合成的诱导因子,并研究诱导因子的来源和含量对HrpNEcc蛋白合成的影响。【方法】摇瓶发酵培养重组大肠杆菌,离心收集菌体,用考马斯亮蓝染色法测定菌体总蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白条带,并结合Bandscan软件计算出HrpNE...
关键词：
诱导 hrpNEcc 蛋白合成 生物农药
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡敏 徐凌飞 张军科 仇宗浩 丁勤 张静
【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDS-PAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1h,选用长17cm、pH 4～7的IPG胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100V30min、180V 6h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。
关键词：
梨 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沈少炎 吴玉香 荣俊冬 何天友 郑郁善
以2年生花吊丝竹的扦插苗为研究材料,对2种方法(TCA/酚提结合法和PEG法)提取的蛋白质的2-DE差异进行研究.结果表明:PEG法的5个组分的条带差异明显,全蛋白得到了有效分离,在F3中富集到了2条高丰度蛋白带;2种方法的2-DE图谱的均一性分析发现,PEG法中F3富集了高丰度蛋白,提高了2-DE中蛋白质的检测率和分辨率,PEG法中F1-F5共检测的蛋白总数超过了1700个,但是相邻组存在一定的重叠率,而TCA丙酮/酚提结合法只检测到约571个蛋白点,5个组与NF平均有439个蛋白点匹配,达到77.9%
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈香玲 任惠 黄章保 苏伟强 刘业强 李果果 刘要鑫 王小媚
为建立一套适用于鉴别＂四季芒＂成花蛋白表达差异的双向电泳方法，摸索出合适的芒果叶片蛋白提取方案。以＂四季芒＂芒果叶片为材料，采用ＴＣＡ－丙酮法、酚抽提乙酸铵沉淀法、改良酚抽提乙酸铵沉淀法等３种芒果叶片蛋白提取方法，进行ＳＤＳＰＡＧＥ和双向电泳，比较这些方法的提取效果。结果表明，改良酚抽提乙酸铵沉淀法比一般酚抽提法获得更高质量的蛋白。对沉淀产物洗涤和干燥步骤的优化能有效提高ＴＣＡ－丙酮法蛋白提取质量。提取液Ｐ Ｈ能明显影响改良酚抽提乙酸铵沉淀法所提蛋白的得率、２－ＤＥ凝胶蛋白点数量和分布。Ｐ Ｈ ８．５提取液所提蛋白获得最多的２－ＤＥ蛋白点，但在小分子区域蛋白分辨率比Ｐ Ｈ９．０提取液所提蛋白低．．．
关键词：
芒果 蛋白提取 双向电泳 蛋白质组
[期刊] 中国农业科学
[作者]
安飞飞 凡杰 李庚虎 简纯平 李开绵
【目的】通过对华南8号木薯及其四倍体诱导株系叶片差异蛋白质及叶绿素荧光参数的分析,在蛋白质水平上揭示两者叶片存在的差异以及其与光合效率间的关系。【方法】通过木薯嫩叶、根尖染色体压片及流式细胞观察对华南8号四倍体诱导株系进行鉴定,采用双向电泳技术分离叶片蛋白质,Delta 2D软件分析差异蛋白质并通过质谱技术鉴定,利用Western blot技术对部分差异蛋白质进行验证;采用95%乙醇直接提取法测定叶绿素含量,并用Imaging-Pam测定叶绿素荧光动力学参数。【结果】染色体压片及流式细胞结果均显示,诱导得到SC8多倍体株系为四倍体株系;得到的13个差异蛋白质点中上调表达12个,下调表达1个;经...
关键词：
木薯 四倍体株系 差异蛋白质 光合效率
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