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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
辛泽毓 周燮 张能刚
以茉莉酸－牛血清白蛋白复合物作为免疫原，获得了兔抗茉莉酸甲酯抗血清，并在此基础上建立了茉莉酸固相抗原型ＥＬＩＳＡ。此外，利用茉莉酸甲酯和辣根过氧化物酶标记的茉莉酸对鼠抗茉莉酸甲酯单克隆抗体的竞争结合，建立了茉莉酸固相抗体型ＥＬＩＳＡ。上述两种ＥＬＩＳＡ的检测灵敏度分别为０．４２ｐｍｏｌ和０．２０ｐｍｏｌ，检测范围分别为０．９８～１０００ｐｍｏｌ和０．６３～２０ｐｍｏｌ，批内变异系数分别为３．４４％和１．６２％，批间变异系数分别为２．４７％和２．０６％。样品的平均回收率分别为７３．３％和７６．９％。
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄少白 周燮
用碳二亚胺(EDC)法将赤霉素A_4(GA_4)与卵清蛋白(OVA)连接,形成GA_4-OVA复合物用于包板,利用GA_4-Me与GA_4-OVA对兔抗GA_4-PAbs竞争结合反应,建立了GA_(1,3,4,7)间接酶联免疫检测法(ELISA).其灵敏度、检测范围和最小检测样品量分别为45pg,0.2～200ng和50～500mg,样品的平均回收率为97%,批内和批间的变异系数分别为4.2%和4.8%.
关键词：
赤霉素 酶联免疫检测法(ELISA)
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李新朋 姜金庆 钱爱东 王自良 范国英 单晓峰 康元环 李艺
【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘智宏 叶妮 郭文林 黄耀凌 张纯萍 郭筱华 黄齐宜
【目的】构建一种四环素类药物多残留酶联免疫检测试剂盒。【方法】将四环素类药物与载体蛋白相连作为抗原免疫动物,获得了抗四环素类药物的抗体,建立了动物性食品中四环素类药物残留的ELISA检测方法,并将该试剂盒的检测性能与进口试剂盒比较,对实际样品的测定结果与高效液相-串联质谱法比较。【结果】人工抗原中四环素与蛋白质分子的结合比约为15﹕1,血清效价达到1﹕2000倍以上,50%抑制浓度(IC50)为3μg·L-1左右,7种四环素类药物交叉反应率在58%～100%之间,牛奶和鸡肉中四环素类药物的检测限分别为6.6μg.L-1和6.5μg·kg-1,在鸡肉中四环素、土霉素和金霉素的回收率在40%～12...
关键词：
四环素类药物 多残留 ELISA 试剂盒
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李华 祭芳 徐剑宏 王裕中 史建荣
【目的】建立快速、灵敏、有效的毒素检测方法,以保证麦类作物的安全生产以及谷物食品的安全性。【方法】以主要赤霉病菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)为对象,利用半琥珀酰化脱氧雪腐镰刀菌烯醇的牛血清蛋白偶联物(3-HS-DON-BSA)作免疫原,分别采用腹膜腔注射法和颈、背部多点注射法免疫Balb/c小鼠和豚鼠,获得DON的多抗血清,建立间接ELISA检测方法。【结果】多抗豚鼠血清的效价达到1∶6400,而小鼠混合血清的效价则为1∶12800。引起DON抗体最大结合50%抑制时,所需DON及其类似物3-Ac-DON和T-2毒素的量分别为63μg·ml-1、114μg·ml-1和>1000μg·ml-...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
亓文宝 李芳 李华楠 黄丽红 和君 穆光慧 罗开健 廖明
【目的】H9亚型禽流感是重要的人兽共患性传染病,该亚型病毒为H7N9亚型和H10N8亚型流感病毒提供了6个内部基因(PB2、PB1、PA、NP、M、NS),并且一直处于动态重组过程中。因此,建立针对H9亚型禽流感的型特异性电化学发光免疫的高通量快速检测方法,加强H9亚型流感的监测,具有重要意义。【方法】用钌联吡啶标记H9亚型AIV的单克隆抗体,用MPI-E型电致化学发光分析系统评价钌标单抗标记效率;用生物素标记H9亚型AIV的多克隆抗体,HABA法检测抗体生物素化的效率;待测抗原与钌标单抗作用1 h后,将此抗原-抗体复合物与通过生物素-链霉亲和素系统固定在磁微球表面的多克隆抗体反应,最后加入反...
[期刊] 水产学报
[作者]
吴美琴 和田竜典 罗雯姝 盛田祐加 平松尚志 原彰彦 钟俊生
运用建立化学发光免疫(chemiluminescence immunoassay,CLIA)检测法,对梭鱼血清中主要卵黄蛋白原(Vg)类型(B类型;VgB)进行定量测定。梭鱼VgBCLIA法按两步法操作进行,使用纯化的梭鱼VgB制备特异型抗血清(a-VgB)。优化抗体浓度和培育时间等检验条件后,检验范围设定为3.91～500ng/mL。卵黄发生期的梭鱼雌鱼血清和雌激素处理后的梭鱼稚鱼血清稀释曲线与纯化的梭鱼Vg曲线平行,而梭鱼雄鱼稀释血清中几乎不发生相应的免疫学反应。对天津原种场养殖的10尾梭鱼血清VgB水平的定量检测结果表明,在雌鱼(9尾)血清中检测到VgB但个体间差异较大,变化范围为3.0...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
胡鲲 黄宣运 姜有声 方伟 朱泽闻 杨先乐
为了快速、灵敏地检测禁用药物环丙沙星在水产品中的残留,建立了基于单克隆抗体的间接竞争酶联免疫法(competitive indirect ELISA,ci-ELISA),并比较了其与高效液相色谱法(High Performance LiquidChromatography,HPLC)在灵敏度、准确性和重现性等方法学参数上的差异。实验结果显示,经过浓缩、净化等前处理过程,ci-ELISA与HPLC的检测灵敏度分别可以达到10μg/kg和1μg/kg,回收率分别为79.28%～92.92%和86.27%～97.32%,相对标准偏差分别在3.21%～8.88%和2.66%～5.52%。前者经济、高效...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张奇瑞 刘小林 徐胜光 范志伟 马焕锦 李宇 洪永忠 阮亚男 张瑞
【目的】施用外源茉莉酸甲酯(MeJA)可以消减作物连作障碍，但是就消减机理而言，已有的研究尚未关注施用外源MeJA后，与作物连作障碍发生密切相关的连作土壤理化性质及土壤酶活性的变化。【方法】以草莓3年连作土壤和红颜草莓为材料，通过观测草莓根际土壤养分含量、土壤pH值、土壤酶活性、单株果数和单果重等指标，研究施用不同浓度（0、10、50、100、200、500 μmol/L）外源MeJA后，草莓根际土壤理化性质及土壤酶活性的变化。【结果】无论是在幼苗期还是开花结果期，相对不施加MeJA的对照处理，MeJA处理的草莓根际土壤有机质、碱解氮、有效磷、有效钾含量在总体上呈降低趋势，且多数达显著程度；MeJA处理的pH值相对比对照处理均有提高，且在幼苗期达到显著程度，提高幅度为3.90% ～ 5.58%；过氧化物酶、多酚氧化酶、蛋白酶和脲酶的活性在总体上相对比对照处理表现提高，且多数达显著程度；MeJA处理相对比对照处理显著降低了草莓株高且降低幅度为22.33% ～ 27.19%，MeJA处理相对比对照处理提高了草莓单株果数且T3处理的提高幅度高达26.25%，不同浓度MeJA处理对草莓单果重的影响呈先上升后下降的趋势，具体处理为100 >50 >10 >0 >200 >500 μmol/L，50 μmol/L处理和100 μmol/L处理较对照显著提高了4.02% ～ 31.60%；施加外源茉莉酸甲酯后，草莓根际土壤养分、pH和土壤酶活性的变化呈现随着MeJA浓度增加而在100 μmol/L或其邻近浓度发生转折的规律。【结论】施用适量外源茉莉酸甲酯后，连作草莓表现出根际土壤养分被较多吸收，土壤酸化程度缓解和土壤酶活性上升，从而使得草莓的单株果数和单果重增加。但是，上述趋势会随着MeJA浓度的增加而发生转折。以上发现有利于指导生产实践应用外源茉莉酸甲酯改善连作草莓根际土壤的理化性质和土壤酶活性，以促进植株生长和缓解连作障碍。
[期刊] 水产学报
[作者]
纪元 刘岩 宫庆礼
为进一步扩大国内养殖河豚鱼消费市场提供依据,应用小鼠生物法监测了我国辽宁、河北、山东,江苏和福建4种养殖河豚鱼(红鳍东方鲀,菊黄东方鲀,双斑东方鲀和暗纹东方鲀4种组织(皮、肉、肝脏和性腺)中河豚毒素(TTX)含量及周年变化,并用酶联免疫法(ELISA)同步检测了山东红鳍东方鲀的皮,肉和肝脏各组及个别卵巢样品。结果4种养殖河豚鱼的皮,肉和肝脏每组平均含毒量均属无毒(小鼠生物法检测结果小于0.5μg/g,ELISA检测结果小于0.8μg/g)。卵巢发现一强毒例,精巢则全部无毒。通过监测,发现养殖河豚鱼组织器官的毒力呈现一定的周年变化。ELISA法与小鼠生物试验测得的结果相符合。养殖河豚鱼皮,肉和精...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐冬青 陈永萱
棉花黄萎病菌 (大丽轮枝菌 VD8)培养液中产生的毒素经纯化后获得电泳纯毒素PLPs,制备PLPs的抗血清 ,建立了检测棉花黄萎病菌毒素的间接ELISA方法。研究结果显示 ,PLPs抗血清的效价为 1∶10 2 40 0 ,最低检测量为 1 5 6ng。间接ELISA法检测显示 ,PLPs的免疫抗血清可以与多种棉花黄萎病菌菌株体外培养液 ,带菌棉籽的培养液 ,以及病棉的叶脉、叶柄及茎杆的榨取液发生特异性的反应 ,而与其他致病菌的培养液 ,健康棉籽的培养液以及健康棉株组织榨取液的反应呈阴性。由此可推知大丽轮枝菌的存在与否。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
曹宇 李海燕 马洪周 胡加付 杨文博 王玉嬿 白钢
本研究采用种子聚合法合成聚苯乙烯磁性微球,并以兔抗松材线虫IgG致敏,制备出能特异性地捕获松材线虫蛋白抗原的免疫磁性微球。以生物素标记抗体为示踪抗体,并结合酶标亲和素检测系统,用于疫木样品的分析。利用该方法对采自不同地区的3种松树,其中松材线虫病木17株、拟松材线虫病木5株和健木3株进行检测。实验结果表明,虽然拟松材线虫病木也呈现了一定的交叉反应,但疫木中松材线虫总检出率为94.1%,灵敏度达到0.1μg.mL-1线虫蛋白抗原。研究表明免疫磁性捕获ELISA技术可直接捕获木屑中的微量线虫抗原,具有简便、快速、准确等优点,是一种实用的松材线虫的快速检疫方法。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
张国军 王高学 潘厚军 石存斌 吴淑勤
研究了酸性α-醋酸萘酯酶染色法在鳜细胞免疫水平检测中应用的可行性。用不同比重的淋巴细胞分离液对鳜外周血中的淋巴细胞进行分离,结果表明比重为1.080的分离液可最大程度地将鳜外周血中的淋巴细胞分离出来。用酸性α-醋酸萘酯酶染色法对分离出的淋巴细胞进行染色,结果显示最佳的染色条件为在pH6.0~6.5的孵育液中37℃孵育90 m in,然后2%甲基绿37℃复染10 m in,酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞胞核被染成绿色而胞浆被染成红色,阴性细胞胞核和胞浆都被绿染。对正常未免疫鳜与嗜水气单胞菌脂多糖和鳜病毒主要衣壳蛋白免疫一周后的鳜外周血淋巴细胞染色计数,结果酸性α-醋酸萘酯酶阳性细胞所占的比例分别为1...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
曾得意 王鸣华 施海燕 李波
【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200000。经酶联免疫吸附反应分析(ELISA)测定,精喹禾灵的抑制中浓度(IC50)为0.03495μg·ml-1,最低检测浓度(IC10)为0.002μg·ml-1,检测范围为0.002～0.5μg·ml-1。其与结构相似的物质几乎没有交叉反应,表明该方法具有很强的特异性,且在水样中的添加回收率为...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
张可文 安钰 胡增辉 杨迪 沈应柏
以合作杨为实验材料,检测了人为机械损伤后2、4、8、12、24、48h损伤叶片与邻近健康植株叶片内脂氧合酶(Lipoxygenase,Lox)活性、脱落酸(ABA)、茉莉酸(JA)含量的变化情况。结果显示:(1)人为损伤不但引起损伤植株体内ABA、JA含量及Lox活性的升高,而且健康植株体内该三种物质的变化与之有相同的升高趋势,表明植物体受伤后,在体内迅速合成信号物质发生防御反应,这种防御反应不仅在受损伤的植株体内发挥作用,还可以释放某种挥发性物质并通过空气传递到邻近健康植株,诱导邻近植株产生抗性;(2)在ABA、JA积累的同时,Lox的活性也升高且趋势一致,Lox与ABA、JA的合成有密切关...
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